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[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
张红星 李茜茜 叶婷 李维琳 李林
利用丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)冰核基因的N-末端(inpn)作为锚定单元(anchoring mo-tif),通过与来自黄杆菌属(Flavobacteriumsp.)的有机磷水解酶基因opd构建融合基因inpn-opd,并连接于假单胞菌表达载体pYMBP,然后导入恶臭假单胞菌(P.putida)野生型菌株AB92019,获得了能在其细胞表面展示有机磷水解酶并具有全细胞酶催化活性的重组工程菌MMBL-opd。SDS-PAGE结果表明,融合基因能表达产生80 ku的蛋白质。重组菌MMBL-opd在无抗性LB固体培养基上能稳定生长,所携带的外源质粒的稳定性达到100%;...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
毛芝娟 王美珍 陈吉刚 杨季芳
2008年3月,浙江省象山港养殖黑鲷暴发了严重的肠炎病情,病鱼肠道肿胀,充满黄色黏液。以ZoBell2216E平板自病鱼肠道黏液分离到4株菌BB01、BB02、BB03和BB04。通过人工感染试验验证了前3株为病原菌,其中BB01菌株96h的半数致死浓度LD50为4.61×104CFU/g鱼体重。3株分离菌革兰氏染色阴性,短杆状,氧化酶试验阳性,氧化葡萄糖,不产气,4℃生长,精氨酸双水解酶阳性,利用麦芽糖、柠檬酸盐,硝酸盐降解阳性,DNA酶、乙酰胺酶阴性;与已发表的恶臭假单胞菌16SrRNA序列的同源性达99%以上;经形态和理化特性鉴定及16SrDNA序列测定,此3株菌同属于恶臭假单胞菌。药敏...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
吕婷 沈霏 邵小虎 李华 江梦天 李林
从苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)野生型菌株YBT-9602基因组中通过PCR扩增到编码一种具有细胞壁锚定活性的芽胞皮层水解酶的编码基因mbA。序列测定和编码产物结构域预测分析显示,mbA编码产物在结构上由1个具有肽聚糖结合性能的N-末端结构域和1个具细胞壁水解酶活性的C-末端结构域组成,具有作为细胞表面展示系统的运载蛋白的潜力。通过体外构建mbA与绿色荧光蛋白基因gfp的融合基因(mbA-gfp)并导入苏云金芽胞杆菌受体菌中进行表达,经对重组菌全细胞免疫荧光显微镜观测、蛋白酶pronase消化试验和SDS处理,证实GFP被成功展示于受体菌细胞表面;经流式细胞仪测...
[期刊] 水产学报
[作者]
樊海平
从患烂鳃病的病鳗分离到多株细菌 ,其中三株经人工感染证实为病原菌 ,经生理、生化等测试鉴定为恶臭假单胞菌。其主要特征为革兰氏阴性、具动力的短杆菌 ;氧化酶、过氧化氢酶、枸掾酸盐利用、精氨酸双水解酶阳性 ;硝酸盐还原 ,鸟氨酸脱羧酶、赖氨酸脱羧酶、明胶酶、尿素酶、V -P反应、吲哚反应阴性。对氟哌酸、妥布霉素、卡那霉素、庆大霉素敏感
关键词：
欧洲鳗鲡 烂鳃病 恶臭假单胞菌
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
薛春生 何瑞玒 肖淑芹 钮梦燕 孙佳莹 冯辉
细胞壁降解酶是植物病原菌主要致病因子之一。提取活体内、外辣椒疫霉菌（ＰｈｙｔｏＰｈｔｈｏｒａ ｃａＰｓｉｃｉ）产生的细胞壁降解酶（ｃｅｌｌ ｗａｌｌ ｄｅｇｒａｄｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅｓ，ｃｗｄｅｓ），对其种类及活性进行分析。结果表明：辣椒疫霉菌在活体内能产生多聚半乳糖醛酸反式消除酶（Ｐｇｔｅ）、果胶甲基反式消除酶（Ｐｍｔｅ）、多聚半乳糖醛酸酶（Ｐｇ）、果胶甲基半乳糖醛酸酶（Ｐｍｇ）和纤维素酶（ｃｘ）５种ｃｗｄｅｓ；在活体外产生Ｐｇ、Ｐｍｇ、Ｐｍｔｅ和Ｐｇｔｅ等４种ｃｗｄｅｓ；Ｐｈ值为５，温度为３０℃和反应３０ｍｉｎ是Ｐｇ和Ｐｍｇ活性的最佳反应条件，Ｐｇｔｅ和Ｐｍｔｅ酶活反应的最佳条件分别是Ｐｈ．．．
关键词：
辣椒疫霉菌 果胶酶 细胞壁降解酶
[期刊] 华北农学报
[作者]
张朝辉 张广 闻亚美 杨艳青 刘亚非 张会 王振河 邱立友
真菌-细菌生物膜(FBB)在制备高效生物肥料接种剂和生防制剂中发挥着重要作用,探讨FBB的形成机理非常有必要。以双孢蘑菇和恶臭假单胞菌UW4为对象,研究了1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)在双孢蘑菇-细菌生物膜形成过程中的作用。采用PDA平板培养双孢蘑菇菌丝,在距离菌丝尖端边缘处涂布UW4菌悬液,双孢蘑菇菌丝生长速度比涂布超纯水的对照组提高10.85%,同时,显微镜和扫描电镜均可观察到UW4能够在双孢蘑菇菌丝表面形成菌膜。使用ACC合成酶抑制剂氨基氧乙酸(AOA)抑制双孢蘑菇菌丝ACC的合成,则UW4不能在双孢蘑菇菌丝表面形成菌膜。此外,UW4 ACC脱氨酶基因缺失突变株也不能形成菌膜。趋化试验发现,UW4可趋化ACC,趋化强度与双孢蘑菇菌丝分泌物中的强趋化物谷氨酰胺和柠檬酸类似,且ACC最适趋化浓度的趋化强度高于谷氨酰胺和柠檬酸最适趋化浓度的趋化强度。而UW4 ACC脱氨酶基因缺失突变株不能趋化ACC。转录组测序分析ACC对UW4基因表达的影响,发现ACC能够引起UW4中趋化和运动相关基因的表达水平发生显著的上调或下调。以上结果表明,ACC是假单胞菌趋化双孢蘑菇的一种强趋化物质,同时是产ACC脱氨酶细菌在真菌菌丝表面形成菌膜的关键信号物质。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
赵学慧 芝吉 曹青 张浩浩 何曾文 邓静 范子秋 马永辉 马金锐 张拽中 崇倩 宋维丽 薛惠文 苟惠天
为探究单核细胞增生李斯特菌噬菌体裂解酶的特性及在食品基质中的初步应用，从NCBI获取李斯特菌噬菌体裂解酶lys039基因序列，分析其生物信息学，并在大肠杆菌中表达纯化，研究其裂解活性、对生物被膜的影响以及在牛奶基质中的应用。结果表明：1）裂解酶Lys039由341个氨基酸组成，分子质量为36.4 ku，等电点为9.81，其结构具有酰胺酶活性，对本实验室22株单核细胞增生李斯特菌、2株无害李斯特菌、1株伊氏李斯特菌以及1株威氏李斯特菌具有裂解活性，但是对葡萄球菌、枯草芽孢杆菌以及沙门菌没有显示出裂解活性。2）随着Lys039浓度的升高，裂解活性逐渐增强，最适温度为30℃，最适pH值为6.0。3)Lys039能显著清除单核细胞增生李斯特菌形成的生物被膜，并且可以降低牛奶中单核细胞增生李斯特菌的细菌数量。综上，Lys039温度耐受范围广、耐酸耐碱且裂解谱较宽，可显著清除生物被膜以及初步应用效果良好。本研究为进一步防治及快速检测单核细胞增生李斯特菌提供理论基础。
[期刊] 华北农学报
[作者]
陈晓林 牛程旺 李保华 李桂舫 王彩霞
通过对酶活性的分析,研究证实苹果树腐烂病菌在活体外和寄主体内均能分泌一系列的细胞壁降解酶:多聚半乳糖醛酸酶(PG)、果胶甲基半乳糖醛酸酶(PMG)、纤维素酶(Cx)、β-葡萄糖苷酶和木聚糖酶。不同碳源培养条件下,腐烂病菌产生细胞壁降解酶的活性及达到酶活性高峰的时间存在显著差异;诱导酶液对苹果愈伤组织具有明显的浸解作用,其中木聚糖为碳源产生的细胞壁降解酶,破坏能力最强。此外,研究发现,腐烂病菌在寄主体内产生细胞壁降解酶的活性变化规律不同,PMG和木聚糖酶在接种后最先被检测到活性显著升高,PMG酶活性于接种后第13天达到高峰,随后活性降低,而木聚糖酶和其他3种酶活性则随接种天数的增加活性不断增强;...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
成勇钢 吴志新 陈孝煊 周聪 李丽鹃
选用60 g左右健康正常的鲤540尾,随机平均分为6组,每组设3个重复。试验设6种处理,即基础饲料中分别添加甲基盐霉素0(对照组)、10、20、40、80、160 mg/kg。研究了甲基盐霉素对鲤白细胞吞噬活性和溶菌酶活性的影响。试验结果表明,饲料中添加10 mg/kg甲基盐霉素对鲤白细胞吞噬活性和溶菌酶活性影响不显著,而添加20~160 mg/kg甲基盐霉素对鲤白细胞吞噬活性和溶菌酶活性有一个从促进到抑制的转变,剂量越高,这个转变越快,并且随饲喂时间的延长,其抑制作用越来越强。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
杨迎青 孟凡 兰波 徐沛东 张顺梁 李湘民
为明确芦笋茎枯病菌细胞壁降解酶的活性及测定条件,利用3,5-二硝基水杨酸法(DNS法)测定7种常见细胞壁降解酶的活性,比较不同底物对3种主要酶的诱导作用,并从温度、时间、pH值等方面优化酶活性的测定条件。结果表明:7种细胞壁降解酶中,多聚半乳糖醛酸酶(polygalacturonase,PG)的活性较高,其次是果胶甲基半乳糖醛酸酶(polymethylgalacturonase,PMG)和β-1,4-内切葡聚糖酶(endo-β-1,4-glucanase,Cx),其他4种酶活性较低。在3种主要细胞壁降解酶中,Cx以1%羧甲基纤维素钠盐(CMC)作为底物的诱导效果较好,PG和PMG以1%柑橘果胶...
关键词：
芦笋 茎枯病菌 细胞壁降解酶 酶活性
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
焦金铖 安晓虎 王妍茏 孟会生 张杰 郝鲜俊 王帅兵
[目的]为了探究不同有机腐熟物与荧光假单胞菌配施在矿区复垦土壤的合理有效施用。[方法]以玉米作为供试作物，采用盆栽试验研究不同有机腐熟物（羊粪、牛粪、猪粪、鸡粪）与荧光假单胞菌配施对复垦土壤氮素形态和酶活性影响。[结果]有机腐熟物配施荧光假单胞菌可以在单施有机腐熟物的基础上有效提高复垦土壤各氮素含量、微生物量碳、氮和酶活性，以鸡粪配施荧光假单胞菌对各氮素量、微生物量碳、氮以及4种土壤酶活性的提升效果最为显著，其中与单施鸡粪处理相比，铵态氮含量显著提高13.12%、微生物量碳显著提高20.21%、蛋白酶活性显著提高16.11%。[结论]腐熟鸡粪与荧光假单胞菌配施效果最好，可作为该菌在复垦土壤中较为合理的施用方式。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张敏 王爱玲 杨军 杜娟 廖新福
【目的】研究甜瓜品种‘黄醉仙’果实采后用1-MCP处理后细胞壁水解酶的变化规律,为提高其商品性、延长其货架期提供参考。【方法】以达到商品成熟度的‘黄醉仙’甜瓜果实为试材,用1μL/L 1-MCP室温熏蒸24h后常温贮藏,以不处理果实为对照,测定果实硬度及β-半乳糖苷酶(β-Gal)、α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(α-Af)、纤维素酶、多聚半乳糖醛酸酶(PG)、果胶甲酯酶(PME)活性,分析‘黄醉仙’果实的软化机制。【结果】‘黄醉仙’果实采后硬度降低,经1-MCP处理后果实的硬度显著高于对照;对照果实β-Gal、α-Af、纤维素酶活性分别在采后1,5,6d达到最高,而1-MCP处理果实β-Gal、α...
关键词：
甜瓜 采后生理 细胞壁水解酶 1-MCP
[期刊] 华北农学报
[作者]
岳东霞 张要武 陈融 许长蔼
采用基因工程的方法,将含有2,4-DAPG基因的质粒pMON5122导入到野生型荧光假单胞菌株中,探索了不同热激时间、不同CaCl2浓度和荧光假单胞菌的不同生长时期对转化子形成的影响;研究了荧光假单胞菌工程菌株对黄瓜枯萎病的防治效果。结果表明,荧光假单胞菌生长到OD约0.53时,用0.025 mol/L CaCl2处理细胞,热激3~4min,转化频率最高;荧光假单胞工程菌株对黄瓜枯萎病的盆栽防治效果达到75.0%,并且能够提高黄瓜出苗率。
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
任建峰 刘志鸿 杨爱国 周丽青
分别对海湾扇贝、虾夷扇贝、栉孔扇贝的 3种血细胞胞内酶 :碱性磷酸酶 (ALP)、过氧化物酶(POD)、酚氧化酶 (PO)进行了免疫细胞化学研究 ,并对血细胞酶反应阳性率作了统计。结果表明 ,3种扇贝血细胞ALP阳性率相差不大 ,海湾扇贝为 4 6 6 %,虾夷扇贝为 4 2 4 %,栉孔扇贝为 36 8%;3种扇贝血细胞POD阳性率相差较大 ,栉孔扇贝阳性率高达 5 0 2 %,海湾扇贝为 4 4 2 %,虾夷扇贝仅为 1 7 2 %。 3种扇贝血细胞PO孵育反应后 ,由于海湾扇贝、虾夷扇贝PO反应活性很低 ,瑞氏染液复染后 ,无法区分阴性、阳性细胞。实验中仅对栉孔扇贝PO阳性率进行...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
唐明 陈辉 郭军战 胡景江
对接种丛枝菌根真菌摩西球囊霉Glomus mosseae的刺槐幼苗进行酸性磷酸酶的细胞化学定位。结果表明,菌根中菌丝和丛枝细胞膜均有酶反应,丛枝顶端细胞膜酶反应更为强烈,同时诱导宿主细胞膜产生酶反应,对照的菌根细胞内入侵菌丝和根细胞间隙中的菌丝无酶反应。酸性磷酸酶能充分发挥水解大分子磷酸盐颗粒及降解丛枝中其它物质的作用,从而通过丛枝-宿主质膜界面供给宿主磷分、水分等营养物质。
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