［目的］本试验旨在研究猪卵母细胞成熟过程中细胞骨架的动态变化以及秋水仙碱对卵母细胞成熟及ＭⅠ期纺锤体的影响。［方法］采用间接免疫荧光结合激光共聚焦显微成像技术，检测微管蛋白（α－ｔｕｂｕｌｉｎ）等细胞骨架蛋白的表达与亚细胞定位，之后采用秋水仙碱处理猪卵母细胞，研究秋水仙碱对卵母细胞成熟及ＭⅠ期纺锤体结构的影响。［结果］猪卵母细胞α－ｔｕｂｕｌｉｎ在生发泡破裂（ＧＶｂＤ）之后开始组装，第一次减数分裂中期（ＭⅠ）形成典型的纺锤体结构，第一次减数分裂后期至末期（ＡｔⅠ）则分布于两组染色体之间，第二次减数分裂中期（ＭⅡ）在染色体附近重新组装形成典型的纺锤体；微丝蛋白（Ｆ－Ａｃｔｉｎ）在ＧＶｂＤ之后富集．．．

［目的］本试验旨在探究ＡｕｒｏｒＡ－Ａ抑制对猪卵母细胞成熟和纺锤体组装的影响及潜在机制。［方法］猪ＧＶ期卵母细胞分组进行体外成熟培养，在各组中分别添加０、１、３和５μｍｏｌ·ｌ～（－１）ＡｕｒｏｒＡ－Ａ特异性抑制剂ｍｌＮ８０５４，观察其对卵母细胞发育与成熟的影响及纺锤体结构的变化；免疫印迹检测磷酸化ＡｕｒｏｒＡ－Ａ和ＴＡＣＣ３的表达。［结果］ＡｕｒｏｒＡ－Ａ抑制导致猪卵母细胞成熟明显受阻（Ｐ＜０．０５），且主要阻滞在Ｐｒｏ－ｍⅠ期及ｍⅠ期；ｍⅠ期纺锤体形态明显异常，出现单极或多极纺锤体，异常率显著上升（Ｐ＜０．０５）。ＡｕｒｏｒＡ－Ａ抑制后，猪卵母细胞磷酸化ＡｕｒｏｒＡ－Ａ和酸性卷曲转化相关蛋．．．

【研究目的】本研究旨在探究Xklp2靶蛋白（targeting protein for Xklp2， TPX2）在猪卵母细胞减数分裂过程中的表达定位及其潜在功能。【方法】采集猪卵丘-卵母细胞复合体（cumulus oocyte complexes， COCs）并随机分组后进行体外成熟培养，通过间接免疫荧光染色与蛋白免疫印迹等方法检测TPX2在卵母细胞减数分裂过程中的亚细胞定位与动态表达情况；通过生发泡期（germinal vesicle， GV）显微注射特异性siRNA探究敲低TPX2对卵母细胞减数分裂进程、纺锤体结构以及早期凋亡的影响。【结果】TPX2在第一次减数分裂中期（metaphase I， MI）表达量显著上升，其亚细胞定位与α微管蛋白（α-tubulin）的分布特点相似，并主要富集在纺锤体两极。TPX2表达被敲低后卵母细胞第一极体（first polar body， PB1）排出率显著下降（P < 0.05），且大多数细胞被阻滞在生发泡破裂期（germinal vesicle breakdown， GVBD）期和第一次减数分裂后末期（anaphase I and telophase I， ATI），同时纺锤体结构异常比例显著升高（P < 0.05），并伴随染色体排列紊乱。与对照组相比，敲低TPX2后卵母细胞早期凋亡率急剧增加（P < 0.05），凋亡相关基因Caspase 3表达量以及Bax/Bcl2比值显著升高（P < 0.05）。【结论】TPX2与猪卵母细胞减数分裂过程中的纺锤体组装及细胞周期调控密切相关，敲低TPX2引起卵母细胞纺锤体结构异常，并诱导早期细胞凋亡，最终导致卵母细胞成熟失败。

通过采集屠宰场废弃猪卵巢,体外分离和培养猪卵母细胞,探讨基础培养基、激素、卵泡直径大小及卵丘细胞层数对猪卵母细胞体外成熟的影响。结果表明:改良TCM199(mTCM199)较NCSU-23培养猪卵母细胞成熟率显著提高(P

　以TCM-199成熟培养猪卵巢表面直径2～3mm,3～5mm和5～8mm卵泡内的卵母细胞,比较了成熟培养液中添加以上各组卵泡液(pFF)对猪卵母细胞体外成熟(IVM)的影响,以成熟培养48h后排出第一极体为成熟标准对猪卵母细胞进行成熟鉴定。结果表明,2～3mm,5～8mm和3～5mm3组卵泡内卵母细胞的体外成熟(IVM)率依次升高,分别为12.7%,31.3%和46.0%,各组间差异显著(P<0.05);添加3～5mm卵泡液的卵母细胞体外成熟率(42.0%)也显著高于5～8mm组(11.0%)和2～3mm组(12.7%)(P<0.05)。试验同时观察记录了不同直径卵泡内卵母细胞的等级,结果发...

卵母细胞是胚胎工程和发育生物学的重要组成部分,它是体外受精、性别控制、克隆及转基因等技术成功与否的前提和关键。影响猪卵母细胞体外成熟的因素很多,本文将从物理因素和化学因素两方面作简要综述。

为了提高牛卵母细胞体外成熟率,以机械裸卵(DOs)、卵丘-卵母细胞复合体(COCs)和添加的离散卵丘细胞的不同组合,对卵丘细胞在卵母细胞体外成熟过程中的影响进行了探索,并对不同卵丘细胞的作用途径和强度进行了分析。试验结果表明:添加离散卵丘细胞能够显著促进DOs的体外成熟(57.98±14.27 vs 35.53±14.00,P0.05);卵母细胞胞外卵丘细胞对与之共培养的DOs的体外成熟促进作用效果不明显(35.83±18.32 vs 35.53±14.00,P>0.05)。分析结果显示:卵...

探讨了促性腺激素(FSH、LH)对猪卵母细胞体外成熟的影响,最终找到了其合理的使用剂量。在成熟液中添加LH浓度分别为1,5,10 IU/mL时,与没有添加FSH与LH的对照组(15.9%)相比,成熟率有显著提高,成熟率分别为49.1%,30.0%,36.3%。LH浓度为1 IU/mL的实验组成熟率最高,显著高于对照组(p

比较从不同卵巢卵泡直径获得的卵母细胞体外成熟能力的差异 ,并研究其冷冻保存效果。结果表明 :在体外成熟培养液中添加 10 % (体积分数 ,下同 )ECS的成熟率 (72 86 % )显著高于添加 10 %NCS (6 2 2 1% ) (P

为研究不同月份对绵羊卵母细胞采卵数及体外成熟的影响,采用切割法获得不同月份绵羊卵母细胞,统计分析可用卵母细胞数和体外培养成熟率。结果表明:随着月份的延续,卵母细胞获得数从5月的(3.53±0.27)(个/d)稳步增加到11月的(5.16±0.15)(个/d),差异极显著(P<0.01)。卵母细胞体外成熟率也显著提高,其中8月份成熟率极显著高于5月、6月、7月(P<0.01);9月、10月、11月卵母细胞成熟率又极显著的高于8月(P<0.01),同时季节和气温对绵羊卵母细胞采卵数和利用也有显著影响(P<0.01)。因此,不同月份采卵显著影响可用绵羊卵母细胞数和卵母细胞体外成熟水平。

【目的】探究亚硒酸钠（sodium selenite,SS）对猪卵母细胞体外成熟及其胚胎发育潜能的影响并对其机制进行初步分析，为猪卵母细胞体外成熟体系的完善提供理论参考。【方法】将猪卵丘卵母细胞复合物（cumulus oocyte complexes,COCs）随机放在不同浓度亚硒酸钠(0、20、40、60、80 nmol·L^-1)的成熟培养液中成熟培养44 h后，分别观察卵丘细胞扩展及卵母细胞第一极体（first polar body,PB1）排出情况，收集卵丘细胞并提取其RNA，同时对卵母细胞进行孤雌激活（parthenogenetic activation,PA）处理并进一步对孤雌胚胎进行体外培养，分别于48、168 h统计卵裂率及囊胚率。利用实时荧光定量PCR及观察法对卵丘细胞扩展指数（CEI）、卵丘扩展相关基因（Has2、Ptgs2）表达、卵母细胞第一极体（PB1）排出率和孤雌胚胎的卵裂率及囊胚率进行检测，以探究不同浓度亚硒酸钠对卵母细胞成熟、早期胚胎发育及卵丘细胞扩展的影响，并据此确定亚硒酸钠的最适添加浓度；通过光吸收法及RT-q PCR检测COCs的总抗氧化能力、卵母细胞中谷胱甘肽（GSH）含量和丙二醛（MDA）水平及抗氧化基因（CAT、PRDX2）表达，探讨体外成熟液中添加亚硒酸钠对卵母细胞抗氧化能力的影响；结合免疫荧光技术对囊胚内细胞总数和囊胚多能性基因（Nanog,Sox2）表达进行检测，探究亚硒酸钠对孤雌胚胎发育潜能的影响。【结果】QRT-PCR结果显示不同浓度亚硒酸钠添加均可显著促进PTGS2基因的表达（P<0.05），且40 nmol·L^-1浓度下HAS2基因的表达、CEI、卵母细胞PB1、早期胚胎的囊胚率都得到显著促进（P<0.05）;40、60、80、nmol·L^-1浓度下亚硒酸钠添加都可促进卵母细胞的卵裂，但40 nmol·L^-1浓度下卵裂促进效果显著（P<0.05），据此确定猪卵母细胞体外成熟液中亚硒酸钠添加浓度为40 nmol·L^-1；由抗氧化能力检测结果显示亚硒酸钠可显著提高COCs的总抗氧化能力、卵母细胞的GSH水平、抗氧化基因CAT、PRDX2的表达、显著降低MDA含量（P<0.05）；免疫荧光及PCR结果显示，亚硒酸钠组中囊胚的内细胞团数量升高、Nanog表达升高（P<0.05）。【结论】猪卵母细胞体外成熟液中添加适宜浓度的亚硒酸钠可促进卵丘细胞扩展，提高卵母细胞的成熟率，改善卵母细胞成熟后的发育潜能。亚硒酸钠对卵母细胞体外成熟的这一有利影响可能与其抗氧化作用有关。

以TCM199为基础培养基,HMG(尿促性素)为激素,探讨了HMG在猪卵母细胞体外成熟(IVM)和发育中的影响;同时对EGF(表皮生长因子)和TGF-α(转化生长因子-α)单独或联合使用对猪卵母细胞IVM及发育的影响进行了研究,以确立猪卵母细胞IVM较好的培养体系。结果表明:①在猪卵母细胞IVM中分别添加0.075、0.15、0.2、0.3 IU/mL的HMG,其中添加0.2 IU/mL的HMG组卵母细胞的成熟率和激活后的卵裂率显著高于其它组,差异显著(P<0.05);③添加...

探索了离子霉素结合细胞松驰素B(cytochalasinB,CB)、放线菌酮(cycloheximide,CHX)以及6-二甲基嘌呤(6-dimethylaminopurine,6-DMAP)等化学物质,对猪卵母细胞激活后发育的影响。试验1,体外成熟卵母细胞分别用15、20、25、30μmol·L-1的离子霉素处理40min或电激活(1.3kV·cm-1,80μs,1次脉冲),结果表明,20μmol·L-1组的激活率(69.93±5.80)%显著高于15μmol·L-1组(P0.05)。试验2,卵母细胞采用20μmol·L-1离子霉素分别激活10、20...

用海星鞘神经提取液和二硫苏糖醇对刺参卵母细胞进行了体外人工促熟研究。结果显示,二硫苏糖醇对刺参卵母细胞具有明显的促熟作用。刺参卵母细胞包被在滤泡中发育,卵母细胞通过动物极的卵突起连接到单层细胞构成滤泡膜上,充分发育的卵母细胞处于生发泡期,染色质凝集在核仁周围,处于生发泡期的卵母细胞在海水中不会自发成熟。用二硫苏糖醇处理充分发育的卵母细胞20min,卵母细胞的生发泡开始移动,并锚定在卵母细胞的动物极,继而出现生发泡破裂。此后,减数分裂重新启动,第一、二极体分别排出。但海星鞘神经提取液对刺参卵母细胞没有促熟作用。实验表明,二硫苏糖醇浓度在10-5～10-1mol/L范围内,均可促使刺参卵母细胞发生...

利用不同浓度(0,0.8,1.6,2.4μg/mL)的氯化镉(CdCl2)对处理牛卵母细胞前后对其成熟率、凋亡率、Ca2+分布、线粒体膜电位、Bcl-2与Bax的基因表达的影响,初步为重金属对雌性哺乳动物生殖细胞发育及细胞凋亡机制的进一步研究打下基础。利用0,0.8,1.6,2.4μg/mL的氯化镉(CdCl2)处理牛卵母细胞22 h,统计其凋亡率及死亡率;利用Annexin V-FITC检测牛卵母细胞的早期凋亡;分别用Fluo-3/AM和Rh123检测卵母细胞的Ca2+分布及其线粒体膜电位的变化;利用RT-PCR检测促凋亡基因Bcl-2和抑凋亡基因Bax的相对表达。经过上述处理后,0.8μg...