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[期刊] 中国农业科学
[作者]
古努尔·吐尔逊 米晓云 张壮志 石保新 吐尔洪·依米提 金映红 张妹 程小波 张旭 赵莉 张文宝
【目的】探索细粒棘球绦虫成虫表膜糖抗原的免疫性。【方法】细粒棘球绦虫成虫虫体冻融产物,经蛋白酶K消化,离心上清作为粗提表膜糖抗原,SDS-PAGE鉴定糖抗原成分,硫酸-蒽酮法测定多糖浓度,ELISA、Western-blot和IFA法分别检测免疫小鼠抗血清抗体效价和特异性以及确定抗原在虫体组织中的位置。【结果】SDS-PAGE图谱显示无蛋白条带出现,表明成虫膜蛋白被蛋白酶K完全降解;制备的糖抗原浓度为2.54mg.mL-1,初步确定为糖抗原。ELISA结果显示,随着免疫次数增加,抗血清中特异性抗体(IgG、IgM和IgA)效价也随之升高。与阴性血清相比,IgG、IgM和IgA的P/N值分别为4...
关键词：
细粒棘球绦虫 表膜糖抗原 抗血清
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
刘剑华 刘连瑞 李灵娟 徐立新 严若峰 李祥瑞 宋小凯
[目的]在前期研究中,筛选到了存在于多种鸡球虫间的共同抗原泛素缀合酶结构域蛋白(UCE),本研究进一步分析其免疫原性,评估其对多种球虫感染的免疫保护效果。[方法]提取纯化的堆型艾美耳球虫孢子化卵囊总RNA,用反转录PCR(RT-PCR)技术扩增堆型艾美耳球虫UCE基因(EaUCE),插入pVAX1质粒,构建真核表达质粒pVAX-EaUCE,通过RT-PCR和Western blot检测pVAX-EaUCE在鸡体内的转录和表达情况。经流式细胞术和间接ELISA法检测pVAX-EaUCE免疫后鸡体细胞免疫和体液免疫水平变化,分析其免疫原性。分别采用柔嫩艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫及三者的混合卵囊人工感染雏鸡,观察感染前、后雏鸡体质量变化和排出卵囊减少量,评估其对多种球虫感染的免疫保护效果。[结果]EaUCE基因开放阅读框为444 bp,编码148个氨基酸,BLAST分析显示,柔嫩艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫UCE氨基酸序列同源性均大于95%。pVAX-EaUCE能够在鸡体内成功转录和表达。pVAX-EaUCE免疫后,鸡体的CD_4~+/CD_3~+和CD_8~+/CD_3~+细胞比例显著升高,IFN-γ、IL-2、IL-4、TNFSF15、IL-17D、TGF-β4 mRNA和IgY抗体水平显著升高,表明免疫该质粒能诱导细胞和体液产生免疫反应(P<0.05)。pVAX-EaUCE免疫后,与对照组相比,免疫组鸡体质量显著增加,卵囊产量明显下降,肠道损伤也相应减轻。[结论]鸡球虫共同抗原UCE具有良好的免疫原性,可对多种球虫感染提供部分免疫保护力,有望成为抵抗多种球虫感染的候选抗原。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
赵莉 陈皓斐 张文宝 马正海 张壮志 张旭 古努尔·吐尔逊 米晓云 金映红 薛晶 石保新1
【目的】克隆细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus,E.g)热休克蛋白家族基因Hsp70,在原核细胞中表达、纯化Hsp70蛋白并制备其特异性抗体。【方法】从包囊中分离原头蚴,提取RNA,RT-PCR扩增EgHsp70基因的cDNA,将其构建至原核表达载体pMAL-p2x,转化大肠杆菌BL-21菌株。通过改变诱导温度、IPTG浓度和诱导时间筛选出EgHsp70融合蛋白可溶性表达的最佳条件。并用麦芽糖亲和层析法纯化该蛋白。纯化蛋白经皮下多点注射免疫新西兰白兔制备抗血清,ELISA和Western blotting检测血清效价和特异性。【结果】RT-PCR扩增获得EgHsp70...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
蔡建平 汪志楷 沈永林 李祥瑞 潘红杰
以超声波粉碎法裂解纯化的不同地理株伊氏锥虫(T.evansi)单虫克隆群体,提取可溶性蛋白组分,进行 SDS-PAGE 和 Western blotting 分析,结果表明经 SDS-PAGE 分析,不同株 T.evansi 的可溶性蛋白组分中都包括20～30种蛋白成分,相对分子量(Mr)范围大约为7.9～109.5D,主要蛋白成分的 Mr 约为49～66kD 之间,Wertern botting 分析揭示不同株 T.evansi 间有10～20条为特异抗体所识别的抗原组
[期刊] 中国农业科学
[作者]
丁军涛 陈晓宇 骆学农 王颖 张少华 刘斌 郑亚东 景志忠 才学鹏
【目的】构建表达猪带绦虫六钩蚴TSOL18抗原的重组鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗株。【方法】克隆并改造TSOL18基因,构建重组质粒pYA3341-TSOL18,电转入鼠伤寒沙门氏菌终宿主菌株X4550,体外鉴定重组菌X4550(pYA3341-TSOL18)表达蛋白的免疫原性、稳定性、生长曲线、安全性和小鼠免疫试验进行评价。【结果】酶切鉴定和基因序列测定证实重组质粒构建成功;尿素-SDS-PAGE检测有目的蛋白条带,Western Blot证实该抗原具有免疫原性;重组菌株在体外营养选择压力下可稳定地携带重组质粒传代繁殖;蛋白的表达对重组菌株的生长基本没有影响;小鼠实验证实重组菌安全可靠,二免后E...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陈思颖 黄剑梅 张杨 陈玉凤 丁文傒 刘佳斌 徐立新 严若峰 宋小凯 李祥瑞
[目的]本试验旨在评估重组蛋白rN1T1L2E1和rN1T1L2E1I2作为亚单位疫苗候选抗原的潜力。[方法]应用PCR技术分别扩增NA4-1-TA4-1-LDH-2-EMCDPK-1与NA4-1-TA4-1-LDH-2-EMCDPK-1-IL-2基因,用LaserGene分析基因编码蛋白序列特性;表达重组蛋白rN1T1L2E1和rN1T1L2E1I2,经Western blot分析重组蛋白的免疫原性,采用流式细胞术检测蛋白免疫后鸡脾脏中CD~+_4和CD~+_8 T淋巴细胞的比值,经间接ELISA法检测鸡血清中细胞因子水平和特异性IgG水平以分析重组蛋白的免疫原性。取柔嫩艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫新鲜卵囊经口感染免疫后的雏鸡,统计平均增重、病变计分、盲肠内容物卵囊数等指标,计算各组抗球虫指数(ACI),评估重组蛋白对球虫感染的免疫保护效果。[结果]LaserGene分析显示重组蛋白拥有密集且连续的T细胞表位,抗原指数高;Western blot分析显示重组蛋白可被4种艾美耳球虫的多克隆抗体识别,重组蛋白rN1T1L2E1和rN1T1L2E1I2均可提高机体CD~+_4/CD~+_3和CD~+_8/CD~+_3细胞比例,提高血清中IFN-γ、IL-4、IL-17、TGF-β和IgG抗体水平。以上结果表明重组蛋白具有良好的反应原性和球虫抗原性。免疫重组蛋白后试验组鸡平均增重高于对照组,卵囊产量下降明显,肠道病变程度减轻,抗球虫指数提升。[结论]重组蛋白rN1T1L2E1和rN1T1L2E1I2可作为多价多表位亚单位抗球虫疫苗的候选抗原。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
韩进欢 苟惠天 尚清炎 孙晓林
【目的】明确重组蛋白pGEX-TPO18的免疫保护效果。【方法】提取豆状带绦虫六钩蚴RNA,根据带科其他种属绦虫18 kD基因的保守区设计引物,5′端分别引入EcoR I、Xho I限制性酶切位点,RT-PCR扩增,产物克隆于pMD18-T中进行序列测定,并对序列进行生物信息学分析。将纯化后的PCR产物和质粒pGEX-4T-1分别用EcoRⅠ+XhoⅠ双酶切,回收目的片段,连接后转化至E.coli BL21感受态细胞,挑斑摇菌,通过PCR方法和重组质粒测序技术进行鉴定,将鉴定正确的重组表达质粒命名为pGEX-TPO18。用IPTG诱导表达重组质粒,收集菌体进行SDS-PAGE分析,用GST琼脂...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
窦兰清 傅宝权 牛炳亨 朱兴全
为了明确猪在免疫旋毛虫抗原和感染旋毛虫肌幼虫后的抗体应答反应,应用 ELISA 法,肌幼虫凝胶层析纯化抗原、新生幼虫和成虫可溶性抗原,对用肌幼虫可溶性抗原、肌幼虫 ES 抗原、成虫可溶性抗原、成虫 ES 抗原、灭活新生幼虫抗原制备的免疫原免疫后猪血清抗体以及攻击感染后的猪血清抗体进行了检测。用肌幼虫纯化抗原检测时,感染猪在感染后7d 抗体即出现变化,第14～21d 时上升较快,第28d 达最高值,抗体可持续6个月以上;各免疫组在第1次免疫后抗体滴度有不同程度升高,第2次免疫后上升较快,其中肌幼虫可溶性抗原及其 ES 抗原免疫组抗体应答较其它几种抗原免疫组强。用成虫可溶性抗原检
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
唐雨德 顾志香 雷永红 翟春生 刘玉 郁兴明
重组蛋白的复性是基因工程下游研究的难题和重点。本文应用夹心 ELISA 测免疫活性及变性与非变性 SDS-PAGE 测重组抗原单体和非单体的方法来评价不同复性条件.透析法复性,透析液为含2mg·kg~(-1)尿素、80μmol/PEG4000,0.1/0.1mmol·L~(-1)GSH/GSSG 的 pH 8.0的0.05mg·kg~(-1)PB,以静置缓慢透析为佳,上述条件任意缺一或快速透析,免疫活性下降,二聚体或多聚体明显增加;稀释法复性,复性液为上
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
贾万忠 田广孚 张军 程小红 刘金凤
利用 SOS-PAGE 对不同源棘球蚴囊液抗原的多肽组成进行了分析,旨在为棘球蚴病免疫诊断抗原的分离纯水奠定基础,为虫种内株的鉴定提供依据.结果表明,绵羊棘球蚴囊液抗原共有多肽带9条,其中66和59kD 多肽带为主带;40kD,34.5kD,33kD,24.5kD 和14kD 多肽带次之.牛囊液抗原共有多肽带13条,66和59kD 多肽带也为主带,24.5kD 多肽带次之.而人包囊液抗原共有多肽带14条,66kD,40kD,
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
刘金明 王美 叶萍 傅志强 蔡学忠 石耀军 陈永军 林矫矫 林邦发 施幅恢
免疫刺激复合物(ISCOM)是 Morein 创立的一种疫苗免疫载体,其中的主要佐剂成分是 Quil A(皂素的一种成分).本研究首先用日本血吸虫中国大陆株成虫可溶性租抗原(SWA)作为免疫抗原,按改进方法结合皂素制备 ISCOM,对其在小鼠体内诱导的免疫保护力和 SWA 在 FCA/FIA、蜂胶二种佐剂条件下的免疫保护力进行了比较研究,然后对不同剂量 SWA-ISCOM 的免疫效果进行考察;最后对重组日本血吸虫中国大陆株28kD GST(rSj28GST)-ISCOM 在小鼠体内所诱导的免疫保护力进行观察.结果表明 IS-COM 在进一步应用于各种基因工程苗方面有研究价值。
[期刊] 林业科学
[作者]
白钢 李海燕 马洪周 王玉嬿 杨文博 张奇
利用抗松材线虫血清建立在疫木切面上直接进行免疫组化染色检测松材线虫抗原的方法。ELISA和免疫斑点印迹的结果表明:该方法对松材线虫具有较好的特异性,可以检测出木材表面0·1μg的线虫抗原,显示了较好灵敏度。自然感染松材线虫的黑松疫木免疫组化的染色结果表明:该方法可以清晰地检出管胞处松材线虫蛋白抗原的存在。
关键词：
松材线虫 线虫分析 免疫组化 ELISA
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
顾有方 倪兆朝 沈永林 盛维银
研究了来源水牛、黄牛体内的肝片吸虫虫体抗原的氨基酸组分,并对黄牛体内虫体进行先超声裂解后冷浸或先冷漫后超声裂解处理以比较其抗原氨基酸组份的变化。结果表明先超声裂解后冷浸的脱脂和未脱脂的水牛、黄牛虫体抗原氨基酸含量分别为374.053mg·dL~(-1),396.318mg·dL~(-1)和119.958mg·dL~(-1),243.341mg·dL~(-1),水牛虫体氨基酸明显高于黄牛虫体。而先冷浸后超声裂解处理的脱脂和未脱脂的黄牛
[期刊] 水产学报
[作者]
王健楠 赵丽丽 刘立月 连科迅 李一经 葛俊伟 刘敏
利用RT-PCR方法扩增出IPNV-ZYX分离株主要结构蛋白VP2的抗原表位区基因(616bp),命名为IPNV VP2 COE,将其克隆到pCold TF表达载体中构建重组质粒pCold TF-VP2COE,在大肠杆菌BL21(DH5α)感受态表达,经SDS-PAGE电泳分析,表达蛋白约78 ku,用镍离子亲和层析柱纯化该蛋白,制备抗血清,间接ELISA结果显示,IPNV(ATCC VR-1318)细胞培养物与鼠抗VP2 COE蛋白血清发生特异性反应,效价为1∶12 800;间接免疫荧光结果显示,鼠抗VP2 COE血清可与黑龙江某渔场已知感染IPNV虹鳟肝组织产生特异性的荧光,以上两项结果表...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陶建平 沈永林 李文超 辛玲 戴亚斌
用平均增重和病变记分或卵囊减少率等为试验指标,对11株巨型艾美耳球虫的免疫原性进行了分析。结果显示,各虫株每鸡免疫感染100个卵囊后,不仅对攻击1×105个同源株卵囊均产生大于70%的病变记分降低率,而且使每鸡攻击1×104个同源株卵囊时的卵囊产量均减少97.42%以上,在各虫株间无显著差异。各虫株对异源株的交叉免疫力程度不一致,美国株对国内10个虫株的卵囊减少率为20.09%~82.44%,仅3株大于75%,而国内10个虫株对美国株的卵囊减少率为27.43%~95.26%,有5株大于75%;扬州株、南通株、凤阳株、龙岩株、广州株和上海株间的相互卵囊减少率为-1.72%~96.67%,其中南通...
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