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[期刊] 中国农业科学
[作者]
黄磊 胡建坤 俞咪娜 于俊杰 王亚会 郑梦婷 郑睿 刘永锋
【目的】研究稻曲病菌(Ustilaginoidea virens)致病力丧失突变菌株B-1015,克隆和分析T-DNA插入位点的侧翼序列,为稻曲病菌的致病机制研究提供参考。【方法】分析稻曲病菌T-DNA插入突变体B-1015菌株的生长速率、产孢量、孢子萌发率以及致病力等生物学表型。用PCR检测T-DNA在B-1015基因组中插入的稳定性,用Southern杂交检测T-DNA插入的拷贝数,用hiTail-PCR扩增T-DNA侧翼序列,用RACE PCR克隆T-DNA标记基因,半定量RT-PCR分析所克隆基因的表达情况。【结果】与野生菌株P1相比,突变菌株B-1015的生长速率和产孢量都有较明显的...
关键词：
稻曲病菌 致病力 T-DNA 基因克隆
[期刊] 中国农业科学
[作者]
薄惠文 俞咪娜 于俊杰 尹小乐 丁慧 王亚会 刘永锋
【目的】分析稻曲病菌（Ｕｓｔｉｌａｇｉｎｏｉｄｅａ ｖｉｒｅｎｓ）致病力减弱的ｔ－ｄｎａ插入突变菌株Ｂ１２４１的生物学性状和致病力，并结合分子生物学手段研究其ｔ－ｄｎａ插入位点的侧翼基因，以解析突变基因在稻曲病菌生长和致病过程中的作用，从而为阐明稻曲病菌致病机制提供理论基础。【方法】以野生菌株Ｐ１作为对照，观察并检测突变菌株Ｂ１２４１的菌落形态、生长速率、孢子形态、产孢量等生物学性状；采用注射接种的方法将菌丝和孢子的混合液接种于水稻穗苞中，统计每穗发病的病粒数，分析Ｂ１２４１的致病性变化；突变菌株Ｂ１２４１在不含有潮霉素的Ｐｓａ平板上转接５代之后，ＰＣｒ检测ｔ－ｄｎａ插入的稳定性并通过ｓｏＵｔ．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
黄磊 俞咪娜 胡建坤 于俊杰 尹小乐 聂亚锋 陈志谊 刘永锋
【目的】分析稻曲病菌T-DNA插入突变体库中致病力减弱突变菌株B-726的生物学性状,分析其T-DNA插入位点的侧翼序列,克隆因外源基因插入被破坏正常表达的基因,为明确该基因在稻曲病菌致病过程中的作用奠定基础,并为稻曲病防治新途径的制定提供理论依据。【方法】通过测定突变菌株B-726生长速率、产孢能力及致病力检测,分析其生物学性状;Southern杂交分析B-726外源基因插入的拷贝数;利用HiTail-PCR获得T-DNA插入位点的侧翼序列;运用RACE-PCR技术,克隆与插入位点毗邻的基因全长;用半定量RT-PCR分析该基因表达情况。【结果】突变菌株B-726与野生菌株P1相比致病力极显著...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
黄定宣 胡杨 孙光超 高小宁 尹志远 黄丽丽
【目的】筛选苹果树腐烂病菌T-DNA插入表型或致病突变体,为研究该病菌的表型及致病相关基因提供起始材料。【方法】从建立的T-DNA插入突变体库中,随机挑选230株突变体菌株进行表型观察及致病性测定,并对部分致病突变体进行TAIL-PCR侧翼扩增。【结果】大部分的突变体与野生型菌株03-8在表型及致病性方面无明显差异,仅30.87%的突变体表现出了明显的变化;其中16株突变体(占突变体总数的6.95%)致病性发生了明显的增强,而表型与03-8相比无明显的变化;20株突变体(占突变体总数的8.69%)致病性与03-8无显著性差异,但是表型发生了明显的变化;16.1%的突变体则同时表现出表型及致病性...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
俞咪娜 胡建坤 黄磊 于俊杰 尹小乐 聂亚锋 陈志谊 刘永锋
【目的】研究稻曲病菌致病力增强的ATMT突变菌株5062,为稻曲病菌致病机制解析、致病相关基因克隆提供方法基础。【方法】测定和观察5062的菌落直径、菌落形态、产孢能力等生物学特性,进一步利用TAIL-PCR和RACE技术克隆5062基因组的T-DNA侧翼基因,并比对分析基因的信息,最后利用RT-PCR检测突变基因的表达量。【结果】与野生型菌株相比,突变菌株5062田间接种表现为致病力增强,在MM和水琼脂培养基上生长速率减慢,产生大量分生孢子,而在PSA和TB3培养基上,其菌落形态、色素等方面与野生型无明显差异。TAIL-PCR扩增得到的紧邻T-DNA两侧的侧翼序列在野生型中不相邻。TAIL-...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
于俊杰 聂亚锋 俞咪娜 尹小乐 胡建坤 黄磊 陈志谊 刘永锋
【目的】克隆稻曲病菌(Ustilaginoidea virens)分生孢子高产突变菌株A2588的T-DNA插入突变基因,解析该基因在稻曲病菌分生孢子形成中的功能,为进一步揭示稻曲病菌的分生孢子形成机制提供理论基础。【方法】测定A2588的产分生孢子能力、孢子萌发率、菌丝直线生长能力和热敏感性等生物学特性,利用hiTAIL-PCR、RACE和半定量PCR等方法克隆T-DNA插入突变基因,并结合生物信息学方法分析T-DNA插入导致分生孢子产量提高的分子机理。【结果】与稻曲病菌野生型菌株70-22相比,突变菌株A2588在PS培养液中产生数量为10倍以上的分生孢子,在MM培养液中产生数量约20倍的...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
何晨阳 王筱虹 顾光昊 王金生
水稻白叶枯病菌致病基因突变与侵入和增殖的关系何晨阳，王筱虹，顾光昊，王金生（南京农业大学植物保护学系，南京２１００９５）ＲＥＬＡＴＩＯＮＯＦＭＵＴＡＴＩＯＮＯＦＰＡＴＨＯＧＥＮＩＣＩＴＹＧＥＮＥＬＯＣＩＴＯＩＮＦＥＣＴＩＯＮＡＮＤＣＯＬＯＮＩＺＡＴＩ...
[期刊] 华北农学报
[作者]
李余生 杨娟 黄胜东 王才林
为了鉴定水稻对稻曲病的抗病基因,利用157个家系组成的大关稻(Japonica)/IR28(Indica)重组自交系(Recombinant inbred lines,RIL)群体,采用人工接种方法,以发病病情指数作为表型值。2012和2013年,接种鉴定亲本及RILs对水稻稻曲病致病菌株Pi-1的抗性。利用QTL Cartographer分析软件,对水稻抗Pi-1菌株基因进行检测分析。2年共检测到7个QTL,分别为位于第2、7、8、11和12染色体上的qFsr2a、qFsr2b、qFsr7、qFsr8a、qFsr8b、qFsr11、qFsr12,单个位点的贡献率为8.5%~17.2%。其中,...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
潘以楼 汪智渊 吴汉章
从江苏、河北、上海等地采集的水稻恶苗病病株上分离到抗、感多菌灵（ＭＢＣ）的稻恶苗病菌（Ｆｕｓｘａｒｉｕｍｍｖｎｉｌｉｆｏｒｍｅ）菌株中，选用７个抗性菌株和６个敏感菌株均获得氯酸盐的硝酸盐利用缺陷突变体（ｎｉｔｍｕｔａｎｔ）。从抗性菌株获得ｎｉｔ突变株的频率显著高于敏感菌株，突变株对ＭＢＣ的敏感性与其亲本菌株完全一致。抗性菌株的ｎｉｔ突变株间及敏感菌株的ｎｉｔ突变株间均能产生互补反应而形成异核体，抗性菌株的ｎｉｔ突变珠和敏感菌株的ｎｉｔ突变株间不能产生互补反应。Ｆ．ｍｉｂｕｋｕｆｉｒｎｅ的抗、感ＭＢＣ菌株的ｎｉｔ突变性状有一定的稳定性，但产孢密度和致病力较亲本菌株显著下降。
关键词：
稻恶苗病茵,多菌灵,菌株,nit突变体
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
张震 李小华 黄新凤 邵小虎 李林
克隆了乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)菌株AS1.2829的1种主要细胞壁自溶素-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶的编码基因acmAas,并对其编码蛋白AcmAas的结构进行了预测,发现该蛋白由1个具催化活性的N-末端和1个具细胞壁锚定活性的C-末端结构域组成,其中C-末端又由3个LysM(lysin motif)结构域组成,具有典型的"βαβα"型二级结构。进一步通过体外在acmA基因中引入红霉素抗性基因(Emr)而构建具有与宿主菌染色体acmA基因进行整合作用的重组基因,并导入宿主菌后筛选得到发生染色体整合重组的重组菌株MB257,对该菌株的形态与生长特性进行了初步研究,结果表明该...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
王文斌 陈志谊
为了深入研究稻曲病菌生物学特性,为防治稻曲病提供科学依据,本研究从不同致病力稻曲病菌中,挑选了3个致病力强、3个致病力弱的菌株,从不同温度、pH、碳源、氮源对不同致病力的稻曲病菌进行研究。结果表明,稻曲菌菌丝生长的最适温度均为28℃,在7 d内致病力弱的菌株生长速率较快,菌丝生长的最适pH为6~7。致病力弱的菌株的最适氮源为牛肉浸膏,致病力强的菌株的最适氮源为蛋白胨,KNO3不为稻曲病菌提供氮源,尿素抑制稻曲病菌的生长。在氮源充足的条件下,稻曲病菌可以利用多种碳源,乳糖不能为稻曲病菌提供碳源,致病力弱的菌株的最适碳源为蔗糖,致病力强的菌株的最适碳源为葡萄糖。
关键词：
稻曲菌 致病力 生物学特性
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李燕 于俊杰 刘永锋 尹小乐 张荣胜 俞咪娜 陈志谊
[目的]测定稻曲病菌(UStilaginoidea vireas)的产孢稳定性、产孢能力与致病力的相关性及在水稻品种上的致病性分化。[方法]采用液体培养和人工接种的方法对采自全国9个省(市)的150个稻曲病菌菌株进行产孢能力及田间致病力测定。[结果]3次产孢试验中产孢量标准偏差小于10.0的菌株有132个,占总数的88.0%。接种于两优培九(感病品种)的平均病情指数为67.7,其中98个菌株病情指数大于50;接种于淮稻5号(中等抗病品种)的平均病情指数为21.8;接种于武育粳3号(抗病品种)的平均病情指数为16.1,其中113个菌株病情指数小于25。稻曲病菌的产孢量与致病性呈正相关,但相关系数...
关键词：
稻曲病菌 产孢 致病力 致病类型
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
汤倩 张淑静 郭蔷薇 王永宏 张兴
【目的】通过同源重组技术敲除嗜线虫致病杆菌（Ｘｅｎｏｒｈａｂｄｕｓ ｎｅｍａｔｏｐｈｉｌａ）Ｙｌ００１中ｃｐＸｒ基因，为进一步研究ｃｐＸｒ调节子调控抗菌物质产生的机理奠定基础。【方法】通过融合ｐｃｒ技术，将ｃｐＸｒ基因的上、下游同源片段及质粒ｐＪｃＶ５３上的卡那抗性基因Ｋｍｒ ３个片段连接，克隆到自杀载体ｐｄｍ４中，将重组质粒转化到大肠杆菌ｓ１７－１λｐｉｒ中，经接合转移导入嗜线虫致病杆菌内，通过同源重组敲除ｃｐＸｒ基因；采用琼脂扩散法和抑制菌丝生长速率法分别测定突变菌株对枯草芽孢杆菌和番茄灰霉病菌的抑制作用。【结果】从Ｘ．ｎｅｍａｔｏｐｈｉｌａ Ｙｌ００１基因组中成功敲除ｃｐＸｒ基因，得到了．．．
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
董朝霞 钟锦 俞雯雯 洪鑫发 陈勇
[目的]尖角突脐孢菌(Exserohilum monoceras)是生物防治中防治稗草(Echinochloa crusgalli(L.)Beauv)的病原真菌之一。本研究通过紫外光诱变并筛选出对稗草高致病力的尖角突脐孢菌诱变株。[方法]通过紫外光诱变获得诱变菌株并检测诱变株产孢量、离体叶片致病力和稗草植株病情指数，筛选出对稗草高致病力的尖角突脐孢菌诱变株；对筛选出的高致病力菌株进行分子鉴定及生物学特性研究，并对其安全性进行研究。[结果]根据不同紫外光照射时间处理后菌株的死亡率，确定最佳诱变时间为25 min;检测诱变株产孢量、离体叶片致病力和活体稗草植株病情指数，筛选出4株高致病力诱变菌株，提取4株诱变菌株基因组DNA,对其ITS序列比对分析表明，4株诱变得到的菌株与尖角突脐孢菌的序列相似度为98%;出发菌株和诱变株仅对高粱有轻微的侵染，一段时间后，高粱恢复正常；但对其他7种作物安全。[结论]紫外光诱变尖角突脐孢菌的最佳时间为25 min;诱变株X27-UV148、X27-UV48、X27-UV45和X27-UV286为高致病力尖角突脐孢菌，为生物防治提供了优异的新材料；紫外光诱变提高了尖角突脐孢菌耐紫外线、耐高温和耐低温的能力。
关键词：
尖角突脐孢菌 稗草 紫外光诱变 致病力
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
董朝霞 钟锦 俞雯雯 洪鑫发 陈勇
【目的】尖角突脐孢菌(Exserohilum monoceras)是生物防治中防治稗草(Echinochloa crusgalli (L.) Beauv)的病原真菌之一。本研究通过紫外光诱变并筛选出对稗草高致病力的尖角突脐孢菌诱变株。【方法】通过紫外诱变获得诱变菌株并检测诱变株产孢量，离体叶片致病力和稗草植株病情指数，筛选出对稗草高致病力的尖角突脐孢菌诱变株；对筛选出的高致病力菌株进行分子鉴定及生物学特性研究，并对其安全性进行研究。【结果】根据不同紫外光照射时间处理后菌株的死亡率，确定最佳诱变时间为25分钟；检测诱变株产孢量、离体叶片致病力和活体稗草植株病情指数，筛选出4株增强高致病力诱变菌株，提取4株诱变菌株基因组DNA，对其DNA序列比对分析表明，4株诱变得到的菌株与尖角突脐孢菌的序列相似度为98%；出发菌株和诱变株仅对高粱有轻微的侵染，一段时间后，高粱恢复正常；但对其它7种作物安全。【结论】综合各种筛选，诱变株X27-UV148、X27-UV48、X27-UV45和X27-UV286为紫外光诱变得到的高致病力尖角突脐孢菌，为生物防治提供了优异的新材料。
关键词：
尖角突脐孢菌 稗草 紫外光诱变 致病力
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