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[期刊] 水产学报
[作者]
叶雪平 杨广智 罗毅志 陈因良 陈志宏
应用细胞生物反应器微载体悬浮培养法,对草鱼胚胎细胞 CP-80 进行大规模培养,同时增殖草鱼出血病病毒。细胞经培养6天后,细胞量可达到8.4×10~6cells/ml,较始接量(2×10~5cells/ml)提高了41倍。接入草鱼出血病病毒后,经5天培养增殖,毒力达到8.0LgTCID_(50)/0.1ml,较始接毒力(3.75LgTCID_(50)/0.1ml)增加了4.25个对数值。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
曾令兵 高梦雪 蒋勇华
本文对草鱼细胞和病毒的两种大规模培养方式进行了研究和比较。静置培养条件下，细胞生长速度快，２—３天内可形成单层，单层均匀而稳定；旋转培养条件下，细胞７天左右长成单层，细胞单层面积大，病毒培养产量高。这两种培养方式所观察到的细胞病变过程及表征基本相同，病毒的ＴＣＩＤ５０／ｍｌ值稳定在６．０左右。采用这两种培养方式，可实现草鱼细胞和病毒的大规模培养。
关键词：
草鱼,细胞,病毒,大规模培养
[期刊] 淡水渔业
[作者]
刘秋凤 曾令兵 周勇 马杰 范玉顶 张辉 李瑞伟
研究了在悬浮培养系统中使用微载体Cephodex规模化培养草鱼肾脏组织细胞CIK和草鱼呼肠孤病毒(GCRV)的条件并进行了优化。结果表明,Cephodex是一种适合CIK细胞贴壁生长的微载体,搅拌方式(搅拌时间/静止时间)及血清浓度(0%、5%、10%、15%)对CIK细胞在Cephodex微载体上的贴附效率有影响。贴附期以转速35 r/min、每静置45 min搅拌2 min的间歇搅拌方式最佳,8 h后细胞贴附率可达90%以上;细胞贴附期培养基中的血清浓度为5%。当Cephodex微载体用量10 mg/mL、细胞初始接种密度2.5×105cells/mL、连续搅拌速度40 r/min时可获得...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
杨先乐 夏春 左文功
旋转培养优于静置培养,它不仅表现在可形成细胞单层的面积大,单层细胞的产量高,单位面积所需的培养液(维持液)少,而且细胞生长的速度较快,细胞形成单层的时间较短,接种病毒后收获的病毒滴度也相应较高,它适宜于疫苗工厂化生产。
[期刊] 水产学报
[作者]
徐明芳 郭宝江
螺旋藻是高光效自养原核多细胞丝状浮游性水生植物，个体仅３００～５００μｍ，属蓝藻门，颤藻科，螺旋藻属，天然产地在墨西哥和非洲乍得湖，它具有高光能转化率、高蛋白的特点，其光能转化率高达１８％，植物蛋白含量为５０％～７０％以上，净蛋白消化率高达７５％［何...
关键词：
光生物反应器,螺旋藻,大规模培养
[期刊] 水产学报
[作者]
陶会竹 肖宁 赵雨婷 房慧 李槿年
为了建立草鱼肠巨噬细胞的分离培养与鉴定方法,本研究在采用刮除法结合胶原酶IV消化法制备肠黏膜固有层单细胞悬液的基础上,使用鱼类脏器单核细胞分离试剂盒分离肠巨噬细胞,再经差异贴壁法纯化肠巨噬细胞,最后,用含10%胎牛血清和5%草鱼血清的RPMI 1640完全培养液,在28°C、5%CO2条件下原代培养肠巨噬细胞,并通过细胞形态学检查、分子标记检测和功能验证实验加以鉴定。结果显示,每尾鱼(约250 g)肠巨噬细胞的获得量约为3×107个,细胞活率为99.6%,纯度达到95%以上;倒置显微镜观察发现,原代培养4~5 d的贴壁细胞多呈圆形或多边形,体积明显增大,细胞汇合度达到95%;光镜和电镜观察到染色后的贴壁细胞具有巨噬细胞的形态结构特征,贴壁细胞经荧光定量PCR在m RNA水平检测到巨噬细胞特异性标志分子(草鱼巨噬细胞集落刺激因子受体),功能实验证实贴壁细胞具有吞噬功能,脂多糖能够显著提高其呼吸暴发活性。本研究首次成功建立了草鱼肠巨噬细胞的分离培养与鉴定方法,为开展口服疫苗诱导的草鱼肠黏膜免疫应答研究提供细胞模型。
关键词：
草鱼 肠巨噬细胞 分离 原代培养 鉴定
[期刊] 淡水渔业
[作者]
曾令兵 杨先乐 左文功 胡春生 陈艳红
使用一种廉价的培养基 CAS 替代昂贵的 Eagle′S MEM 培养草鱼 CIK 细胞系,细胞生长迅速而稳定,在1.5—2天内可长成汇合单层。CAS 的最佳培养浓度为0.1%。
关键词：
CIK 细胞系 廉价培养基 生长特性
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
王维玲 刘文枝 马杰 周勇 范玉顶 曾令兵
本文研究了在Cephodex微载体悬浮培养系统中规模化培养鲫脑组织细胞(Gi CB)和鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirusⅡ,CyHV-2)的工艺。结果表明,Cephodex微载体适合GiCB细胞的贴壁培养,细胞贴壁期培养基中血清浓度为10%,微载体浓度为6 g/L;细胞初始接种密度为2.5×105cells/m L时,以转速35 r/min,每静置30 min搅拌2 min的间歇搅拌条件贴壁率最佳,8 h后贴壁率可达90%以上;增殖期以45 r/min的连续搅拌速度可获得最佳的细胞生
[期刊] 淡水渔业
[作者]
罗毅志 杨广智 叶雪平
[期刊] 水产学报
[作者]
许淑英 李焕林 邓国成 姜兰
本文报道经筛选的ＧＣＨＶ－８４１毒株在草鱼吻端成纤维细胞系（ＰＳＦ）中进行适应性培养，弱毒驯化，细胞培养弱毒疫苗的制备，安全性观察，不同稀释度和剂量的免疫保护率测定及保存试验。ＧＣＨＶ－８４１毒株在ＰＳＦ细胞中继代驯化至５３代达到减毒目的。筛选得５３～５９代作毒种制备的细胞弱毒疫苗使用安全。用稀释１０～１０４倍的疫苗，０．１～０．３毫升／尾剂量注射草鱼，其免疫保护率均在８５％以上。生产上使用疫苗的适宜浓度和剂量是稀释１０２倍和０．２毫升／尾。冻干疫苗宜保存于４℃以下。较合适的保存期是６个月（４℃）和１８个月（－２０℃）。
关键词：
草鱼出血病,细胞培养,弱毒疫苗,免疫效果
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
唐亚鹏 郭立 杨丽诗 杨育凯 姜松 周发林 江世贵 黄建华
采用一种新型负压式光生物反应器对常用饵料微藻威氏海链藻(Thalassiosira weissflogii)的培养效果进行研究,分析培养过程中藻密度、异养菌与弧菌(Vibrios)数量及氨氮与亚硝酸氮质量浓度变化及相互关系。结果表明:在负压光生物反应器培养下威氏海链藻的生长速度快,培养第4天达到平台期,藻密度最大值可达到1.5×10~6个/mL,最大比生长率可达1.37;弧菌与异养菌数量两者变化趋势相同,分别为(0.19～2.70)×10~4 cfu/mL和(0.071～0.93)×10~6 cfu/mL,藻与细菌表现出相互竞争抑制的效果,在指数增长期藻对细菌抑制较强,特别是对弧菌的抑制,在平台期与衰败期藻对弧菌与异养菌的抑制作用逐渐减弱。藻液中氨氮与亚硝酸氮质量浓度随藻密度增加而上升,最高值分别达到0.24 mg/L和0.37 mg/L,指数增长期藻密度与氨氮和亚硝酸氮质量浓度呈显著正相关(P<0.05)。因此,采用负压式光生物反应器培养威氏海链藻,可以大大缩短培养周期,抑制细菌生长,提高培养效率和藻液质量,但需要在投喂幼体前对藻液进行充分曝气来降低氨氮与亚硝酸氮质量浓度。该反应器是一种适合饵料微藻培养的系统。研究结果为负压光生物反应器作为微藻生物饵料培养系统的应用提供了参考依据。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
姚仕彬 叶元土 蔡春芳 姚林杰 许凡 刘猛 萧培珍 王丽宏
以强化培育后草鱼的肠道粘膜为试验材料,采用不同消化法和离心转速梯度分离肠道粘膜细胞团,分别试验不同培养液与不同CO2浓度组合、胎牛血清浓度及细胞接种浓度时细胞生长效果,并且观察草鱼原代肠道粘膜细胞生长过程,同时采用3种细胞形态观察法、MTT检测法及相关酶活力系统评价细胞培养效果。结果表明:采用机械刮取消化法,分离转速为400 r/min,在使用M199培养液、6%CO2、15%胎牛血清、接种浓度为2×103(个/孔)条件下可批量复制草鱼原代肠道粘膜上皮细胞;细胞增殖过程符合动物原代肠道粘膜上皮细胞生长分化规律,采用荧光倒置显微镜与Giemsa染色法相结合、MTT检测法、AKP酶活力及LDH/M...
关键词：
草鱼 肠道粘膜细胞 分离方法 原代培养
[期刊] 淡水渔业
[作者]
许淑英 李焕林 邓国成 姜兰 白岳强 姜金忠
草鱼出血病细胞培养弱毒疫苗对草鱼的最小免疫量为稀释１０３倍、０２ｍｌ／尾。免疫产生期为疫苗注射后的第２天；免疫保护期达１５个月。弱毒疫苗的保存期为－３０℃３０个月、－１０℃２４个月、４℃８个月、１５—２０℃１个月左右。
[期刊] 水产学报
[作者]
李贤 曾伟伟 王庆 王英英 李莹莹 宋新建 黄琦雯 石存斌 吴淑勤
草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型（ＧＣＲＶⅡ）是当前导致草鱼出血病流行和暴发的主要基因型，本研究拟通过分析ＧＣＲＶⅡ代表株ＨＺ０８在不同鱼类细胞中的增殖情况来筛选ＧＣＲＶⅡ的敏感细胞系。首先以不同浓度的ＨＺ０８株接种草鱼吻端成纤维细胞（ＰＳＦ）和草鱼鳔细胞（ＧＳＢ），以确定病毒接种的最佳浓度；然后以最佳接种浓度同时感染ＰＳＦ、ＧＳＢ、草鱼肝细胞（Ｌ８８２４）、草鱼卵巢细胞（ＣＯ）等１０种鱼类细胞，接毒后每天观察细胞状态，用荧光定量ＰＣＲ（ｑ ＰＣＲ）方法定量分析ＨＺ０８在各种细胞系中的增殖量，并在感染５ ｄ后用间接免疫荧光定性分析病毒在各种细胞中的增殖情况。结果显示，ＨＺ０８感染细胞的最佳接种浓度为１．０×．．．
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
王津津 刘莹 于力 贾鹏 陈兵 史秀杰 郑晓聪 兰文升 何俊强 刘荭
草鱼（Ｃｔｅｎｏｐｈａｒｙｎｇｏｄｏｎ ｉｄｅｌｌｕｓ）性腺细胞系（ｇＣｏ）是中国科学院水生生物研究所在２０世纪７０年代开展草鱼出血病研究时建立的一株细胞系，迄今已传至３００多代，在中国鱼类病毒学研究领域发挥了重要作用。本研究采用形态学观察、细胞生长曲线测定、细胞周期测定、细胞核型分析、细胞凋亡检测、电镜观察等方法，对ｇＣｏ的生长特性及鲤春病毒血症病毒（ｓＶＣＶ）在该细胞中的增殖特性等进行了研究。结果显示，ｇＣｏ细胞的最适生长温度为２５℃，在Ｍ１９９和ＭｅＭ等细胞培养液中均能较好地生长，培养液中最适的胎牛血清浓度为１０％。测定了ｇＣｏ细胞系对ｓＶＣＶ病毒的敏感性，发现与鲤（Ｃｙｐｒｉｎｕｓ Ｃ．．．
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