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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
苏良科 范红结 陆承平
采用通用的模式细胞HEp 2作黏附及黏附抑制试验 ,研究马链球菌兽疫亚种ATCC35 2 4 6株类M蛋白的黏附作用。结果表明 ,ATCC35 2 4 6株可以黏附HEp 2细胞。用重组表达的类M蛋白鼠抗血清处理ATCC35 2 4 6 ,可抑制其对HEp 2细胞的黏附 ,最大抑制率达 81 4 % ;而ATCC35 2 4 6的全菌鼠抗血清在 1∶80 0时能完全抑制它对HEp 2细胞的黏附。此外 ,热酸提取的ATCC35 2 4 6株的类M蛋白和重组表达的类M蛋白可不同程度地抑制该菌株的黏附 ,前者在 16 0μg·mL-1有最大的黏附抑制率 ( 4 0 % ) ,而后者在 6 0 μg·...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
黄志坚 董瑞兰 罗刚 江和基
采用体外细胞黏附模型,研究菠萝蛋白酶对K88+产肠毒素大肠杆菌(ETEC)黏附大鼠小肠黏膜上皮细胞的抑制作用.结果表明:菠萝蛋白酶能显著降低K88+ETEC的黏附率,且与庆大霉素的抑菌效果相当(P>0.05).由此可以推测,菠萝蛋白酶能体外抑制K88+ETEC菌毛黏附上皮细胞,阻止K88+ETEC对肠道的侵袭,为临床提供一定的理论依据.
关键词：
菠萝蛋白酶 黏附 小肠黏膜上皮细胞
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
杨柳 许国洋 牟豪 白运川 余远迪
以提取羊口疮痂皮中病毒的DNA为模板，用PCR扩增羊口疮病毒(ORFV)的059基因序列，并进行基因克隆、测序鉴定和生物信息学分析；优化合成059基因编码序列，连接载体pET42a(+)，转化Escherichiacoli BL21(DE3)；用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导阳性克隆菌，采用免疫印迹检测表达的F1L蛋白，并以His柱纯化蛋白、梯度法复性及Bradford法测定蛋白浓度；将BHK21细胞铺于12孔板中培养至单层，分别作F1L蛋白、山羊痘病毒(GTPV)、先蛋白后病毒、蛋白和病毒混液4种方式孵育，利用荧光定量PCR测定孵育至1.0、6.0h的细胞黏附GTPV的量，研究ORFV F1L蛋白对GTPV黏附BHK21细胞的影响。结果表明：成功获得了ORFV重庆石柱分离株(ORFV–CQsz)的059基因编码序列，其编码的F1L蛋白包含1个结合细胞表面硫酸乙酰肝素受体的结构域，显示出肝素结合活性；该蛋白羧基端有2个跨膜区，不利于蛋白质的表达，但优化DNA序列构建的重组质粒菌，经IPTG诱导后获得对F1L蛋白的高效表达；免疫印迹显示F1L蛋白对ORFV抗体有较好的反应原性；Bradford法测定的纯化复性的F1L蛋白质量浓度为1.06mg/m L；荧光定量PCR检测数据显示，不同孵育处理下GTPV黏附细胞的拷贝数不同，表明F1L蛋白对GTPV黏附BHK21细胞呈现一定的干扰作用，能降低病毒黏附到细胞的拷贝数。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
杨柳 许国洋 牟豪 白运川 余远迪
以提取羊口疮痂皮中病毒的DNA为模板，用PCR扩增羊口疮病毒(ORFV)的059基因序列，并进行基因克隆、测序鉴定和生物信息学分析；优化合成059基因编码序列，连接载体pET42a(+)，转化Escherichiacoli BL21(DE3)；用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导阳性克隆菌，采用免疫印迹检测表达的F1L蛋白，并以His柱纯化蛋白、梯度法复性及Bradford法测定蛋白浓度；将BHK21细胞铺于12孔板中培养至单层，分别作F1L蛋白、山羊痘病毒(GTPV)、先蛋白后病毒、蛋白和病毒混液4种方式孵育，利用荧光定量PCR测定孵育至1.0、6.0h的细胞黏附GTPV的量，研究ORFV F1L蛋白对GTPV黏附BHK21细胞的影响。结果表明：成功获得了ORFV重庆石柱分离株(ORFV–CQsz)的059基因编码序列，其编码的F1L蛋白包含1个结合细胞表面硫酸乙酰肝素受体的结构域，显示出肝素结合活性；该蛋白羧基端有2个跨膜区，不利于蛋白质的表达，但优化DNA序列构建的重组质粒菌，经IPTG诱导后获得对F1L蛋白的高效表达；免疫印迹显示F1L蛋白对ORFV抗体有较好的反应原性；Bradford法测定的纯化复性的F1L蛋白质量浓度为1.06mg/m L；荧光定量PCR检测数据显示，不同孵育处理下GTPV黏附细胞的拷贝数不同，表明F1L蛋白对GTPV黏附BHK21细胞呈现一定的干扰作用，能降低病毒黏附到细胞的拷贝数。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
曾巧英 陆承平
为研究猪链球菌 2型 (SS2 )的毒力因子溶菌酶释放蛋白 (MRP)的黏附作用 ,进行了如下试验 :1 用黏附计数法比较菌株HA980 1(MRP+ )和SH0 0 6 4 4 4 (MRP-)的黏附动力学 ,两菌株均能黏附于HEp 2细胞 ,MRP+ 株的最大黏附菌数显著高于MRP+ 株 (P
[期刊] 水产学报
[作者]
王薇 胡丹丹 李槿年 刘雪芹
为了探明拟态弧菌OmpU蛋白的黏附功能,利用同源重组技术敲除基因组中OmpU基因,并构建其互补株,再经组合PCR方法和序列测定,证实了OmpU基因的缺失和互补。对野生株、缺失株和互补株进行了遗传稳定性、生长特性、生化特性、细胞黏附性、致病性等方面比较研究。结果显示,缺失株具有遗传稳定性;在相同的培养条件下,与野生株相比,突变株的培养特性和生化特性没有明显变化,生长速率略减慢,对实验草鱼的毒力降低了4倍,对鲤上皮瘤细胞(EPC)的黏附能力显著降低,下降了66.6%,而互补株的黏附能力和毒力又得到恢复,与野生株无明显差异。研究首次确证了拟态弧菌OmpU蛋白具有黏附功能,OmpU蛋白通过黏附参与致病...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
陈曦 刘东明 张慧 朱习芳 陈颖钰 胡长敏 郭爱珍
为进一步解析牛支原体(M.bovis)Vsp X蛋白的黏附特性,采用间接免疫荧光法检测Vsp X蛋白在M.bovis中的分布,然后通过黏附试验和抗体黏附抑制试验检测Vsp X蛋白的黏附性,最后采用ELISA方法进一步分析蛋白和突变株结合纤连蛋白(Fn)的特性.结果显示,M.bovis Vsp X蛋白位于M.bovis菌体表面;重组Vsp X蛋白(r Vsp X)能黏附到EBL细胞表面,且M.bovis Vsp X基因缺失突变株(M.bovisΔVsp X)体外黏附EBL细胞能力与M.bovis野生株(M.bovis WT)相比显著下降,两个结果说明r Vsp X蛋白具有黏附特性;并且抗r Vsp X蛋白单抗能抑制M.bovis黏附EBL细胞,进而证实r Vsp X蛋白黏附的特异性;此外,r Vsp X蛋白与Fn呈剂量依赖性结合,且M.bovisΔVsp X结合Fn能力与M.bovis WT相比显著下降,证明M.bovis Vsp X蛋白与Fn为特异性结合,且Fn分布在EBL细胞表面.以上结果表明,M.bovis Vsp X蛋白是一种具有Fn结合特性的黏附相关蛋白,能通过EBL细胞外基质成分Fn介导其黏附EBL细胞.
关键词：
牛支原体 Vsp X蛋白 黏附 纤连蛋白
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
余树民 甘梦 左之才 崔恒敏 彭西 王娅 邓俊良
【目的】评价自拟中药复方对免疫抑制小鼠血清细胞因子、免疫球蛋白和红细胞免疫黏附功能的影响。【方法】通过腹腔注射环磷酰胺建立免疫抑制小鼠模型。试验组免疫抑制小鼠分别按20,10和5g/kg剂量灌胃自拟中药复方,同时设置模型对照组(灌胃等体积生理盐水)、健康对照组(灌胃等体积生理盐水)和黄芪多糖对照组(灌胃剂量66mg/kg),连续7d,试验第0,3,7天采集血样,用血细胞自动分析仪测定小鼠血细胞数,用酶联免疫吸附试验测定血清IL-2、IgG、IgM、IL-4和IFN-γ含量,并计算IL-4/IFN-γ,用红细胞C3b受体花环(C3b RR)及免疫复合物花环(ICR)试验分析红细胞免疫黏附功能。【...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
高俊伟 毕丁仁 胡思顺 彭秀丽
研究了培养温度、培养时间、培养基pH值以及异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropylthio-β-D-galacto-side,IPTG)浓度等不同条件对鸡毒霉形体黏附素截短蛋白在大肠杆菌中表达量的影响。经SDS-PAGE分析表明:诱导温度为28℃、诱导时间为9 h、培养基pH值为7.0、IPTG浓度为0.010 mmol/L时目的蛋白在细菌裂解沉淀和上清液中均最大量表达,分别达到30%和17%左右。上清液经GST.Bind Resin亲和层析分离纯化后,洗脱产物中pMGAⅣ融合蛋白纯度高达95%。Western-blot分析表明,该蛋白可被鸡毒霉形体阳性血清识别,具有较好的免疫学活性。
[期刊] 水产学报
[作者]
杨娅楠 王婧婷 陈萌 耿绪云 袁增智 孙金生
黏附因子在病原菌的致病过程中发挥了重要作用,鉴定新的黏附因子是了解病原菌致病机制的重要手段。本研究中首次发现游离肝素能够竞争性抑制副溶血弧菌与Hela细胞的黏附,表明细胞外基质中的肝素可能是细菌重要的细胞表面黏附受体。进一步利用肝素亲和层析技术垂钓到6种副溶血弧菌的外膜蛋白,并通过基因克隆和原核表达技术成功获得重组的外膜蛋白并对其进行了深入研究。重组蛋白IMPDH、EF-Tu和Opp A可黏附Hela细胞,并可以显著抑制副溶血弧菌与Hela细胞的黏附,说明这3种蛋白可能是其重要的潜在黏附因子。
关键词：
副溶血弧菌 肝素 外膜蛋白 黏附因子
[期刊] 中国农业科学
[作者]
尹彩霞 于少雄 宋琨 李素 杨玉莹 仇华吉
【目的】已有研究显示,猪瘟病毒(CSFV)通过网格蛋白介导的内吞作用侵入宿主细胞,然而参与侵入过程的病毒蛋白尚待阐明。研究旨在明确E2蛋白在CSFV侵入过程中的作用。【方法】通过瞬时转染包装携带E2基因的慢病毒,将慢病毒转导悬浮293细胞构建稳定表达重组E2蛋白的悬浮293细胞系,利用亲和层析的方法纯化重组E2蛋白,同时优化表达时间以增加蛋白产量。利用SDS-PAGE和Western blotting分别鉴定了重组E2蛋白的表达水平及其反应原性。通过感染试验、吸附试验以及内化试验分别探究了E2蛋白对CSFV感染、吸附以及内化的影响。将重组E2蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,通过阻断ELISA检测血清中多克隆抗体的阻断率。利用制备的多克隆抗体与CSFV感作后进行吸附和内化试验,进一步探究了E2蛋白在介导CSFV吸附和内化中的作用。【结果】通过倒置荧光显微镜观察转导慢病毒后的细胞系,与对照细胞相比可见明显的绿色荧光,表明慢病毒成功转导悬浮293细胞。SDS-PAGE结果显示,在还原和非还原条件下均出现与预期大小相符的蛋白条带,经Western blotting验证,上清中表达的重组E2蛋白能够被抗E2蛋白单克隆抗体WH303所识别,表明构建的悬浮293细胞系能够表达重组E2蛋白。通过优化表达条件,悬浮293细胞培养第8天时上清中重组E2蛋白浓度最高可达5.84μg·m L-1。可溶性蛋白阻断试验结果显示,重组E2蛋白具有阻断CSFV感染的活性。利用重组E2蛋白在病毒入侵过程中处理细胞对CSFV的感染同样具有显著抑制作用;阻断ELISA和中和试验结果显示,针对E2蛋白的多克隆抗体能够阻断CSFV感染,且具有良好的中和活性;吸附试验和内化试验证明,重组E2蛋白处理细胞能够显著抑制CSFV的内化,而利用多克隆抗体与CSFV感作后能够显著抑制其吸附。【结论】E2蛋白参与CSFV吸附和内化。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
黄振玉 竹个个 邹华锋 吕为群
细胞周期蛋白M2(CNNM2)是参与体内镁离子平衡的重要候选基因,实验采用的CRISPR/Cas9系统是近几年发展起来的一类新型基因打靶技术。在斑马鱼CNNM2基因的一号外显子处选取打靶位点,构建sgRNA表达载体。随后将体外转录的sgRNA和Cas9 mRNA混合物分别以约30 pg和300 pg的剂量显微注射到斑马鱼单细胞期的受精卵中实现对目的靶基因CNNM2的敲除。24~48 h后PCR产物回收,限制性酶切法初步检测基因打靶情况,最后进行测序分析确定突变类型。为进一步验证突变的稳定遗传性,选择了具有敲除效率的F0与野生型斑马鱼进行外交,对获得的F1进行逐一剪尾,提取DNA进行PCR和测序...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
黄振玉 竹个个 邹华锋 吕为群
细胞周期蛋白Ｍ２（ＣＮＮＭ２）是参与体内镁离子平衡的重要候选基因，实验采用的ＣＲＩＳＰＲ／ＣａＳ９系统是近几年发展起来的一类新型基因打靶技术。在斑马鱼ＣＮＮＭ２基因的一号外显子处选取打靶位点，构建ＳｇＲＮａ表达载体。随后将体外转录的ＳｇＲＮａ和ＣａＳ９ ＭＲＮａ混合物分别以约３０ Ｐｇ和３００ Ｐｇ的剂量显微注射到斑马鱼单细胞期的受精卵中实现对目的靶基因ＣＮＮＭ２的敲除。２４～４８ ｈ后ＰＣＲ产物回收，限制性酶切法初步检测基因打靶情况，最后进行测序分析确定突变类型。为进一步验证突变的稳定遗传性，选择了具有敲除效率的Ｆ０与野生型斑马鱼进行外交，对获得的Ｆ１进行逐一剪尾，提取ＤＮａ进行ＰＣＲ和测序．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
付永瑶 师福山 王继宏 杨利峰 周向梅 尹晓敏 赵德明
【目的】研究细胞型朊蛋白对小神经胶质细胞不同激活方式的影响。【方法】用IFN-γ、IL-4和IL-10分别刺激BV2细胞,RT-PCR方法检测PrPC的mRNA表达量。SiRNA干扰将PrPC沉默,用上述因子刺激细胞,用RT-PCR和Western-blot检测相关参数。【结果】用IFN-γ、IL-4和IL-10分别刺激小神经胶质细胞后可导致PrPC的mRNA表达量下降;PrPC沉默后的小神经胶质细胞对IFN-γ刺激的反应应答减弱;PrPC沉默可以显著地改变由IL-4诱导的神经胶质细胞的激活表型;但是对IL-10诱导的小神经胶质细胞激活却没有影响。【结论】PrPC既能影响小神经胶质细胞从静止状...
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