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[期刊] 中国水产科学
[作者]
杨金先 陈强 刘晓东 林天龙 Theodore G.Clark
抑动蛋白是小瓜虫(Ichthyophthiriusmultifiliis)体表纤毛的主要构成部分,也是宿主免疫系统发挥抗虫免疫时的主要识别抗原。根据已经报道的3种抑动蛋白N端及C端保守的多肽片断,设计了一对简并引物P6/P7,以小瓜虫分离株IchFJ9的基因组为模板,成功扩增了抑动蛋白编码区(ORF)的全长基因序列。扩增的iagFJ9基因全长1398bp,编码466个氨基酸,包含18个非标准密码子TAA(Glu,Q)推导的氨基酸序列包含6个以CPXGT为起始的串联重复单位,具有抑动蛋白的特征性结构。同源比较分析显示,扩增的iagFJ9基因与已知的小瓜虫抑动蛋白基因IAG52A基因具有88%同源...
关键词：
小瓜虫 抑动蛋白 抗原 简并PCR
[期刊] 中国水产科学
[作者]
柯翎 陈如敬 刘晓东 杨金先 龚晖
提取表达于四膜虫(Tetrahymena thermophila)细胞膜表面的多子小瓜虫抑动抗原。通过Western Blotting证实重组多子小瓜虫抑动抗原约为35.7 kD,其免疫原性与多子小瓜虫抑动抗原相似。以Quil-A作为佐剂,采用离心、超声波和透析等方法制备小瓜虫抑动抗原免疫刺激复合物(Iag-ISCOMs)。电镜观察可见Iag-ISCOMs经磷钨酸负染后呈直径30~40 nm的笼格状结构。免疫和攻毒试验证实Iag-ISCOMs对鳗鲡具有一定保护能力,攻毒后存活率达71.4%,对照组存活率为43.9%,结果表明,本实验成功制备了具有一定免疫原性的Iag-ISCOMs。
关键词：
小瓜虫 抑动抗原 免疫复合刺激物
[期刊] 华北农学报
[作者]
王掌军 王建设 刘玲 刘生祥 陈素生 许勇 王永健
以小卫星DNA YNZ22核心序列为引物,甜瓜DNA为模板,在甜瓜上研究了直接扩增小卫星DNA(DAMD)的优化反应体系,结果表明:在20μL的反应体系中,5种主要成分Taq DNA聚合酶、Mg2+、引物、模板DNA和dNTPs的最适浓度分别为1U,2.5 mmol/L,0.5 mmol/L,30 ng,5 mmol/L。在优化的DAMD-PCR反应体系下,利用该引物在28个甜瓜品种上构建了直接扩增小卫星DNA(DAMD)的指纹图谱,分析结果表明,该引物在28个甜瓜品种上共扩增出13位点,其中9位点具有多态性,多态性条带比率为69%,可一次性从28个甜瓜品种中鉴别出其中的21个,鉴别率高达75...
关键词：
甜瓜 小卫星DNA 指纹图谱
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
康强 周鑫 罗燕 田青 程建国 赵位
【目的】探索从林麝粪便中提取基因组ＤＮＡ并进行物种鉴定的可行性，为林麝野外调查工作以及分子粪便学在林麝保护中的应用提供科学依据。【方法】采集林麝粪便，采用改良的ＣＴＡＢ抽提基因组ＤＮＡ；按常规ＰＣＲ法对ｍＴＤＮＡ Ｄ－ｌｏｏＰ区和ＣｙＴ Ｂ基因进行扩增测序后，用ＤＮＡｍＡＮ ６．０软件进行系统发育分析；在不同温度存放不同时间，研究林麝粪便基因组ＤＮＡ的提取与ｍＴＤＮＡ Ｄ－ｌｏｏＰ区和ＣｙＴ Ｂ基因ＰＣＲ扩增的时效性。【结果】以提取的基因组ＤＮＡ为模板进行ＰＣＲ扩增均能特异性地扩增出ｍＴＤＮＡ Ｄ－ｌｏｏＰ区和ＣｙＴ Ｂ基因。系统发育分析结果表明：所扩增产物为林麝的ｍＴＤＮＡ Ｄ－ｌｏｏＰ区和．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
汪桂玲 朱琴 李家乐
SRY基因是人类及哺乳动物睾丸决定因子的最佳候选基因,HMG盒是SRY基因编码蛋白质的唯一功能区,在性别决定中极其重要且高度保守,许多进化程度上明显不同的物种中都能检测出SRY基因的HMG盒,即Sox基因。斑节对虾是一种重要经济虾类,其性别决定机制研究薄弱,至今未找到性染色体。本研究根据人的SRY基因的HMG盒保守区的核苷酸序列,设计了1对兼并引物,通过PCR扩增出斑节对虾的Sox基因,并对扩增产物进行SSCP分析。结果表明,斑节对虾雌雄个体均存在Sox基因,从雌雄个体中均扩增出约350bp和220bp两条基因片段,推测其中350bp片段含内含子,SSCP结果显示斑节对虾内存在Sox基因家族的...
[期刊] 林业科学
[作者]
薛永常 李金花 卢孟柱 张绮纹
A fragment of PAL (phenylalanine ammonia_lyase) gene was amplified by RT_PCR from poplar (Populus×euramericana cv. “74/76”) developing second xylem mRNA. It was cloned into pGEM-T Easy vector and identified by restriction enzyme, PCR amplification and sequencing. The sequence of the amplified DNA fr...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李有全 罗建勋 高金亮 关贵全 马米玲 刘志杰 刘军龙 刘爱红 任巧云 党志胜 鲁炳义 刘光远 白启 殷宏
【目的】构建吕氏泰勒虫裂殖子cDNA表达文库,并从中筛选抗原候选基因。【方法】从吕氏泰勒虫裂殖子直接提取和纯化mRNA,采用oligo(dT)引物合成双链cDNA,并在其两端加EcoRⅠ/HindⅢ定向接头。将所产生的cDNA分子定向克隆到具有EcoRⅠ/HindⅢ粘性末端的λSCREEN载体的两臂之间。用PhageMaker extract对连接产物进行体外包装以形成完整的噬菌体,并用之转染大肠杆菌ER1647,从而构建成吕氏泰勒虫的cDNA表达文库。用吕氏泰勒虫阳性血清和兔抗绵羊IgG-AP筛选得到阳性克隆,经测序和Blast软件分析并获得新基因。【结果】成功构建吕氏泰勒虫裂殖子cDNA表...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
王成扬 赵超 傅明骏 邱丽华
为研究增殖细胞核抗原（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇ ｃｅｌｌ ｎｕｃｌｅａｒ ａｎｔｉｇｅｎ，ｐｃｎａ）在斑节对虾（ｐｅｎａｅｕｓ ｍｏｎｏｄｏｎ）卵巢发育中的功能，利用ｒａｃｅ技术克隆得到了斑节对虾ｐｃｎａ基因（ｐｍｐｃｎａ）的ｃｄｎａ全长序列。该序列全长９７８ ｂｐ，包括１３５ ｂｐ的５′非编码区（５′ｕｔｒ）、６０ ｂｐ的３′ｕｔｒ和编码２６０个氨基酸的７８３ ｂｐ的开放阅读框（ｏｒｆ）。同源性分析结果表明，ｐｍｐｃｎａ与其他物种具有很高的蛋白同源性。组织表达模式分析表明，ｐｍｐｃｎａ在所监测的各组织中为组成性表达，其中在卵巢和脑中表达量较高；卵巢发育不同阶段基因的表达分析则表明ｐｍｐｃｎ．．．
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
赵金艳 刘榜 王文君 张宇 张庆德
以大白猪背最长肌、脾脏、耳组织为材料,用碱裂解法和酚-氯仿法分别提取猪基因组DNA,用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳、PCR扩增检测DNA的产量和质量,结果发现2种方法提取的DNA产量没有明显差异。通过猪MC4R、TEF-1基因特异引物进行PCR扩增均能得到目的条带。碱裂解法提取的DNA原液稀释5倍、10倍后作为模板均获得了较为稳定的扩增产物。该结果表明,简单、快速、无毒的碱裂解法适用于动物定性PCR检测时DNA的提取。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
徐文忠 杜念兴 李光地 汪垣
为了将生长抑索(Somatostatin,ss)基因融合到乙肝表面抗原(HBsAg 或 HBs)基因 C 末端 Acc Ⅰ 位点(aa223位置),先将质粒 pWR13-HBs/4的多接头区 Sal Ⅰ位点消除,因为它也可被 AccⅠ酶切。在AccⅠ位点加入 Bgl Ⅱ接头,用 Sac Ⅰ和 Bg Ⅱ切下 HBs 基因片段(700bp),并将其插入到 pUC12-ss/2中 ss 基因N 末端 Sac Ⅰ和 BamH Ⅰ位置.获得基因融合体质粒 pUC12-ss/HBs。经 DNA 序列分析,两基因融合处的阅读框架正确,且 HBs 基因的起始密码 ATG 和 ss 基因全序列都得以证实.
关键词：
生长抑素 乙肝表面抗原 基因融合
[期刊] 中国农业科学
[作者]
宋慧群 张德林 廖申权 翁亚彪 林瑞庆 朱兴全
【目的】首次对中国来源于不同宿主、不同地域的9个弓形虫虫株(ZS1人株、PY猪株、GY猪株、ZC猪株、NT猪株、ZS人株、SH人株、CN猪株、QHO绵羊株)以及国际标准强毒RH株之间在529bp重复序列的变异进行研究,从而为进一步的分子诊断和分子遗传学研究以及弓形虫病的防制奠定基础。【方法】抽提基因组DNA后,用PCR方法对10个虫株的529bp重复序列进行扩增;扩增产物经纯化后克隆于pGEM-TEasy质粒载体,再经菌落PCR及酶切鉴定阳性克隆,然后对阳性克隆进行测序及序列分析。【结果】10个弓形虫虫株的529bp重复序列都不完全相同,它们之间的核苷酸序列变异范围为0.8%～2.9%。变异主...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
杨宝华 闵永洁 陈溥言 蔡宝祥 王启松
根据已知A抗原基因设计并人工合成了两段寡聚核苷酸片段并进行末端标记作为探针,与pAcyc184 MDV BamHI-B 质粒经过 EcoRI、pvu Ⅱ酶切电泳后作 Southern 转印杂交,其中2.2kb 片段杂交阳性.将此片段与 pBluescript(PBS)载体连接转化 E.coli JM109菌株,经原位杂交、酶切分析鉴定,得到3株 pBSA2.2k 阳性克隆.进一步酶切证明,A 抗原基因存在于此片段中.
关键词：
马立克氏病病毒 A抗原基因 鉴定 亚克隆
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
吴贤福 蔡宝祥 陈溥言
将ＭＤＶＧＡ株ＢａｍＨＩ基因文库中含Ｉ３片段的质粒ｐＡＣＹＣ１８４和Ｋ３片段的质粒ｐＨＣ７９扩增。用碱裂解法抽提质粒后，利用相应的限制性内切酶切出目的基因片段，连接到合适的载体上，构建了完整的ＭＤＶＢ抗原基因克隆载体。通过内切酶分析、地高辛（ＤＩＧ）—探针原位杂交、ＤＮＡ序列测定，确认克隆的Ｂ抗原基因正确。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
马英 林顺权 高毅 张军 吕柳新 夏宁邵
将乙肝病毒表面抗原 (HBs Ag)基因与 Ca MV3 5 s启动子及 nos终止子构建植物表达载体 p1 3 0 1 HBs,直接法转入根癌农杆菌 EHA1 0 5 (Agrobacterium tumefaciens) ,以该菌株介导叶盘法转化番茄 ,得到抗潮霉素的再生植株 .抗性苗总 DNA经 PCR、Southern斑点杂交证实目的基因已整合到番茄基因组中 ,EILSA检测证明在番茄中正确表达了乙肝表面抗原蛋白 .
[期刊] 中国农业科学
[作者]
宋成义 高波 吴晗 王霄燕 王升智 周辉云 陈国宏 毛九德
【目的】揭示若干精子抗原基因(SPAG1、SPAG5、SPAG6、SPAG11C和SPAG11E)在梅山公母猪生殖道及成熟精子中的mRNA时空表达规律。【方法】利用RT-PCR技术分析各基因在生殖道和精子中组织表达谱,利用半定量RT-PCR分析其在初生至150d梅山公猪睾丸中的发育性表达特性。【结果】5个基因在梅山公母猪生殖道组织中呈现不同的表达特性。其中SPAG1在睾丸中表达丰度最高,在精囊腺、前列腺、附睾体、子宫角和输卵管呈现中等丰度表达,而在附睾尾、子宫颈和卵巢的表达信号较弱。SPAG5在睾丸中表达丰度最高,在前列腺、附睾体和子宫颈中表达信号较弱。而SPAG6在睾丸中高丰度表达,在输卵管...
关键词：
猪 精子抗原 生殖道 精子 时空表达
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