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[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
赵彩春 李一星 陈大松 李友国
采用实时荧光定量PCR技术,研究了紫云英共生表达的非特异性转脂蛋白编码基因AsE246和AsIB259在根瘤发育和固氮过程中的组织和时空表达特征,并初步考察了其在重金属镉胁迫条件下表达水平的变化。结果表明:2个目标基因仅在紫云英根瘤中特异表达,并且均在接种华癸中慢生根瘤菌7653R后22 d左右表达量达到最高。在低浓度重金属镉胁迫条件下,AsE246和AsIB259在处理早期的表达量明显升高。在低或高镉胁迫条件下,在处理中期其表达量均显著低于正常根瘤,在处理后期则维持在较低水平,表明它们参与紫云英应对镉胁迫的应答机制。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李一星 王建云 石晓峰 陈大松 李友国
将紫云英AsIB259基因编码的一个预测的非特异性转脂蛋白AsIB259(nsLTP,non-specific lipid transfer protein)在大肠杆菌表达菌株Rosetta 2(DE3)中进行了诱导表达,体外测定AsIB259蛋白的脂质结合动力学特征,检测它对不同碳链长度脂肪酸及其衍生物的结合能力,进一步考查AsIB259超表达对紫云英毛根结瘤情况的影响。结果表明:AsIB259具有转脂蛋白的典型特征,与16~22碳链长度脂肪酸的结合活性较强,对茉莉酸也表现出一定的结合活性;AsIB259超表达导致根瘤数量增加1.5倍且固氮酶活性降低,说明该基因在根瘤形成和固氮过程中发挥重要...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
吴梅 丑敏霞 李一星 陈大松 李友国
基于接种华癸中慢生根瘤菌(Mesorhizobiumhuakuii)7653R的紫云英(Astragalus sinicusL.)感染根与未接种对照根在转录水平上的差异,利用抑制差减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH),建立了紫云英结瘤固氮过程中的差异表达cDNA文库,共获得527个有效克隆,其中增强或特异性表达的上调文库中包含341个克隆,抑制表达的下调文库包含186个克隆。对其中的1个上调表达cDNA克隆AsB6利用RACE(rapid amplification of cDNAends)方法获得了其基因全长序列,利用BLAST在线...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
张晓媛 王建云 魏丰 李振鹏 谢福莉 李友国
将紫云英根瘤中特异表达的编码ＣＣＰｓ（Ｃｙｓｔｅｉｎｅ Ｃｌｕｓｔｅｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ）同源多肽的蛋白ＡｓＦ２５９在大肠杆菌表达菌株（ＤＨ１０Ｂ）中进行体外诱导表达，分别检测其在洋葱表皮细胞与紫云英根瘤中的细胞定位，并利用免疫荧光技术，检测紫云英中ＡｓＦ２５９基因的时空表达特征。结果表明：ＡｓＦ２５９蛋白分布于洋葱表皮的细胞壁、细胞膜、细胞质；基因表达和融合蛋白定位实验显示，ＡｓＦ２５９在根瘤中呈特异性表达，在类菌体分化前期大量表达，且ＡｓＦ２５９蛋白与类菌体共定位，表明ＡｓＦ２５９基因属于ｎＣｒ家族，在类菌体分化、维持和共生固氮过程发挥重要作用。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
王宁 李一星 刘燕 陈大松 李友国
利用酵母双杂交技术,以结瘤受体激酶(NORK)蛋白的跨膜结构域(TM)为诱饵,进行了与其相互作用靶蛋白的筛选鉴定。结果获得41个候选阳性克隆,通过测序和在NCBI中进行Blast比对分析,发现其中一个具有重要生物学功能的互作蛋白翻译延伸因子AsEF1-α,并将该蛋白相应的编码基因命名为AsEF1-α。进一步的验证表明靶蛋白AsEF1-α与诱饵互作的关键结构域是EF1-α-Ⅲ。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
叶竞阳 王建云 熊小波 陈大松 谢福莉 李友国
以紫云英类受体蛋白激酶Ｎｉｐ４３的Ｓ－ＴＫＳ结构域构建诱饵载体，通过酵母双杂交技术，筛选获得１７个候选的阳性克隆。经过测序分析和ＢｌａＳＴ比对，最终确定了１个互作蛋白ＥｐＮ。ＥｐＮ蛋白是网格蛋白聚合反应中的配体蛋白，可调控网格蛋白的聚合反应。通过实验验证显示，靶蛋白ＥｐＮ与Ｎｉｐ４３蛋白互作最强的区域为ＥＮＴＨ／ａＮＴＨ结构域。ＲＥａｌ－ＴｉｍＥ ｑ ｐＣＲ检测表明，ＥｐＮ基因参与了根瘤菌早期结瘤过程。
[期刊] 林业科学研究
[作者]
袁长春 莫健新 袁柳娇 余如凤 刘倩 钟军弟 刘锴栋
[目的]从转录组水平研究重金属污水胁迫处理下白骨壤的基因表达变化,以揭示白骨壤响应重金属污染胁迫的机制。[方法]采用基于高通量测序的数字基因表达谱(DGE)技术对重金属污水胁迫处理组和对照组白骨壤材料进行转录组测序分析。[结果]与对照组相比,重金属处理下白骨壤共有10 459个差异表达基因,其中,8 685个表达量上升,1 774个表达量下降。Me V聚类表明:大部分基因在重金属处理样本中的表达量受到极大的诱导。GO功能注释发现,差异表达基因主要定位于叶绿体以及细胞内各种膜结构,参与"细胞代谢"、"细胞组
[期刊] 西南农业学报
[作者]
丁超琼 李娟娟 李洋洋 俞继华 王万军 廖海 周嘉裕
克隆决明胰蛋白酶抑制剂2(Cassia obtusifolia trypsin inhibitor 2,COTI2)基因序列,并考察其在不同环境下的表达模式。利用RACE方法克隆了COTI2基因的部分序列,利用定量PCR考察其在盐、低温、干旱及ABA处理下的表达模式。从决明种子c DNA中克隆出了长度为565 bp的基因片段,该片段具有典型的Kunitz蛋白酶抑制剂基因家族的结构域。将得到的序列提交GenBank,序列号为ku745416。对获得的COTI2的氨基酸序列进行比较分析,发现COTI2的P1位
[期刊] 林业科学研究
[作者]
刘魏魏 杨璞 陈晓鸣
白蜡虫对低温的高度耐受性对其生存、繁殖及白蜡生产都至关重要。为探讨低温胁迫对白蜡虫hsp表达的影响,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR),对白蜡虫二龄雄虫在低温胁迫下7个不同的hsps(hsp21.5,hsp21.7,hsp40,hsp60,hsp70,hsc70,hsp90)的基因表达情况进行了检测。结果发现,除hsc70外,其余hsps均能被低温不同程度地诱导,其中hsp70、hsp21.7和hsp90的上调量十分显著。说明多数hsps都与白蜡虫幼虫应对低温胁迫相关。
关键词：
hsp 白蜡虫 低温胁迫 荧光定量
[期刊] 水产学报
[作者]
朱择敏 马冬梅 白俊杰 梁旭方
为促进肉食性鱼类人工配合饲料开发的理论基础研究,分析鱼类脂肪代谢的机制,实验克隆了大口黑鲈2个脂蛋白脂肪酶基因LPLtype1和LPLtype2的cDNA。序列分析表明,LPLtype1基因cDNA序列全长2 156 bp,编码516个氨基酸;LPLtype2基因cDNA序列全长1 710 bp,编码346个氨基酸。大口黑鲈LPLtype2与LPLtype1氨基酸序列之间的同源性为43.5%。系统进化分析表明,大口黑鲈LPLtype1和鳜LPL聚为一支,大口黑鲈LPLtype2和大麻哈鱼LPLtype2紧密聚为一支。预测分析发现,大口黑鲈LPLtype1和LPLtype2基因编码蛋白的活性中心...
关键词：
大口黑鲈 脂蛋白脂肪酶 组织表达 肝损伤
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
王薇 杨静 杨文浩 周碧青 张黎明 邢世和
以福建省2种典型中低产田(红泥砂田和灰黄泥砂田)为研究对象,在15和25℃条件下进行室内模拟淹水培养试验,研究添加等量紫云英后二者的可溶性有机碳(DOC)动态变化特征差异.结果表明:与对照相比,2种温度培养下添加紫云英均显著提高红泥砂田和灰黄泥砂田的DOC含量,2种温度下灰黄泥砂田的DOC含量分别比红泥砂田高29.38%694.98%和45.40%471.22%,且二者均呈先增后减、最后趋于稳定的变化趋势;25℃条件下土壤DOC峰值(10 d)较15℃条件下(20d)提前了10 d.可见,中低产水稻土添加
[期刊] 林业科学研究
[作者]
刁姝 苏晓华 丁昌俊 张冰玉
利用生物信息学与分子生物学相结合的策略克隆了小叶杨CCH基因,基因编码区全长258 bp,编码由85个氨基酸残基构成的蛋白质,蛋白N端具有与铜离子结合的保守功能域MXCXXC,且具有铜伴侣蛋白典型的βαββαβ二级结构,命名为Ps CCH。系统进化分析表明:Ps CCH蛋白与橡胶、麻疯树、葡萄的CCH蛋白的亲缘关系最近(相似性90%93%)。通过实时定量PCR方法对其在不同浓度铜离子、其它重金属离子及植物生长激素处理下的表达模式进行了分析。结果表明:小叶杨Ps CCH的表达受多种重金属及植物激素的调控,在低浓度铜离子、铝离子、锌离子、水杨酸处理下,其mRNA表达先上升而后下降;而在高浓度铜离子...
关键词：
小叶杨 铜伴侣蛋白 基因表达 重金属胁迫
[期刊] 中国水产科学
[作者]
姚煜 梁旭方 李光照 王琳 刘秀霞
为了研究鳜(Siniperca chuatsi)脂蛋白脂酶(LPL)、肝脂酶(HL)基因结构与功能关系,首先采用RT-PCR及RACE法,克隆得到鳜肝脏LPL与HL基因cDNA全序列。鳜肝脏LPL基因cDNA全长为2089bp,其中开放阅读框(ORF)为1548bp,编码515个氨基酸。鳜HL基因cDNA全长为1964bp,其中ORF为1494bp,编码497个氨基酸。进化树分析显示,鳜LPL与HL基因与其他脊椎动物的LPL、HL基因各自聚集成簇。对鳜基因组进行PCR获得鳜LPL与HL全基因组DNA序列,与其他脊椎动物基因结构相似,鳜LPL基因由10个外显子和9个内含子组成,全长7392bp;...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
王莎莎 王天明 秦英惠 陈慕雁
应激颗粒是生物体遭受不利环境时细胞产生的一种自我保护机制,基于此,本研究开展了高温胁迫下刺参(Apostichopus japonicus)肠道细胞中应激颗粒(Stress granule)标记蛋白基因TIA-1表达特征的研究。采用RACE技术克隆了刺参T细胞胞内抗原-1基因(TIA-1)全长cDNA序列。该基因cDNA全长为3108 bp,包括16 bp的5'UTR,1284 bp的开放阅读框(ORF),1808 bp的3'UTR,编码427个氨基酸。结构分析表明,刺参TIA-1基因编码3个N末端RNA
[期刊] 华北农学报
[作者]
王一鸣 汪湖 龙胜举 赵英鹏 陈延 贺忠群
为了揭示蒲公英在干旱胁迫下渗透调节和酶保护系统的作用机理以及质膜水孔蛋白PIP2-3基因的表达特征,采用盆栽控水试验,研究了不同干旱胁迫RWC=(90±5)%、RWC=(75±5)%、RWC=(50±5)%下蒲公英渗透调节物质、酶保护系统以及质膜水孔蛋白基因的相关表达。结果表明:随着干旱胁迫的加重,蒲公英叶片中的可溶性糖、可溶性蛋白、游离脯氨酸的含量显著增加,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)的活性显著提高,在轻度胁迫(MS)中呈持续上升的趋势,重度胁迫(SS)中则呈现先
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