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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
史洪才 玛依拉 黄俊成 刘明军 李建华 郭志勤
研究了移植方法和培养液对显微注射法生产转基因小鼠的影响。结果表明 ,小鼠受精卵显微注射外源基因后 ,进行单、双侧输卵管移植 ,受体的妊娠率分别为 34.4 %和 37.5 % (P>0 .0 5 ) ,差异不显著 ;但仔鼠成活率分别为 83.6 %和 97.2 % (P
关键词：
显微注射 转基因小鼠 受精卵移植
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王菊花 解倩倩 范彩云 方富贵 周杰 曹鸿国 章孝荣
【目的】通过对6周龄昆明小鼠腹腔内单次注射不同剂量的白消安来制作精原干细胞移植受体模型。【方法】将104只昆明小鼠随机分成4组,分别注射0(对照组,注射等量的白消安溶解液二甲基亚砜(DMSO)),10,20和30mg/kg白消安,于注射白消安后5,7,9,11和13周记录小鼠的死亡数、小鼠睾丸外观体积、小鼠睾丸质量和小鼠体质量,计算睾丸指数;通过组织学观察注射不同剂量白消安后小鼠曲细精管精子的恢复情况,并检测受体小鼠血液中红细胞和白细胞数量的变化。【结果】注射0(对照组),10,20和30mg/kg白消安13周后,小鼠死亡率分别为0(0/22),11.54%(3/26),17.86%(5/28...
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
沙珍霞 陈松林 刘洋 徐美瑜 叶寒青
以鱼类胚胎细胞和胚胎干细胞为核供体进行细胞移植构建鱼类嵌合体研究方面,现有的成功报道均采用显微注射方法;在转基因海水鱼类研究中,显微注射也是最为常用的技术,本实验室在花鲈胚胎干细胞嵌合体构建和外源基因向花鲈胚胎的转移研究中取得的结果也充分证实,显微注射技术是开展海水鱼类细胞移植和转基因研究的首选技术。
关键词：
显微注射 细胞移植 转基因 鱼类
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王恺 田文儒 高善颂
【目的】研究改良的CZB培养液(TCZB)对小鼠早期胚胎发育的影响,寻找一种可以提高动物胚胎热耐受性的新型培养液。【方法】利用原核表达的方法得到TAT蛋白和小鼠Hsp70的串联表达体—Tat-Hsp70,通过在CZB培养液中添加Tat-Hsp70蛋白,配制成TCZB培养液。比较热应激组及对照组胚胎发育率和囊胚孵出率的不同。【结果】小鼠胚胎经39℃热应激处理后,CZB组、TCZB组及对照组的囊胚发育率及囊胚孵出率无显著差异。41℃热应激处理后各组则有显著差异,对照组囊胚发育率及囊胚孵出率(83.7±6.1和75.6±4.5)显著高于TCZB组(81.3±4.5和76.5±7.6)(P<0.05)...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
慕小倩 杨超 季青 安德荣
用两种微生物培养液(瑞拉菌素和吡弗咯菌素)的不同浓度稀释液对高粱、小麦、辣椒、番茄、黄瓜5种不同作物进行皿内沙培试验,测定供试作物的出苗率、根长、苗高、鲜重4项指标。结果表明,2种菌素的高浓度稀释液(稀释200倍)均对供试作物幼苗的生长有抑制作用;稀释400倍时,瑞拉菌素药样对小麦安全,吡弗咯菌素对番茄和辣椒安全,对其他供试作物有抑制生长的作用;2种菌素的低浓度(稀释600倍)稀释液则对所有供试作物均安全。
关键词：
微生物 培养液 作物药害
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
孙国锋 张智英 白义春 魏泽辉
【目的】采用睾丸注射慢病毒的方法生产转基因鸡以提高转基因效率，使转基因鸡的批量生产变得简单可行。【方法】用磷酸钙沉淀法包装慢病毒，对慢病毒包装体系中的质粒总量和HN Buffer的pH值进行优化，以包装出滴度较高的慢病毒；然后将慢病毒注射到受精鸡蛋的胚胎中验证其活性；最后，将慢病毒注射到8日龄公鸡的睾丸内，待其性成熟以后，将精液DNA呈阳性的公鸡与非转基因母鸡进行交配生产出转基因鸡。【结果】当90 mm培养皿中质粒总量为50 μg、HN Buffer的pH值为7.05时慢病毒的包装效率最高，在该条件下包装出的慢病毒滴度高达7.5×107 TU/mL；采用慢病毒胚胎注射途径成功地生产出增强绿色荧...
关键词：
转基因鸡 慢病毒 胚胎注射 睾丸注射
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
刘满清 杨其恩 索伦 刘霖 牛晔 朱士恩
本实验对昆明白系小鼠的桑椹胚实施OPS法玻璃化冷冻,研究不同管内解冻程序对胚胎体内外发育的影响,旨在为小家畜胚胎冷冻、解冻和移植提供技术参数。采用OPS冷冻两步法(10%(体积分数)EG+10%(体积分数)DMSO溶液中平衡30 s,移入EDFS30平衡25 s)保存小鼠桑椹胚。一步法解冻是将OPS直接插到盛有0.5mol/L蔗糖的离心管中分别平衡1、2、3、4、5和6 min,解冻后经体外培养结果表明,平衡2~4 min组囊胚发育率(93.58%~97.22%)与对照组(100%)无显著差异(P>0 05);实施两步法解冻时将OPS先后插入0.5和0.25mol/L蔗糖中,体外培养结果显示,...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
赵俊龙 刘钟灵 姚宝安 马丽华
采用改进的微气静相培养技术，研究了培养液容积、深度、更替时间对体外培养牛巴贝斯虫的影响。结果表明：培养液层深度对牛巴贝斯虫的生长繁殖影响明显，理想的液层深度是６．２ｍｍ；在保持单位面积上培养液容量不变的情况下，培养容积大小对培养无影响；隔２４ｈ更换上清液，能使牛巴贝斯虫稳定地生长，延长更换培养液的时间能显著地抑制牛巴贝斯虫的生长繁殖。试验还在此基础上，利用较大容积（１６．０ｍｌ）对１株牛巴贝斯虫进行了长达２７ｄ的体外培养，继代８次，牛巴贝斯虫生长良好。本试验的成功为进一步研究水牛巴贝斯虫病及其免疫提供了有利条件。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
宋天增 冯静 曾宪垠 杨剑波 杨华 张红琳 杨井泉 韩猛立 贾斌 赵宗胜 石国庆
为探讨直接用注射器对睾丸和卵巢打点注射pIRES2-EGFP质粒转染兔的精子细胞和卵母细胞,建立操作方便、效率高、成本低、可批量生产转基因兔的可行性。选择5只成年新西兰雄兔、29只经产新西兰雌兔,每侧睾丸和卵巢内分别打点注射0.5~0.8 mg/mL质粒0.25 mL。①第3周随机取一只雄兔睾丸做冰冻切片,于荧光显微镜下观察转染情况。②(Ⅰ:1#♂×7♀、Ⅱ:2#♂×7♀、Ⅲ:3#♂×7♀、Ⅳ:4#♂×7♀)其它雄兔于第6周和第7周与3日前做过卵巢注射并超排处理的雌兔配种,最后采集新生仔兔耳组织,提取基因组DNA,经PCR和Southern杂交检测阳性率。结果显示雄兔睾丸冰冻切片于荧光显微镜下...
关键词：
打点注射 睾丸注射 卵巢注射 转基因兔
[期刊] 西南农业学报
[作者]
宋天增 冯静 曾宪垠 杨剑波 杨华 韩猛立 杨井泉 黄新 张红琳 陈永耀 贾斌 石国庆
本研究以绿色荧光蛋白为报告基因,转染兔卵母细胞,探索建立操作方便、效率高、成本低、可定量生产转基因兔的可行性方法。选择14只成年新西兰雌兔,每侧卵巢内分别打点注射0.25 mL 0.5~0.8 mg/mL的质粒,注射后第3日、第16日和第31日进行人工辅助配种;卵巢注射后第3日、第16日和31日随机各取1只雌兔卵巢做冰冻切片,置荧光显微镜下观察绿色荧光;应用PCR和Southern杂交检测转基因新生仔兔阳性率。结果经荧光显微镜观察,卵巢注射后第3日配种的雌兔卵巢冰冻切片及48 h以后的胚胎呈现绿色荧光;卵巢注射报告基因后第3日配种的雌兔后代阳性率最高,PCR和Southern杂交检测结果分别为...
关键词：
打点注射 卵巢 转基因兔
[期刊] 实验技术与管理
[作者]
任春艳 于曙光 马圆圆 吴言凌 师进生
利用大学生科技创新项目,设计并制作了扇形微流控芯片。通过Cr3+在碱性条件下催化鲁米诺-过氧化氢的化学发光反应,实现了微流动注射化学发光体系对水中痕量Cr3+含量的检测。实验证明,该方法线性范围宽、精密度良好、灵敏度很高。该实验的开展大大锻炼了学生的科技创新能力。
关键词：
微流动注射 铬离子 创新能力
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
崔忠凯 王倩 刘新富 孟振 陈松林
本研究将100~300 pg含有肌肉特异表达启动子和绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)基因的重组质粒(smyd1:gfp)显微注射到大菱鲆(Scophthalmus maximus)受精卵动物极细胞中,通过细心培育,成功孵化出鱼苗约120尾。统计分析显示,显微注射后,大菱鲆胚胎存活率为4.8%。利用荧光显微镜观察大菱鲆胚胎及仔鱼,只在注射smyd1:gfp质粒的胚胎及仔鱼的肌肉中发现有绿色荧光。通过进一步PCR扩增检测,在注射的大菱鲆胚胎及仔鱼DNA中扩增出了GFP特异片段,大小约为340 bp。研究表明,本研究成功建立了大菱鲆显微注射技术,可为大菱鲆基因功能研究和遗传育种奠定基础。
关键词：
大菱鲆 受精卵 显微注射 GFP
[期刊] 中国水产科学
[作者]
丁浩 田永胜 武鹏飞 刘洋 陈松林
在鱼类胚胎的冷冻保存中,需要抗冻剂有效地渗入胚胎,才能对胚胎起到保护作用。本研究采用显微注射技术将抗冻剂直接注射到牙鲆(Paralichthys olivaceus)胚胎内,以实现牙鲆胚胎的玻璃化低温冷冻保存。研究中,首先对抗冻剂种类进行了选择,将抗冻剂的毒性由大到小依次排列为:乙二醇(EG)、甘油(Gly)、二甲基亚砜(DMSO)、甲醇(MeOH)、1,2丙二醇(PG)、PM21(PG∶MeOH=2∶1);对胚胎发育时期和注射剂量进行了筛选。实验结果显示,注射600pL(1pL=10-6mL)抗冻剂PM21后,牙鲆的心跳期胚胎成活率显著高于尾芽期胚胎(P<0.05),成活率为(64.04±2...
关键词：
牙鲆 胚胎 显微注射 玻璃化 冷冻保存
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
黄旭雄 严佳琦 黄征征 危立坤
研究了培养液中添加不同量柠檬酸铁(0、0.0039、0.039和0.39 mg/L)对单生卵囊藻(Oocystis solitaria)和月牙藻(Selenastrum sp.)细胞组成的影响。结果表明,单生卵囊藻和月牙藻分别在柠檬酸铁添加量为0.039 mg/L和0.39 mg/L时具有最大的蛋白、总糖、叶绿素a和类胡萝卜素含量。单生卵囊藻和月牙藻均在柠檬酸铁添加量为0.39 mg/L时具有最大的总脂肪含量,分别为13.76%和22.78%,比相应未添加铁组分别提高了318%和160%。单生卵囊藻富含18:3n3,月牙藻富含18:2n6。培养液中高的铁离子浓度诱导两种藻细胞合成更多的饱和脂肪...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
张爽 邵琪琪 耿海洋 苏松坤
探讨蜂王浆对尾静脉注射4T1细胞小鼠的抗氧化和免疫力的影响.将4T1细胞或其与蜂王浆的混合物通过尾静脉注射入小鼠体内,ELISA法检测蜂王浆对小鼠血清、肝脏和肾脏中与抗氧化能力相关的指标及血清中和免疫力相关细胞因子水平的影响.结果表明,和模型对照组相比,蜂王浆(50、100 mg·mL(-1))可以显著提高小鼠血清内T-AOC、IFN-α(P<0.05)水平,降低IL-4的水平(P<0.05).可见,蜂王浆可以改善尾静脉注射4T1细胞小鼠的抗氧化能力和免疫力.
关键词：
蜂王浆 4T1细胞 免疫力 抗氧化
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