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[期刊] 淡水渔业
[作者]
张虹 徐进 魏开金 徐滨 王丹
本实验旨在筛选对米尔伊丽莎白菌(Elizabethkingia miricola)有抑制作用的拮抗菌，并对其生长特性及其去除氨氮和亚硝酸盐的作用进行分析。实验采用平板对峙法从“稻蛙”养殖稻田土壤中分离到1株对米尔伊丽莎白菌有较强抑制作用的菌株X2。采用形态学特征观察和16s rDNA测序对X2进行鉴定，随后对X2在不同pH、盐度、温度等条件下的生长曲线进行了测定，以评估其环境适应性，并将X2接种于氨氮和亚硝酸盐培养基中，测定去除率以评估其去除氨氮和亚硝酸盐的能力。结合形态学特征及菌株16s rDNA序列分析，X2鉴定为侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)。结果显示：X2在pH 5～9、盐度5‰～50‰、温度20～40℃之间均能生长，最适pH、盐度、温度分别为7、5‰和35℃。这表明X2对环境的适应性较强，具有较强的耐酸碱性、耐盐性，适温性广等特性。X2在去除氨氮、亚硝酸盐方面也表现出了很强的能力，在X2接种浓度为5.0×10~7 CFU/mL时氨氮的去除率最高，达到74.95%;接种浓度为5.0×10~5 CFU/mL时亚硝酸盐的去除率最高，达到99.89%。结果表明，侧孢短芽孢杆菌X2对米尔伊丽莎白菌具有较强的拮抗作用，其环境适应能力也很强，同时具有较强的去除氨氮和亚硝酸盐的能力，可作为益生菌应用于蛙类养殖中防控米尔伊丽莎白菌感染和水质调控。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
李川北 阮陈松杰 吴明波 徐洪森 苏应兵
为查明湖北石首大垸农场养殖的黑斑蛙(Rana nigromaculata)歪头病病原与致病原理，本研究应用微生物分离技术，从病蛙脑、肝、脾和肾脏组织中分离、纯化病菌，采用形态特征、生理生化鉴定、16S rRNA基因序列分析进行细菌种类鉴定，通过组织病理学方法分析患病蛙病理损伤，及人工回归感染确定其致病性，并利用纸片扩散法进行药物敏感性试验。结果显示：分离菌(BSH3)与米尔伊丽莎白菌(Elizabethkingia miricola)聚为一支，结合该菌的形态学特征和生理生化特征，综合鉴定为米尔伊丽莎白菌。组织病理切片结果表明分离菌(BSH3)会导致蛙脑组织基质水肿，基质中出现空泡和炎性细胞浸润的现象；肝、脾和肾脏组织出现变性、坏死和炎症细胞浸润。人工回归感染试验显示，菌株可使黑斑蛙出现与自然发病蛙相似症状，半数致死浓度为6.3×10~4 CFU/mL。药敏试验结果表明菌株已呈现多重耐药性，仅对少数检测抗生素(米诺环素、氟苯尼考、利福平和万古霉素)敏感，根据药敏试验结果及农业部水产用药规定，推荐使用氟苯尼考治疗该疾病。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
刘芳园 胡瑞雪 余芳 侯家昊 于子润 顾泽茂
为探究外膜蛋白A(outer membrane protein A,OmpA)对米尔伊丽莎白菌致病作用的影响，以蛙源米尔伊丽莎白菌FL160902为研究对象，通过同源重组法构建OmpA缺失株△ompA，比较缺失株和野生株的生长特性、生物膜形成能力、抗血清杀伤能力、对细胞的黏附能力以及对蛙的致病性差异。结果显示：△ompA的生长能力和抗血清杀伤能力与野生株无显著差异；但与野生株相比，△ompA的生物膜形成能力增加了66%，△ompA对bEnd.3细胞的黏附能力降低了61%；黑斑蛙感染试验显示，△ompA在黑斑蛙血液、脾和脑组织中的载菌量分别为（3.15×10~8±0.09×10~8）、（2.11×10~8±0.07×10~8）和（6.61×10~8±0.16×10~8） copies/g，均显著低于野生株，且△ompA对黑斑蛙的致死率为37%，显著低于野生株的致死率（75%）。上述结果表明，ompA基因缺失不改变米尔伊丽莎白菌的抗血清杀伤能力，但增加了菌株的生物膜形成能力，减弱了菌株的黏附能力，从而降低了该菌对蛙的致病性。
[期刊] 水产学报
[作者]
邸军 张书环 黄君 杜浩 周勇 危起伟
为了确定中华鲟养殖基地一尾死亡子二代中华鲟的病原,利用传统病原菌分离方法,从濒死的中华鲟肝脏、脾脏和腹水中均分离到一株优势菌EM,采用16S r DNA基因序列分析、构建系统发育树并结合Biolog微生物自动分析系统进行鉴定,确定菌株EM为脑膜败血伊丽莎白菌。进一步对健康子二代达氏鲟进行人工感染试验确定其致病性;同时通过观察患病子二代中华鲟组织切片分析其病理特征;并对菌株EM进行药敏特性研究以期指导临床用药。结果显示,被感染子二代中华鲟肝脏、脾脏及肾脏组织中铁血黄素沉积、实质性细胞空泡变性,溶血严重。菌株
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
郭照辉 黄军 魏小武 罗容珺 伍善东 刘清术
从烟–稻–(油)多年轮作的耕地土壤中分离得到1株广谱拮抗菌HMI–23,对水稻立枯丝核菌、油菜核盘菌、青枯雷尔氏菌具有强烈抑制作用。经过16S rDNA的序列比对,初步认为该菌为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。该菌株发酵液抑菌活性对温度、紫外线和蛋白酶K不敏感,基因组中含有多个已知脂肽抗生素合成相关基因,脂肽粗提物亦对立枯丝核菌、核盘菌、雷尔氏菌有强烈的抑制作用。质谱分析结果表明,该粗提取物中可能含有多种已知的脂肽,如伊枯草菌素A、抗霉枯草菌素B、杆菌霉素D、丰原素B等。
关键词：
拮抗菌 分离 鉴定 脂肽
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
甫文疆 赵芸晨 曹建新
【目的】明确河西走廊制种玉米根腐病的主要致病菌,并筛选对其具有拮抗作用的内生菌,为玉米根腐病的生物防治提供参考。【方法】采用组织分离法从患玉米根腐病的病株中分离纯化病原菌,按柯赫氏法则检测其致病性;从玉米健株内分离内生菌,通过平板对峙法筛选拮抗菌;分别采用形态学和分子生物学方法对致病菌FW8和5株内生拮抗菌Z8,Z42,Z142,Z51和Z46进行鉴定;采用盆栽试验和大田试验验证5株内生拮抗菌对玉米根腐病的防治效果及其对玉米植株的促生作用。【结果】采用组织分离法从患玉米根腐病病株中共分离得到9株病原菌,其中FW8菌株对玉米具有较强致病力,鉴定为禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)。从玉米健株内分离获得56株内生细菌,其中5株内生菌(Z8、Z42、Z142、Z51、Z46)高效拮抗,平均抑菌率均大于65.05%。经形态学、分子生物学鉴定及系统发育树构建,鉴定菌株Z8和Z42为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa),菌株Z46为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),菌株Z142和Z51为贝莱斯芽孢杆菌(B.velezensis)。盆栽和大田试验结果表明,5株内生拮抗菌对玉米根腐病均有较好防治效果,最佳防效高达66.05%;此外,5株内生拮抗菌对玉米植株均有显著促生效果(P<0.05)。【结论】禾谷镰刀菌(F.graminearum)可导致制种玉米根腐病发生,多粘类芽孢杆菌P.polymyxa Z142、P.polymyxa Z51,贝莱斯芽孢杆菌B.velezensis Z142、B.velezensis Z51和解淀粉芽孢杆菌B.amyloliquefaciens Z46均对制种玉米根腐病具有明显防治作用,同时对玉米植株有良好的促生效果。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
潘子豪 龚倩梅 李科茫 马慧 吴宗福 姚火春
[目的]本文旨在从患乳房炎的奶牛乳液中分离鉴定病原菌。[方法]收集患乳房炎奶牛的乳液病料后分别接种绵羊血液平板和麦康凯鉴别培养基,置于37℃培养箱过夜。观察获得的单菌落形态并接种含有血清的液体培养基富集培养,然后煮沸法提取细菌纯培养物的基因组,以该基因组为模板通过PCR扩增未知细菌的核糖体RNA序列并对产物进行测序分析。以不同培养时间测定菌液D_(600)并绘制细菌的生长曲线。用倍比稀释法在96孔板上测定细菌对不同药物的最小抑菌浓度。[结果]从病料中分离到一株革兰阴性菌,命名为JS20170427COW。
[期刊] 林业科学
[作者]
刘会香 周翠 金静 胡凌志 曹帮华
从石榴果实中发现一株拮抗细菌,通过对菌体的形态观察、生理生化特性及16SrDNA序列测定鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis);其抗菌特性研究表明:该拮抗菌对几种不同林果病原菌均有不同程度的抑制作用。由Botryosphaeria dothidea、B.parva和Zythia versoniana引起的林果病菌菌丝形态变化表现为菌丝分支增多、扭曲,部分菌丝出现断裂和细胞出现原生质浓缩现象,菌丝顶端和中部细胞膨大成球形或椭圆形,有的成念珠状,有的顶端膨大明显聚集成簇并且颜色加深,随着细胞的继续膨大,透明度增加,最后菌丝细胞变成空泡;而由Valsasordida引起的杨树腐烂病...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
杨学宇 谭琳 张玉丹 杨艺帅 邓玉莲 任佐华 胡秋龙
从湖南省武陵山区4个茶叶种植基地采集茶轮斑病病叶，采用组织分离法对病原菌进行分离，通过致病性、形态学、分子生物学鉴定，确定病原菌为茶拟盘多毛孢(Pseudopestalotiopsistheae)。以病原菌为指示菌，采用平板对峙法从病叶中筛选得到效果最佳的拮抗菌kc–6，抑菌率为79.86%，经鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。分析拮抗菌对病原菌菌丝生长的抑制效果，对茶树离体叶片的防效、继代培养稳定性以及对10种作物病原菌的拮抗效果进行评价。结果表明：拮抗菌kc–6可使茶轮斑病病原菌菌丝萎缩变细，部分膨大；其发酵液原液、稀释10倍液和100倍液对茶树离体叶片的防效分别为72.73%、52.55%、3.03%；连续转接培养25次后的抑菌率仍保持70.33%;kc–6菌株对10种作物病原真菌均有抑制效果，其中对茄子褐纹病菌(Phomopsis vexans)、黄瓜枯萎病菌(Phytophthora melonis)、茭白镰刀菌(Fusarium graminearum)的抑制效果较好，抑制率分别为83.00%、80.00%、76.00%。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
王胜利 龚晓 周双德 程鹏 洪亚辉
以湖南省江永县姜瘟病重病区的土壤为材料,对土壤中的主要致病菌进行分离和鉴定,并筛选抑制致病菌的木霉菌。结果表明:姜瘟病重病区土壤中的主要致病菌有2种,分别为G1、H2,其中G1致病性较强,经过菌株形态观察和16S rDNA序列鉴定,发现H2为欧式杆菌(Erwinia spp.),G1为劳尔氏菌(Ralstonia slanacarum);通过对峙实验分析发现,编号为23的哈茨木霉菌(Trichoderma harzianum)对致病菌G1和H2具有较强的拮抗作用,可应用于姜瘟病的生物防治。
关键词：
姜瘟病菌 分离 鉴定 拮抗菌
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
杨学宇 谭琳 张玉丹 杨艺帅 邓玉莲 任佐华 胡秋龙
从湖南省武陵山区4个茶叶种植基地采集茶轮斑病病叶，采用组织分离法对病原菌进行分离，通过致病性、形态学、分子生物学鉴定，确定病原菌为茶拟盘多毛孢(Pseudopestalotiopsistheae)。以病原菌为指示菌，采用平板对峙法从病叶中筛选得到效果最佳的拮抗菌kc–6，抑菌率为79.86%，经鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。分析拮抗菌对病原菌菌丝生长的抑制效果，对茶树离体叶片的防效、继代培养稳定性以及对10种作物病原菌的拮抗效果进行评价。结果表明：拮抗菌kc–6可使茶轮斑病病原菌菌丝萎缩变细，部分膨大；其发酵液原液、稀释10倍液和100倍液对茶树离体叶片的防效分别为72.73%、52.55%、3.03%；连续转接培养25次后的抑菌率仍保持70.33%;kc–6菌株对10种作物病原真菌均有抑制效果，其中对茄子褐纹病菌(Phomopsis vexans)、黄瓜枯萎病菌(Phytophthora melonis)、茭白镰刀菌(Fusarium graminearum)的抑制效果较好，抑制率分别为83.00%、80.00%、76.00%。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
张新明 李健 刘淇
从健康的鱼虾体内以及养殖水体中分离得到 2 19株海洋细菌 ,以鳗弧菌 (Vibrioanguillarum)、副溶血弧菌 (Vibrioparahaemolyticus)、沙蚕弧菌 (Vibrioneresis)、飘浮弧菌 (Vibrionatriegen)等病原性弧菌为指示菌 ,在 2 2 16E平板上采用十字交叉划线法、点种法和平板扩散法进行体外拮抗实验 ,从中筛选到 6株有拮抗作用的海洋细菌。用平板活菌计数法研究拮抗菌J - 10及其胞外产物对鳗弧菌的抑菌作用 ;采用平板扩散法研究拮抗菌J- 10胞外产物抑菌效果的影响因子。结果显示 ,拮抗菌J- 10在混合体系中 ,2 4h之后表现出...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
程心怡 孙正祥 苏应兵 周燚
为筛选对维氏气单胞菌(Aeromonas Veronii)有潜在抑菌作用的菌株，本研究从湖北公安县泥鳅养殖池塘底泥中分离一株细菌J2-2，对其特性进行了研究，并对抑菌活性物质进行了初步分析。结果显示菌株J2-2为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)，具有抑菌广谱性，对米尔伊丽莎白菌(Elizabethkingia miricola) 、嗜水气单胞(A. hydrophila)等6种水产病原菌的抑菌直径在9.6～29.5 mm。菌株J2-2的抑菌物质具有较好的酸碱稳定性、热稳定性和蛋白酶K处理的稳定性。电镜结果显示菌株J2-2的发酵产物对维氏气单胞菌的细胞膜结构具有破坏作用。通过LC-MC分析该拮抗细菌可产生至少15种不同的脂肽类化合物如杆菌霉素等。药敏试验结果显示，菌株J2-2除了对氨苄西林、青霉素具有耐药性，对克林霉素中度敏感，对大多数抗生素高度敏感。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
杨蕾 伍建榕 邓佳 陆燕元 王芳
从西南林业大学大棚蓝莓种植基地内采集样本,并从采后腐烂果实中分离出8株真菌,成功鉴定出2株为青霉菌(Penicillium digitatum)和枝孢菌(Cladosporium tenuiussimum).从健康蓝莓果实、叶片和根际土壤中共分离到17株细菌,根据16S rRNA序列同源性,分别归入9个细菌属.通过检测其对蓝莓果腐病病原真菌的抑制活性,筛选出达到显著差异的拮抗细菌5株,其中3株为芽孢杆菌,2株为短芽孢杆菌;5株拮抗细菌对P.digitatum的抑菌率为67.6%～90.6%,其中3株拮抗细菌对C.tenuiussimum的抑菌率达90.7%～92.6%.菌株BS-3对P.digitatum和C.tenuiussimum的抑菌效果均在90%以上,有潜在生防利用价值.
关键词：
蓝莓 果腐 病原菌鉴定 拮抗细菌
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
田爱霞
菌株TJB-8是从杨树Populus根部土壤中分离获得的一株对杨树腐烂病菌Cytospora chysosperma具有明显抑菌效果的细菌。基于形态学特征、生理生化特性和16S r DNA序列分析鉴定了TJB-8的分类地位,并分别采用菌丝生长速率法和二分皿法分析了其抑菌活性物质,为菌株TJB-8的实际开发利用提供理论基础。研究结果显示:菌株TJB-8的无菌滤液有效抑制了杨树腐烂病菌菌丝生长,抑制率达到97.42%(72 h),并使生长的菌丝产生畸形膨大;TJB-8的无菌滤液还能明显抑制胶孢炭疽菌Colle
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