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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
吕东 李春霞 展蔷 都贝贝 张计育 章镇 渠慎春
利用RACE和电子克隆技术相结合的方法从野生红肉苹果(Malus pumila var.niedzwetzkyana Schneid)中克隆了1个MYB类转录因子的全长序列,利用生物信息学方法对其进行分析,同时进行了亚细胞定位分析以及表达特性的研究。结果表明:该基因全长为1 020 bp,编码340个氨基酸;其核苷酸序列与葡萄MYBPA1同源性最高,命名为MpMYBPA1,其N端含2个约有55个氨基酸组成的MYB特征结构域。亚细胞定位分析结果表明MpMYBPA1蛋白定位在细胞核中。荧光定量PCR结果表明:MpMYBPA1基因在根、茎、叶、果皮中均有表达,果皮中表达量最大。在20℃处理4 d后该...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王意程 王楠 许海峰 张宗营 姜生辉 张静 曲常志 陈学森
【目的】细胞分裂素是调控植物花青苷合成的重要激素,从新疆红肉苹果杂种一代优系‘紫红3号’中克隆得到分裂素响应基因Md MYB308,研究其在细胞分裂素调控苹果花青苷合成中的作用,为进一步完善红肉苹果育种的理论与技术体系提供参考。【方法】以红肉苹果‘紫红3号’(新疆红肉苹果与‘富士’杂交1代)的红色幼嫩叶片为外植体诱导的红色愈伤组织为试材,设计引物利用PCR克隆Md MYB308,对其进行生物信息学分析;并用不同浓度细胞分裂素处理,采用荧光定量PCR分析Md MYB308及花青苷合成相关基因的表达;通过酵母
[期刊] 西南农业学报
[作者]
郑乾明 王小柯 马玉华
【目的】检测果实甜菜红素含量，克隆HpCYP76AD1基因并分析其表达模式，分析基因表达与甜菜红素含量之间的关系，为研究红肉火龙果果实甜菜红素积累的分子机制和改良果实营养价值提供理论依据。【方法】利用比色法测量果实成熟期间甜菜红素的相对含量，基于果实转录组测序数据结合RT-PCR克隆获得HpCYP76AD1基因，分析该基因编码蛋白质的理化性质和系统进化关系，通过qRT-PCR检测HpCYP76AD1基因在果实成熟期间的表达模式。【结果】红肉火龙果果实成熟期间甜菜红素快速积累，成熟果实（授粉30 d）中的含量约是授粉20 d的150倍。HpCYP76AD1基因的开放读码框长度为1 521 bp，编码长度为 506个氨基酸的蛋白质序列。HpCYP76AD1蛋白的相对分子量为57.5 kDa，预测等电点为8.86。HpCYP76AD1氨基酸序列与梨果仙人掌OfCYP76AD8相似度最高，达89.96%。HpCYP76AD1与甜菜BvCYP76AD1、紫茉莉MjCYP76AD3和紫色苋菜花AcCYP76AD2属于CYP76AD1家族α类，HpCYP76AD1在果实甜菜红素积累的两个羟基化反应中均具有催化活性。HpCYP76AD1基因在果实成熟期间显著上调表达，与果实甜菜红素的积累模式正相关。【结论】红肉火龙果细胞色素P450家族成员HpCYP76AD1基因属于α类，可能在甜菜红素积累的两步羟基化反应中均具有催化活性；在果实成熟期间大幅上调表达，参与果实甜菜红素积累。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王延玲 张艳敏 冯守千 田长平 王海波 刘遵春 宋杨 陈学森
【目的】克隆新疆红肉苹果[Malus sieversii f.neidzwetzkyana(Dieck)Langenf]MYB10转录因子基因,进行序列分析和原核表达研究,为进一步探索红色发育机理及选育新的栽培红肉苹果奠定理论基础。【方法】根据MdMYB10基因编码区设计1对特异引物,以新疆红肉苹果叶片总RNA为模板,通过RT-PCR获得1个约700bp的cDNA片段,T/A克隆后进行序列测定,并对该序列进行分析。随后将该基因片段连接到原核表达载体pET-30a(+)中,构建融合表达质粒,转化到E.coli BL21(DE3)中进行表达。【结果】测序结果显示,RT-PCR获得的cDNA全长包含...
[期刊] 华北农学报
[作者]
张伟 姬明丽 郭前进 千智斌
为了研究红鳍东方鲀ＳＲＥＢＰ－１和ＳＲＥＢＰ－２基因的功能及在脂肪代谢中的分子机制，从红鳍东方鲀脂肪组织提取总ＲＮＡ，反转录获得ｃ ＤＮＡ模板，利用设计的引物ＰｃＲ扩增获得ＳＲＥＢＰ－１和ＳＲＥＢＰ－２开放阅读框（ＯＲＦ），ＳＲＥＢＰ－１基因ＯＲＦ区的ｃ ＤＮＡ序列长度为３ ３３０ ＢＰ，编码１ １０９个氨基酸，ＳＲＥＢＰ－２基因ＯＲＦ区的ｃ ＤＮＡ序列为３ ４４４ ＢＰ，编码１ １４７个氨基酸。实时荧光定量ＰｃＲ检测ＳＲＥＢＰ－１基因在红鳍东方鲀不同组织中的表达特征，结果表明，ＳＲＥＢＰ－１在脑组织中表达丰度最高，其次为眼、脂肪组织、肠、鳃、脾脏、心脏及肝脏，在肌肉中表达丰度最低。将ＳＲＥＢ．．．
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
鹿游 马超 孟冬 李天忠
为明确miRNA沉默靶基因的调控机理,克隆AGO1蛋白基因并了解其作为沉默复合物核心成员在miRNA沉默通路中的作用,本研究在分析‘金冠’苹果基因组的基础上,以‘金冠’叶片cDNA为模板,克隆获得了3 234bp AGO1基因全长,蛋白分子质量为119ku,等电点为9.41,包含2个保守的AGO蛋白特征结构域:PAZ和Piwi区,命名为MdAGO1。苹果‘金冠’不同组织MdAGO1基因及13种与发育相关miRNA实时定量PCR分析结果表明:1)MdAGO1在花和果实中表达量均高于叶片;2)miRNA在果实和花中表达量均较高,叶片相对较低。MdAGO1与13种发育相关miRNA表达一致,在苹果中...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
徐凤华 宋琪 邢晋祎 孙炜涵
【目的】克隆肉鸡MSMO1(Methylsterol monooxygenase 1)基因序列,并分析其表达模式,为研究MSMO1基因的功能奠定基础。【方法】利用RT-PCR技术克隆肉鸡MSMO1基因,采用生物信息学方法分析其蛋白质结构,并用定量PCR技术检测MSMO1基因在组织间的表达差异。【结果】肉鸡MSMO1基因的c DNA序列长度为1404 bp,编码296个氨基酸;MSMO1蛋白145274位氨基酸序列残基存在FA-hydroxylase结构域,为亲水蛋白。进化树分析表明,肉鸡MSMO1氨基酸序
关键词：
肉鸡 MSMO1基因 克隆 表达模式
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
郑琦 蔡佳 汤菊芬 鲁义善 吴灶和 简纪常
通过同源克隆和ＲＡＣＥ ＰＣＲ技术从红笛鲷脾脏中鉴定得到了脂多糖诱导的肿瘤坏死因子（ＬＩＴＡＦ）基因，命名为Ｌｓ－ＬＩＴＡＦ。该基因Ｃ ＤＮＡ全长８１５ ｂＰ，开放阅读框为４４７ ｂＰ，编码１４８个氨基酸，理论分子量为１５．７ ｋｕ。序列分析显示Ｌｓ－ＬＩＴＡＦ蛋白具有保守的ＬＩＴＡＦ结构域，其中包含一个ＣＸＸＣ基序与一个（Ｈ）Ｘ ＣＸＸ Ｃ基序。Ｌｓ－ＬＩＴＡＦ蛋白与其他鱼类ＬＩＴＡＦ蛋白相似度较高，在系统进化树中也与其他鱼类该蛋白聚为一支。Ｌｓ－ＬＩＴＡＦ基因在健康鱼体多种组织均有表达，其中鳃、脾脏、皮肤与头肾的表达量较高；且哈氏弧菌刺激鱼体后，Ｌｓ－ＬＩＴＡＦ在脾脏和头肾中的表达量显著上．．．
关键词：
红笛鲷 LITAF基因 克隆 表达分析
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
夏惠 张敏 马锋旺
【目的】克隆苹果GDP-甘露糖焦磷酸化酶(GDP-mannose pyrophosphorylase,GMP)、GDP-甘露糖-3′,5′-表异构酶(GDP-mannose-3′,5′-epimerase,GME)和GDP-1-半乳糖磷酸酶(GDP-L-galactose-1-phosphate phosphorylase,GGP)的基因序列并分析其表达特性,探讨GMP、GME和GGP基因在抗坏血酸(Ascorbic acid,AsA)合成过程中的作用。【方法】以‘嘎啦’苹果幼果为材料,分别运用RT-PCR和PCR法克隆GMP、GME和GGP基因的cDNA和gDNA全长序列,对其序列及编码产物...
[期刊] 华北农学报
[作者]
靳芹 代培红 刘超 胡芹华 刘晓东 李月
为了筛选出苹果中的抗冻负调控基因,培育抗冻苹果新品种奠定基础,通过生物信息学的方法从苹果中克隆了4个具有完整开放阅读框的CBF基因,命名为Md CBFL1Md CBFL4。通过与其他植物CBF/DREB蛋白氨基酸序列的多重比对发现,这4个蛋白具有CBF蛋白典型的结构特点,即1个AP2结构域,2个特征序列,即核定位信号区PKRPAGRTKFRETRHP和DSAWR保守序列。从系统进化树中可以看出苹果Md CBFL1Md CBFL4蛋白与At DREB1蛋白聚在A-1亚族,推测它与拟南芥A-1转录因子功能相似
[期刊] 中国农业科学
[作者]
宋杨 张艳敏 刘美艳 王传增 刘金 冯守千 王延玲 陈学森
【目的】克隆短枝型苹果(Malus domestica Borkh.)的MdRGL基因,并对其进行生物信息学分析,构建该基因的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白,为明确短枝型苹果MdRGL基因与短枝芽变特性之间的关系奠定基础。【方法】采用同源克隆法,以短枝型苹果叶片总RNA为模板,通过RT-PCR获得短枝型苹果MdRGL的cDNA片段,T/A克隆后进行序列测定。将克隆到的短枝型苹果MdRGL克隆到表达载体pGEX-4T-1上,构建融合表达载体pGEX-4T-MdRGL,转化到大肠杆菌BL21(DE3)并诱导表达。【结果】从短枝型苹果中克隆到5条MdRGL基因:MdRGL1a/b、MdR...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
殷姗姗 李茂福 王华 李洋 张秋雷 金万梅 李天忠
为研究草莓中ＳＣＦ复合体的功能，以栽培草莓品种‘７４’为试材，采用同源克隆的方法分离出２个ＳＫＰ１基因。这２个基因核苷酸序列全长均为５１９ｂＰ，核苷酸序列相似性为９８．４６％，氨基酸序列相似性为９８．８４％，并具有特殊的‘ＧＶＤＥＤ’尾巴结构，分别命名为ＦａＳＫＰ１－１ａ和ＦａＳＫＰ１－１ｂ（基因登录号分别为ＫＵ９７５０５７和ＫＵ９７５０５８）。ＲＴ－ＰＣＲ和ＤＣａＰＳ分析发现ＦａＳＫＰ１－１ａ和ＦａＳＫＰ１－１ｂ在草莓根、茎、叶、花托、花粉、花柱、果实中均高表达，在花瓣中表达量低。上述结果表明ＦａＳＫＰ１－１可能在草莓ＳＣＦ复合体的形成过程中发挥重要作用。
[期刊] 草业科学
[作者]
杜超 孙晓梅 王迎春 郑琳琳
MYB转录因子家族在植物抵抗非生物胁迫过程中发挥着重要的调控作用。基于转录组测序数据,从珍稀泌盐盐生植物长叶红砂(Reaumuria trigyna)中克隆一个MYB转录因子基因,命名为RtMYB1。RtMYB1基因具有780bp的ORF(open reading frame)序列,编码236个氨基酸残基组成的蛋白。RtMYB1能够被盐、冷、高温、紫外照射(UV)和干旱(PEG)5种非生物胁迫诱导表达,这表明RtMYB1基因可能参与长叶红砂响应非生物胁迫的调节途径。本研究为深入了解长叶红砂的抗逆机理及发掘优异的抗逆基因奠定了基础。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
许海峰 刘静轩 王意程 左卫芳 曲常志 王得云 张静 姜生辉 王楠 陈学森
【目的】研究新疆红肉苹果杂种一代优系‘红脆１号’液泡膜葡萄糖转运蛋白基因ＭｄＶＧＴ１生物学信息、表达水平及其在糖代谢中的功能，旨在为进一步完善功能型苹果育种的理论与技术体系提供参考。【方法】以新疆红肉苹果杂种一代优系‘红脆１号’为试材，克隆ＭｄＶＧＴ１，对其进行生物信息学分析；并采用荧光定量ＰＣＲ分析该基因在不同组织及不同发育时期的表达，分析‘嘎啦’组培苗中该基因在葡萄糖诱导下的表达，通过酵母双杂交验证其互作关系，并通过原核诱导获得重组蛋白。【结果】在‘红脆１号’中克隆获得ＭｄＶＧＴ１全长，测序发现其包含１ ５０６ ｂＰ完整的开放阅读框，编码５０１个氨基酸，预测其编码蛋白质分子量为５３．１６ ．．．
[期刊] 林业科学
[作者]
曹晏彬 柏素花 戴洪义
丙二烯氧化物环化酶(AOC)是茉莉酸生物合成途径中一个关键酶,在植物抗逆境反应中发挥重要作用。用电子克隆结合RACE技术,从苹果‘嘎拉’中克隆并鉴定1个AOC编码基因,命名为MdAOC1。MdAOC1基因开放阅读框长759 bp,编码1个由252个氨基酸组成的蛋白,该蛋白包含1个保守的Allene_ox_cyc结构域,并带有1个N-末端叶绿体前导肽。同源性分析表明,MdAOC1蛋白与水稻、拟南芥等AOC蛋白具有高度的氨基酸序列相似性,其三级结构模型是由3条链组成的疏水结合空穴,同拟南芥AOC2的蛋白三级结构相似。利用实时荧光定量RT-PCR方法测定MdAOC1基因的表达情况,发现MdAOC1具...
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