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[期刊] 中国农业科学
[作者]
张楠 韩光杰 刘琴 李传明 祁建杭 陆玉荣 夏杨 徐健
【目的】研究稻纵卷叶螟（Cnaphalocrocis medinalis）转录因子CncC(Cap‘n’Collar Isoform C）及其调控的抗氧化酶基因在抗稻纵卷叶螟颗粒体病毒（Cnaphalocrocis medinalis granulovirus,CnmeGV）感染中的作用，进一步丰富昆虫抗杆状病毒感染的免疫调控机制研究。【方法】使用RT-PCR克隆得到稻纵卷叶螟CncC(CmCncC)cDNA全长序列并分析其蛋白结构；以10~6 OB/mL浓度的CnmeGV或同浓度的CnmeGV和1 mmol·L~(-1) CncC抑制剂——ML385混合液饲喂稻纵卷叶螟3龄幼虫，感染后6—48 h取样，分析ML385对CnmeGV诱导的稻纵卷叶螟丙二醛（MDA）含量变化的影响，同时采用RT-qPCR分析病毒DNA复制水平、稻纵卷叶螟CmCncC、谷胱甘肽过氧化物酶-3(glutathione peroxidase-3,GPx-3）、锰超氧化物歧化酶（manganese superoxide dismutase,Mn-SOD）和硫氧还蛋白过氧化物酶（thioredoxin peroxidase,TPx）等基因的表达水平，并每隔24 h统计幼虫死亡数，绘制10 d内幼虫的Kaplan-Meier生存曲线。使用1 mmol·L~(-1) ML385或1 mmol·L~(-1) ML385和200μg·mL~(-1)抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC）混合液饲喂感染的幼虫，使用RT-qPCR分析不同时间病毒DNA复制水平。【结果】CmCncC cDNA全长为3 404 bp，包括321 bp的5′-UTR,847 bp的3′-UTR和2 211 bp的ORF，编码一个长度为736 aa的蛋白，预测蛋白质分子质量为75.8 kDa。稻纵卷叶螟感染CnmeGV后丙二醛含量在感染的前12 h内显著上调，随后在24 h恢复到正常水平，而在48 h低于对照组。病毒感染导致CmCncC在12、24和48 h显著上调表达，分别为对照组的1.56、2.16和2.63倍，NAC处理显著降低了CnmeGV诱导的CmCncC表达上调的倍数，分别降低至对照组的48.12%、59.83%和56.32%。ML385处理导致病毒基因拷贝数在12和24 h分别增至对照组的1.79和1.76倍，同时导致稻纵卷叶螟感染CnmeGV 10 d后的死亡率显著升高，从单CnmeGV处理组的73.33%升至94.14%，而NAC处理能够减轻由于CncC抑制导致的病毒基因拷贝数的上调。CnmeGV感染分别导致GPx-3表达量在感染后48 h上调至对照组的3.68倍，Mn-SOD表达量在12、24和48 h分别上调至对照组的1.73、2.62和2.77倍，TPx表达量在12和24 h分别上调至对照组的1.76和2.10倍，但48 h恢复至对照组水平。使用NAC或CncC抑制剂处理感病幼虫发现，GPx-3、Mn-SOD和TPx对CnmeGV感染的响应被显著削弱。【结论】CmCncC介导了CnmeGV感染诱导的GPx-3、Mn-SOD和TPx上调表达，降低CnmeGV感染导致的氧化应激，从而限制病毒在其体内的复制并降低氧化损伤。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
于连伟 姜兴林 杨灵玲 王贺 张玉阳 谢莉娜 夏子豪 李洪连 杨雪 施艳
【背景】黄瓜绿斑驳花叶病毒（cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV）是我国重要的检疫性植物病毒，对蔬菜和瓜类产业造成严重的经济损失。ERF转录因子可以调控植物生物和非生物胁迫，参与植物对多种病害的防御作用。前期研究显示CGMMV侵染后可以显著下调寄主转录因子Nb ERF RAP2-1的表达。【目的】明确ERF转录因子家族成员在CGMMV侵染过程中的作用，为CGMMV病害防治提供理论依据。【方法】运用MEGA7.0构建系统进化树，对基于Nb ERF RAP2-1蛋白的氨基酸序列进行系统进化分析；构建Nb ERF RAP2-1的荧光表达载体，并观察其亚细胞定位；利用q RT-PCR技术分析Nb ERF RAP2-1在CGMMV侵染不同时期的表达量；通过烟草脆裂病毒（tobacco rattle virus,TRV）介导的基因沉默（VIGS）和瞬时过表达Nb ERF RAP2-1分析其在CGMMV侵染过程中的作用。【结果】系统进化树分析表明，Nb ERF RAP2-1与多种烟草的ERF转录因子同源性极高，与拟南芥的ERF转录因子亲缘关系较远；亚细胞定位结果显示Nb ERF RAP2-1定位于细胞核，作为转录因子行驶功能；CGMMV侵染对本氏烟内源基因Nb ERF RAP2-1的转录水平影响结果显示，在CGMMV侵染6、9、12 d时Nb ERF RAP2-1的表达量无明显变化，在CGMMV侵染15和18 d时Nb ERF RAP2-1表达量显著下调；TRV介导的VIGS可以将植物内源基因Nb ERF RAP2-1有效沉默，在沉默的植株系统叶上接种CGMMV,8 d对照植株系统叶出现斑驳、卷曲症状而Nb ERF RAP2-1沉默植株无症状，同时CGMMV RNA水平和蛋白水平检测结果也表明TRV:Nb ERF RAP2-1可以有效抑制CGMMV的积累；同样，分别在本氏烟叶片瞬时过表达Nb ERF RAP2-1 24、48和72 h时检测CGMMV RNA水平和蛋白水平表达量，结果显示在病毒侵染早期，即复制阶段就抑制CGMMV的表达。【结论】Nb ERF RAP2-1可以有效抑制CGMMV侵染初期病毒复制，即病毒RNA复制阶段；随着CGMMV不断侵染，在CGMMV细胞间运动和系统运动时期，CGMMV识别防御相关基因Nb ERF RAP2-1并抑制该基因的转录；当Nb ERF RAP2-1缺失后可能抑制了下游蛋白的转录或表达，从而抑制病毒侵染后期的积累。由此可见，Nb ERF RAP2-1在CGMMV侵染过程中发挥了重要作用。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
王江勇 郭志勋 冯娟 潘金培 陈毕生
对杂色鲍(HaliotisdiversicolorReeve)进行病毒悬液和PBS(对照)注射感染,研究其血清免疫因子SOD、ACP、AKP、MPO活性的变化,并对实验结果进行统计学分析。结果表明,(1)注射病毒悬液组SOD活性变化为逐渐上升,至8h后达到最高点,然后逐渐下降;对照组SOD活力呈下降趋势,8h后上升,12h后恢复至初始水平,二者结果差异均为显著或极显著(P0 05)。(3)注射病毒悬液组MP...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
耿静微 李厚伟 尹海燕 陈红英 李金磊 韩志涛 崔保安 魏战勇
【目的】了解猪细小病毒(PPV)感染对抗病毒相关细胞因子mRNA转录时相的影响,探讨宿主-病毒之间的作用关系。【方法】对PPV感染PK-15细胞的病变进行了显微观察,运用荧光定量PCR技术,测定和分析PPV感染PK-15细胞后,细胞病毒DNA含量及巨噬细胞炎症蛋白1α(MIP-1α)、转化生长因子β1(TGF-β1)、磷酸甘油酸激酶1(PGK1)和MURR1等细胞因子mRNA相对表达量的变化。【结果】PPV可以快速诱导PK-15细胞产生细胞病变。感染后1 h即可检测到PPV DNA,随着时间的延长,PPV DNA含量逐渐增加,并于48 h时达到峰值,相对含量为1 800左右。MIP-1α和PG...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
韩志涛 李金磊 陈红英 王淑娟 耿静微 翟阿官 魏战勇 崔保安
【目的】了解猪圆环病毒2型(PCV-2)感染对PK-15细胞抗病毒相关因子转录时相的影响,探讨宿主-病毒之间的作用关系。【方法】运用荧光定量PCR技术,测定和分析PCV-2感染PK-15细胞后0(未接种病毒),1,6,12,24,48,72 h时病毒DNA含量及细胞因子IFN-βI、FN-γI、FNAR-1I、FNAR-2、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ、MX1、NOS、RNaseL和IRF-3 mRNA转录水平的变化。【结果】PCV-2感染PK-15后1 h就可以检测到病毒DNA,在感染后24 h病毒开始大量迅速增殖,于感染72 h时达到最高峰。与0 h相比,PCV-2感染后IFN-βI、RF-3的...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
高三基 陈平华 洪健 陈如凯
利用电镜技术对感染甘蔗黄叶病毒蔗叶组织超微结构进行观察表明,韧皮部伴胞及叶肉细胞内的线粒体、叶绿体等细胞器及细胞核都发生了明显的病理变化.线粒体形态异常,有的肿大、内嵴模糊,严重者内嵴消失,空泡化,仅剩未被消解的残骸;叶绿体被膜破裂,严重者被膜完全消解,基粒类囊体和基质片层消失,基质外流.维管束鞘细胞中的叶绿体被膜和基质片层也遭到破坏,淀粉粒增多、膨大;细胞核形态变为不规则,局部核膜破裂,核内染色质分布不均匀,呈降解状.
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
王志 潘启华 陆可 罗君志 夏必琳 姜正正 申萍 刘红 陈天圣
Jun(Jun proto-oncogene, AP-1 transcription factor subunit)为组成转录因子AP-1的亚单位或亚家族成员,参与机体的免疫应答。为了进一步了解jun基因在鱼类抗病毒天然免疫方面的功能,以日本青鳉为研究对象,采用CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术获得jun缺失的纯合子突变体品系,并对其在神经坏死病毒(nervous necrosis virus, NNV)感染过程中的特征展开研究。基因克隆结果显示,野生型日本青鳉的jun基因编码区全长921 bp,共编码306个氨基酸,含有N端的Jun超家族结构域和C端的bZIP超家族结构域,并在眼、脑、鳃、心脏、头肾、卵巢、精巢、肝脏、脾脏9个检测的组织中均有较高的表达。突变体jun~(-/-)在基因组减少了124 bp,而蛋白只剩下59个氨基酸的N端序列,缺失了Jun超家族结构域和bZIP结构域。病毒感染实验结果显示,jun~(-/-)仔鱼对于神经坏死病毒(nervous necrosis virus, NNV)的耐受能力相对野生型仔鱼有所提升;jun~(-/-)成鱼眼、脑、鳃和肌肉组织内的病毒相对含量都显著低于野生型。进一步的qRT-PCR结果显示,在jun~(-/-)青鳉中,fosl1的表达极显著下调,tbk1的表达降低,而irf3的表达极显著上调。以上结果表明,jun缺失能增强青鳉耐受NNV病毒的能力,jun基因可能是一个青鳉抗病毒信号通路的负调控因子。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
雷质文 黄倢 杨冰 俞开康
12 9尾中国对虾 (Penaeuschinensis)分别捕自未暴发白斑综合症 (WSSV病毒所致 )虾池、WSSV暴发虾池以及曾暴发WSSV虾池。用斑点杂交和组织病理学方法确定各尾对虾的染毒 (WSSV)程度。用 96孔酶标板法测量相应个体血淋巴上清液的抗菌活力 (Ua)、溶菌活力 (UL)、酚氧化酶 (PO)活性以及过氧化酶 (POD)相对活性 ;用硝酸纤维膜斑点法测定其碱性磷酸酶 (ALP)相对活性 ;用血凝法测定其凝集效价(HAT)。通过对以上免疫指标进行统计分析 ,结果表明 ,WSSV感染与对虾血淋巴PO活性以及ALP相对活性变化有紧密联系 ;不同虾池各免疫因子差异显著 ,发病虾池...
[期刊] 华北农学报
[作者]
温立斌 何孔旺 杨汉春 郭容利 俞正玉 茅爱华 倪艳秀 张雪寒 周俊明 吕立新 李彬 王小敏
为探讨类猪圆环病毒2型因子P1感染对猪抗病毒蛋白分子mRNA转录的影响,将P1分子克隆接种30日龄健康广西巴马小型猪,利用实时荧光定量PCR技术对猪外周血单个核细胞抗病毒蛋白分子PKR、2'-5'OAS2、 RNase L和Mx1的mRNA转录水平的变化进行了定量分析。结果表明,PKR mRNA转录在接种后8 d和40 d呈上调趋势;而2'-5'OAS2 mRNA在3 d和17 d下调,Mx1 mRNA也在接种后17 d下调;RNaseL mRNA转录水平则没有发生明显变化。研究揭示P1感染猪后,机体的抗病毒蛋白的功能受到了不同程度的影响。
关键词：
P1 外周血单个核细胞 抗病毒蛋白
[期刊] 华北农学报
[作者]
温立斌 何孔旺 杨汉春 郭容利 钟书霖 俞正玉 茅爱华
采用实时定量反转录多聚酶链反应方法,检测健康对照组及类圆环病毒因子P1感染组的猪外周血单个核细胞中TLRs mRNA的表达。结果表明,病毒感染后3 d,除TLR2和TLR10外,其余TLRs mRNA表达皆下调。此后不同时相感染组的TLRs mRNA表达水平基本都处于恢复、上调地位。具有明显变化的表现为感染后第24天和第40天,TLR2 mRNA的表达显著上调(P<0.1)。结果提示,TLR2和TLR9介导的炎性反应可能在P1识别及其致病机制中起重要作用。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
彭瑶顺 李方瑾 徐佳汇 戰婷 王全溪 周伦江
采用Illumina第二代高通量测序技术对感染伪狂犬病毒PRV FJ 2012株的湖羊肾脏组织进行转录组测序，对两组羊的差异表达基因进行筛选，差异显著性表达的基因进行GO和KEGG显著性富集分析，最后选择qPCR验证分析部分差异表达基因的mRNA表达情况.结果表明，PRV FJ 2012株感染湖羊，与对照组相比肾脏中共发现2 679个差异表达基因，其中有1 269个基因下调，1 410个基因上调.GO显著性富集分析结果表明，PRV FJ 2012株感染湖羊肾脏涉及生物过程的差异表达基因最显著的GO生物学功能是蛋白质折叠，涉及细胞组分最显著的生物学功能是细胞核成分，涉及分子功能最显著的生物学功能是未折叠蛋白功能.KEGG分析表明，差异表达基因参与的代谢通路有316条，其中FoxO信号通路、IL-17信号通路、TNF信号通路差异最显著.本研究重点对FoxO通路的基因网络进行了分析，结果表明，该通路共有33个差异表达基因，其中22个下调，12个上调. qPCR验证结果表明，PRV FJ 2012株感染湖羊肾脏，基因STAT3、IL-6、FOXO3、BCL6、ATG8表达上调；基因IRS、SGK2、ATROGIN、PEPCK表达下调，其结果与FoxO信号通路转录组数据结果一致.
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
张琴 陈康勇 田佳音 邹钧
白细胞介素34（Interleukin-34，IL-34）是一种多功能细胞因子，在先天免疫和炎症过程中发挥重要作用。利用荧光定量PCR技术分析IL-34在细菌和病毒感染后的表达情况。结果显示，IL-34在健康斑马鱼组织和胚胎发育过程中呈常量表达。腹腔注射脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）和聚肌苷酸-聚胞苷酸(Polyinosinic acid-polycytidylic acid，Poly (I:C))后，斑马鱼脾中IL-34表达在48 和72 h均上调，肠中IL-34表达均显著升高（除LPS刺激24 h时IL-34表达下降外）。斑马鱼感染迟缓爱德华氏菌（Edwardsiella tarda，E.tarda）后，肠中IL-34表达明显增加（3、9和24 h），而脾中IL-34的表达则受到抑制（6、9和72 h）。腹腔注射感染鲤春病毒血症病毒（spring viremia of carp virus，SVCV）后，脾（1、3、5和7 d）和肠（1和3 d）中IL-34表达也显著上调。体外分析结果显示，SVCV感染和LPS刺激增强ZF4细胞中IL-34的表达；LPS、IL-1β和IFNφ1诱导脾原代细胞表达IL-34。实验结果表明，鱼类IL-34基因在抵御细菌和病毒感染过程中发挥重要作用。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
乐文静 史文琦 季英华 周益军
使用斑点免疫结合试验(DIBA)和PCR法分别对灰飞虱体内水稻条纹病毒(rice stripe virus,RSV)和沃尔巴克氏体(Wolbachia)的感染特点进行研究。结果发现:灰飞虱体内广泛存在Wolbachia感染,但是灰飞虱体内Wolbachia的感染与其体内携带RSV的特点不存在明显的相关性,同时二者在经卵传播过程中也没有明显的相关性。这暗示了RSV和Wolbachia在灰飞虱体内虽然都可以垂直传播给下一代,但是二者在传播方式上或者在传播过程中可能是两个相对独立、相互间没有明显影响的过程。
[期刊] 华北农学报
[作者]
林静 杨永庆 侯文焕 史晓蕾 张孟臣 谢令琴 杨春燕
为了建立以本氏烟为模式作物研究ＳＭＶ侵染机制的平台，以可系统侵染本氏烟的重组型ＳＭＶ分离物ＨＢＲＳ为毒源，构建感染ＨＢ－ＲＳ本氏烟的酵母双杂ｃ ＤＮＡ文库。利用ＳＭＡＲＴ技术获得本氏烟的双链ｃ ＤＮＡ文库，通过双酶切手段将ｃＤＮＡ文库构建至ｐＧＡＤＴ７－Ｓｆｉｉ载体上。检测结果显示，文库容量约为３．２×１０６ｃｆｕ，插入ｃＤＮＡ片段长度为０．７５～２．００ ｋＢ，平均长度大于１．００ ｋＢ，且多态性丰富，表明文库质量较好。该酵母双杂文库的构建为钓取与ＳＭＶ互作的寄主因子和系统性研究ＳＭＶ侵染机制奠定了物质基础。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
邵秋红 凌榕镔 朱兆荣 刘娟 郭志兴 王鹏
【目的】探讨中药复方苦芩对感染猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus of swine,TGEV)的猪肾细胞(PK-15)中凋亡基因Bcl-2/BAX mRNA转录的影响。【方法】体外扩增TGEV,用TGEV感染PK-15细胞的模型进行体外试验研究,试验中设有复方苦芩组、空白组、模型组及黄芪多糖组,在测定了病毒半数感染细胞量(TCID50),复方苦芩及黄芪多糖药液对PK-15细胞的最大无毒浓度后,制作细胞爬片采用瑞士染色法染色观察PK-15细胞的形态变化;按试剂盒操作提取各试验组RNA并及时反转录为cDNA,采用实时荧光定量PCR法检测细胞中...
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