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[期刊] 西南农业学报
[作者]
郑苗苗 张令昂 焦战战 邵淑丽
采用LNAS(低氮天冬酰胺-琥珀酸)培养基添加方式,对红平菇HP1(Pleurotus djamor)进行培养,检测不同时间培养液对不同底物的氧化作用,作为锰过氧化物酶的产生及活性测定的主要依据。在含Mn2+的培养液添加底物木屑后锰过氧化物酶最大酶活为358.7 U·L-1,提取经优化筛选后的锰过氧化物酶粗酶液,对4种具有不同化学结构的染料进行了脱色试验。结果表明,对异戊二烯类番红在6 h时脱色率为82.6%。因此,显示出红平菇HP1锰过氧化物酶对番红染料脱色具有较大的应用潜力,进而对废水处理具有更好的应用前景。采用RT-PCR和RACE技术,从红平菇HP1菌株中获得编码锰过氧化物酶基因的c ...
[期刊] 林业科学
[作者]
张玉龙 池玉杰 冯连荣
【目的】研究白腐菌偏肿革裥菌(Lenzites gibbosa)所产锰过氧化物酶(MnP)纯酶的序列特征、酶学性质及其对染料的脱色能力,为其应用于木质素降解、染料脱色奠定基础。【方法】将纯化后的样品经SDS-PAGE检测后获得的唯一L.gibbosa MnP条带切割,采用Nano液相色谱-电喷雾串联质谱法联用(Nano LC-ESI-MS/MS)多肽测序技术对蛋白氨基酸序列进行测定。利用该SDS-PAGE图谱,建立蛋白分子量与迁移率的标准直线,从标准直线上求出MnP纯酶样品的表观分子量;参照酶活测定方法检
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
吕聪 曹福祥 董旭杰
利用茯苓Poria cocos在液体发酵条件下产锰过氧化物酶,并对其用于染料结晶紫降解脱色,确定其最适工艺条件.结果表明:茯苓产的锰过氧化物酶对染料结晶紫的最适脱色条件为H2O2浓度0.15 mmol/L,pH5.0,反应温度40℃.
关键词：
茯苓 锰过氧化物酶 结晶紫 脱色
[期刊] 林业科学
[作者]
于存 池玉杰
锰过氧化物酶(MnP)广泛存在于白腐菌中,是降解木质素的主要酶系。首先对采自长白山的一色齿毛菌菌株CB1降解木质素的过氧化物酶进行检测,结果表明一色齿毛菌可产生MnP,但不产生木质素过氧化物酶(LiP);Mn2+不是其产生MnP的必要因子,在LNAS培养基中加入木屑为底物的条件下,一色齿毛菌MnP最大酶活为18.4 U·L-1。在酶活检测的基础上,为了深入研究MnP降解木质素的功能,根据已知的MnP基因保守区序列设计引物,以一色齿毛菌菌株CB1的基因组DNA为模板,采用染色体步移技术,克隆到该菌株一个编码MnP1蛋白的全长DNA基因(GenBank登录号JQ782578.1),命名为Cu-mn...
[期刊] 林业科学
[作者]
池玉杰 闫洪波
White rot fungus Pleurotus djamor H1 was stilly cultured at 28 ℃ under 4 different kinds of LNAS culture solution,the extracellular enzyme solutions were sampled at different interval,O.D.values of the solutions,representing manganese peroxidase(MnP),laccase and lignin peroxidase(LiP)activities,were...
[期刊] 水产学报
[作者]
唐蕾 傅明骏 赵超 邱丽华 刘文生 江世贵
为了研究含硒谷胱甘肽过氧化物酶（ｓｅｌｅｎｉｕｍ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ，ｓｅｇｐｘ）在斑节对虾应激反应和卵巢发育中的作用，实验以斑节对虾肝胰腺转录组数据中筛选获得的ｓｅ－ｇｐｘ基因（ｐｍ ｓｅ－ｇｐｘ）片段为基础，利用ｒａＣｅ技术获得ｐｍ ｓｅ－ｇｐｘ基因的Ｃ ｄｎａ全长，并对其进行了生物信息学分析；利用荧光定量ｐＣｒ技术研究了ｐｍ ｓｅ－ｇｐｘ在斑节对虾不同组织、卵巢发育各期、肝胰腺组织在ｐｈ９、硫酸铜（Ｃｕ～（２＋））应激下的相对表达量和变化趋势。结果显示，ｐｍ ｓｅ－ｇｐｘ基因Ｃ ｄｎａ全长为９５９ ｂｐ，５＇非编码区（ｕｔｒ）长１０ｂｐ，开放．．．
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
陈虎 贾婕 罗群风 吴东山 杨章旗
克隆获得马尾松Pinus massoniana PmGPX基因,进行生物信息学分析以及在不同抗虫材料表达模式分析。在前期马尾松转录组测序获得该基因片段基础上,用cDNA末端快速扩增(RACE)技术获得基因全长,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)技术分析该基因在不同抗虫材料中的表达模式。克隆获得基因cDNA全长序列,命名为PmGPX。该基因包含741 bp开放阅读框,编码246个氨基酸。序列分析表明:该基因具有GPX家族典型的保守结构域,等电点PI 8.29,蛋白分子量27.08 kDa,与针叶植
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张孜宸 隋欣 高飞 周宜君 陈静 刘楠
【目的】克隆盐芥谷胱甘肽过氧化物酶(GPXs)基因ThGPX8,对其进行序列分析,构建原核表达载体,为进一步研究ThGPX8的结构和功能奠定基础。【方法】以盐芥为材料,利用RT-PCR技术获得其ThGPX8基因的全长cDNA序列;应用生物信息学手段对该基因编码的蛋白结构和系统进化关系进行分析;构建原核表达载体pET-ThGPX8,转化E.coli BL21(DE3),进行IPTG诱导表达、SDS-PAGE检测和Western blotting鉴定。【结果】获得的ThGPX8基因序列的开放阅读框(ORF)为504bp,编码167个氨基酸,具有GPXs的特征结构域,不是跨膜蛋白;其二级结构主要由无...
关键词：
ThGPX8 盐芥 基因克隆 原核表达
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
乔枫 耿贵工 曾阳 金兰 谢惠春
为探索青海枸杞抗坏血酸过氧化物酶(APX)基因信息,并对枸杞APX基因进行生物信息学分析以及基因表达研究,通过RT-PCR和RACE方法克隆枸杞APX基因,利用生物信息学软件预测基因结构,采用实时荧光定量PCR方法分析基因表达的变化。结果显示:枸杞APX基因的全长cDNA序列为1 047bp(Genbank No.KX981601),命名为LcAPX基因。该基因含有1个753bp的完整开放阅读框(ORF),编码250个氨基酸,包含亚铁血红素结合位点、底物结合位点和K~+结合位点。枸杞LcAPX与茄科植物的APX蛋白聚为一类,说明两者的亲缘关系较近。LcAPX基因在枸杞的成熟叶中表达量最高,花中表达量最少。其在聚乙二醇(PEG)、氯化钠(NaCl)胁迫下诱导表达,显示LcAPX在枸杞抗干旱和抗盐逆境过程起一定作用。
[期刊] 华北农学报
[作者]
王润豪 于永昂 胡海燕 丁超杰 李红民 牛晴晴 李成伟
为了研究非生物胁迫处理下小麦抗坏血酸过氧化物酶(APX)的作用,以小麦百农207为试验材料,根据小麦APX基因序列,采用RT-PCR技术对小麦APX基因进行克隆、生物信息学分析及组织表达模式分析;对小麦进行非生物胁迫处理,分析小麦APX基因在环境胁迫条件下的表达特征。结果表明,TaAPX基因包含876 bp的开放阅读框,编码1个291个氨基酸组成的蛋白质,分子质量为31.73 ku,等电点为7.74,分子式C_(1417)H_(2246)N_(394)O_(423)S_5,TaAPX可能是两性蛋白,无信号肽,为非分泌蛋白。蛋白质序列比对和进化树分析表明,小麦与大麦的APX编码蛋白的氨基酸全长序列相似性最高达到97.25%,亲缘关系最近。实时荧光定量PCR分析表明,TaAPX在小麦幼根、茎、茎节、幼叶、叶鞘、雌蕊和雄蕊中均有表达,其中在幼叶中表达量最高,其次是茎、茎节,在幼根、叶鞘中表达量较低,在雌、雄蕊中表达量最低。在非生物胁迫条件下该基因受干旱、低温胁迫表达增强,而在NaCl胁迫和渗透胁迫下表达降低。综上,获得了TaAPX基因的编码区序列,分析发现其响应干旱、低温和盐等逆境胁迫,提示该基因可能与小麦抗逆境机制密切相关。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
张晗晗 徐燕 纪德华 陈昌生 许凯 谢潮添
谷胱甘肽过氧化物酶（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ，ｇｐｘ）是植物活性氧（ｒｏｓ）清除酶促系统的重要成员之一，在植物逆境胁迫应答中发挥着重要作用。本研究以坛紫菜（ｐｙｒｏｐｉａ ｈａｉｔａｎｅｎｓｉｓ）为研究材料采用ｒａＣｅ技术克隆获得了一条坛紫菜的ｇｐｘ全长基因序列，命名为ｐｈｇｐｘ（ｇｅｎ Ｂａｎｋ收录号：Ｊｘ６７３９０８）。该基因序列全长１０２７ Ｂｐ，包含５５５ Ｂｐ的开放阅读框，所编码的多肽包含１８４个氨基酸，分子量为１９．９ ｋ ｄ，等电点为８．７６。多序列比对和系统进化树分析结果表明ｐｈ ｇｐｘ属于植物ｇｐｘ基因家族成员。基因表达水平的ｑ ｐＣｒ分析结果表明ｐｈ ｇ．．．
[期刊] 华北农学报
[作者]
程华 李琳玲 王燕 程水源
利用RACE技术从银杏中克隆到过氧化物酶基因(GbPOD1,FJ599670)的cDNA全长。GbPOD1基因编码序列为1 092 bp,编码一条长为329Aa的成熟阴离子POD蛋白,预测成熟蛋白分子量为35.8 kDa,等电点为8.10。Southern杂交及进化树分析结果表明,GbPOD1和其他物种的POD源自于相同的祖先,属于植物类型III的POD同工酶编码基因,为多基因家族。RT-PCR分析表明,GbPOD1在银杏的根、茎、叶和果中都有表达,在茎中的相对表达量最高,其次为根和果,而叶部位表达水平最低。植物激素MeJA、金属离子Cu和Cd以及MV和WOU的处理能显著诱导GbPOD1基因的...
关键词：
银杏 POD1基因 表达分析
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
粟霞 张军科 马锋旺
根据Genbank上已报道的烟草、辣椒、龙眼和杨树4种植物的抗坏血酸过氧化物酶基因的保守区域设计兼并引物,利用RT-PCR和RACE法对皇家嘎拉苹果叶片APX基因进行克隆、分析。结果表明,皇家嘎拉苹果叶片APX基因片段长度为694 bp,与GenBank中已登陆的富士苹果果实、皇家嘎拉苹果花芽、草莓及Rosa hybridcultivar等的APX cDNA的同源性分别为97%,97%,84%和84%。
关键词：
苹果叶片 APX基因 过氧化物酶
[期刊] 华北农学报
[作者]
杨尚谕 李立芹 陈倩 卓维 刘仑 鲁黎明
为烟草过氧化物酶基因的功能及结构研究奠定理论基础,采用同源克隆的方法,从烤烟品种K326中克隆出了过氧化物酶基因Nt POD1的c DNA全长,并进行了生物信息学分析;同时,运用q RT-PCR的方法,分析了该基因的组织器官及逆境胁迫表达模式。结果显示,该基因c DNA全长981 bp,编码326个氨基酸残基,预测分子量为37.19 ku,等电点为8.89。生物信息学分析表明,该蛋白是一个亲水性蛋白,结构域中含有4个保守的二硫键和2个保守的钙结合位点,可能定位在细胞外(包括细胞壁),属于植物血红素依赖性过氧化物酶超家族的Ⅲ类分泌氧化酶,与渐窄叶烟草POD42、美花烟草POD42、马铃薯POD42等具有很高的同源性。该基因在烟草根、茎、叶、花中均有表达,其中叶中表达量最高,花中表达量最低。同时,Nt POD1的表达受高盐、干旱、低钾、ABA和H2O2诱导。结果表明,Nt POD1基因属于烟草的过氧化物酶,并可能在烟草非生物逆境胁迫响应中发挥作用。
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