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[期刊] 水产学报
[作者]
王敏 吴萍 叶元土 石桃丹 魏育红
C型凝集素是一类Ca2+依赖活性的糖蛋白,在虾蟹类的免疫防御中发挥着重要作用。采用RT-PCR及RACE技术首次克隆了秀丽白虾C型凝集素家族4个基因(EmCTL-1、EmCTL-2、EmCTL-3、EmCTL-4)的cDNA全长。这4个C型凝集素基因的cDNA全长分别为1 390、1119、1 364和1 299 bp,分别含996、969、1 026和1 044 bp的开放阅读框,各编码332、322、341和347个氨基酸的蛋白。其氨基酸序列与罗氏沼虾相应的C型凝集素的相似性分别为40%、37%、69%和73%,与其他海水虾类的相似性在30%~41%之间。阳性选择模型分析显示虾类的C型凝集...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
沈淑芳 朱玲 李加琦 薛素燕 李阳 陈琼琳 毛玉泽 庄志猛 方建光
通过cDNA末端快速扩增(Rapid amplification of c DNA ends,RACE)技术克隆得到魁蚶(Scapharca broughtonii)C型凝集素(C-type lectin,Sb-Lec1)基因,该基因全长为700 bp,其中,5′-UTR为29 bp,3′-UTR为167 bp,开放阅读框长度为504 bp,编码167个氨基酸,包括长度为23个氨基酸的信号肽序列、129个氨基酸的糖识别结构域(CRD)以及参与二硫键形成的6个半胱氨酸。预测蛋白分子量为19.11 k Da,
[期刊] 华北农学报
[作者]
李明想 柏素花 张玉刚 祝军 戴洪义
以苹果幼叶为试验材料,通过同源克隆和RT-PCR方法分离出B_LECTIN基因家族中的一个基因,命名为MdMBL。分析结果表明,克隆得到的MdMBL长度为1 181 bp,包括20 bp的5'非编码区、81 bp的3'非编码区和一个长度为1 080 bp编码359个氨基酸的开放阅读框,推测该蛋白质分子量为39.76 kDa,其等电点为8.72。在构建的MBL系统进化树中,MdMBL与葡萄的MBL的关系最近,其次为橹豆的MBL,与苹果的MBL2同源基因进化关系最远。相对荧光定量RT-PCR分析表明,MdMBL具有组织特异性,在茎中表达量最高,在花中表达量最低;低温胁迫促使MdMBL表达量升高,M...
[期刊] 水产学报
[作者]
徐晓荣 施鹏 徐继林 廖凯 冉照收 严小军
本研究利用cDNA末端快速扩增（RACE）技术获得了缢蛏半乳糖凝集素基因（ScGL）。ScGL全长为1 282 bp，5′非编码区35 bp，3′非编码区329 bp，开放阅读框918 bp，编码305个氨基酸。氨基酸序列分析显示ScGL无跨膜结构域；与已报道的缢蛏半乳糖凝集素含1个糖识别结构域（CRD）不同，ScGL具有2个CRD。相似性分析显示，ScGL与其他软体动物的半乳糖凝集素具有较高的相似性，与菲律宾蛤仔相似性最高，达65%；与已报道的2个缢蛏半乳糖凝集素相似性分别为39.74%和44.76%。系统进化上ScGL与菲律宾蛤仔半乳糖凝集素聚为一支。重组表达发现ScGL在包涵体表达，分子量约34.4 ku。荧光定量PCR分析显示，ScGL在缢蛏鳃、肠、唇瓣、外套膜、出水管、入水管、足和内脏团中均表达；其中肠、内脏团、唇瓣和足中表达量较高，出水管和入水管中表达量最低。消化腺ScGL表达量分别在金黄色葡萄球菌感染后3和48 h显著高于对照组；鳃ScGL表达量分别在鳗弧菌和金黄色葡萄球菌感染后6和48 h显著高于对照组，说明ScGL参与了病原诱导的缢蛏免疫应答。本研究为深入探索ScGL在缢蛏免疫中的作用奠定基础。
[期刊] 水产学报
[作者]
孙盛明 傅洪拓 宣富君 戈贤平 朱健 吴旭干
C型凝集素(C-type lectin)是一类能与糖类结合的非抗体的蛋白质或糖蛋白家族,为了研究C型凝集素基因在日本沼虾组织分布、细胞定位和细菌感染过程中的表达情况,本研究应用cDNA末端快速克隆(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)技术首次克隆了日本沼虾C型凝集素结构域家族3基因(MnLec3)的全长序列,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析MnLec3基因在不同组织、细菌感染后不同时间的表达水平,Western blot和免疫荧光分别分析蛋白的表达水平和细胞定位。结果显示,MnLec3基因cDNA全长1 357 bp,包括125 bp的5′末端非翻译区(UTR)、1 026 bp的开放阅读框(ORF)和206 bp的3′UTR,其中开放阅读框编码341个氨基酸。氨基酸序列比对显示,日本沼虾MnLec3基因含有保守钙结合点(Met 1-Glu17)和糖识别结构域(CRD)。同源性分析结果显示,MnLec3与罗氏沼虾C型凝集素3相似度较高;邻接法(Neighbor-Joining,NJ)进化树分析结果显示,MnLec3与其他甲壳动物C型凝集素聚为一支。通过构建原核表达载体获得体外重组蛋白rMnLec3,并将纯化重组蛋白免疫大鼠获得抗血清,免疫荧光结果显示,绿色荧光信号主要在肝胰腺细胞核中表达。qRT-PCR结果显示,MnLec3在日本沼虾所检测组织中均表达,其中肝胰腺中表达量最高,血细胞次之;与对照组相比,在嗜水气单胞菌刺激12～48 h时MnLec3表达量显著升高,48 h表达量最高,Western blot分析结果显示,MnLec3蛋白表达丰度与基因表达模式基本相似,提示克隆得到的MnLec3参与日本沼虾抵御细菌入侵的免疫过程。
[期刊] 水产学报
[作者]
刘逸尘 刘丽静 张亦陈 耿绪云 孙妍 孙金生
研究拟通过分析对虾C型凝集素的活性特点,探讨其在对虾先天免疫应答过程中的潜在功能以及在养殖生产实践中的应用。实验利用原核表达系统对中国明对虾C-型凝集素基因的两个串联的糖识别结构域(carbohydrate recognition domain,CRD)进行了重组表达,并通过纯化复性获得了重组目的蛋白(rFclectin-CRD1和rFclectin-CRD2)。活性分析结果显示,重组目的蛋白对多种病原菌有凝集和抑制生长的作用,并且具有Ca2+依赖活性;其凝集活性可被半乳糖、肽聚糖、脂多糖等多种病原相关分子模式所抑制,研究结果证实,Fclectin是一种典型的C-型凝集素,它可能作为中国明对虾...
[期刊] 华北农学报
[作者]
王洪乐 齐连芬 杨超沙 吴志明 李亚栋
为了获得新的掌叶半夏凝集素家族基因,以掌叶半夏叶片为材料,根据GenBank中已报道的天南星科凝集素基因序列设计引物,PCR法扩增获得3个掌叶半夏凝集素基因,分别暂命名为PPA15、PPA324、PPA533。其中,PPA15的全长为729 bp,编码243个氨基酸;PPA324的全长为774 bp,编码258个氨基酸;PPA533的全长为777 bp,编码259个氨基酸。利用分析软件和网站等工具对克隆的3个基因进行生物信息学分析,结果显示,PPAs与GenBank中收录的天南星科半夏基因具有较高同源性,
关键词：
掌叶半夏 凝集素 载体构建 原核表达
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
王倩 张雪 陈亚东 沙珍霞
甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶1 (Mannan-binding lectin associated serine protease 1,MASP1)是补体凝集素途径中起重要作用的激活蛋白。本研究以半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)为研究对象,应用RACE技术和实时荧光定量qRT-PCR技术对半滑舌鳎MASP1基因(Cynoglossus semilaevis MASP1, CsMASP1)进行了克隆和表达模式分析。结果显示,CsMASP1基因c DNA序列全长为2507 bp,5′非编码区长82 bp,3′非编码区长142 bp,开放阅读框长2283 bp,共编码760个氨基酸;CsMASP1基因包含13个外显子和12个内含子,与多数已知鱼类的MASP1基因结构一致;SMART分析显示,CsMASP1包含6个结构域,与哺乳动物、鸟类、其他鱼类的结构域一致;同源比对发现,CsMASP1和鱼类的相似度较高,与金目鲈(Latescalcarifer)的相似性最高,为76%。CsMASP1基因在11种健康组织(血液、脑、鳃、性腺、心脏、头肾、肠、肝、皮肤、脾和后肾)中均有表达,其中,在肝、脾和头肾中表达量较高;鳗弧菌(Vibro anguillarum)感染后,CsMASP1基因在6种免疫组织(血液、鳃、头肾、肠、肝和脾)中呈现不同的表达模式,在6种免疫组织中呈现明显的上调表达,肝的表达峰值出现在感染后24 h;脾和鳃的表达峰值出现在感染后6 h;肠、头肾和血液的表达峰值均出现在感染后12h;随着病原菌感染时间增加,基因表达量逐渐降低并恢复至正常水平。研究表明,CsMASP1基因参与了半滑舌鳎的免疫应答过程,本结果为半滑舌鳎的免疫机理研究奠定了基础。
[期刊] 水产学报
[作者]
于金红 潘鲁青 张辉
为研究凡纳滨对虾C-型凝集素的免疫功能,实验利用原核表达系统对凡纳滨对虾C-型凝集素基因的开放阅读框进行了重组表达,并通过纯化分离获得重组目的蛋白,采用血细胞悬浮培养的方法,研究了重组C-型凝集素对凡纳滨对虾血细胞免疫作用的影响。实验梯度设置为对照组和重组C-型凝集素蛋白(1.0 mg/mL),分别在0、3、6、9、12、24 h取培养的血细胞和培养液进行免疫相关指标的测定。结果表明,重组C-型凝集素经SDS-PAGE分析显示在39 ku处有显著诱导条带,与预测的分子量大小基本一致,Western-blotting分析可以与anti-His抗体特异性结合,从而证明C-型凝集素重组蛋白在大肠杆菌...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
刘晓飞 张爽爽 Endri Hendriansyah 李英瑞 苏琳 李相前 修云吉 顾伟
半乳糖凝集素6 (Galectin-6)是β-半乳糖苷结合凝集素家族的成员之一，本研究首次分离并鉴定了牙鲆(Paralichthys olivaceus) Galectin-6 (PoGalectin-6)，分析了其分子特征和表达模式，并对其免疫相关功能进行了研究。PoGalectin-6基因的开放阅读框长为1089 bp，共编码362个氨基酸，其中包含2个糖识别结构域(CRDs)。同源序列比对和系统进化树分析显示，PoGalectin-6与大菱鲆(Scophthalmus maximus) Galectin-4的相似性为80.9%。组织分布结果显示，PoGalectin-6基因主要在肠组织中特异性表达。迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)感染后，PoGalectin-6基因在肠组织中的表达显著升高，感染后12 h表达量最高，随后逐渐降低并恢复至正常水平。细菌结合实验证实，PoGalectin-6重组蛋白(rPoGalectin-6)能够结合枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)、杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)、迟缓爱德华氏菌和创伤弧菌(Vibrio vulnificus)，但并不结合短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)。此外，rPoGalectin-6以钙离子依赖的方式对短小芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、杀鲑气单胞菌和迟缓爱德华氏菌表现出明显的凝集作用。研究表明，PoGalectin-6基因参与了由迟缓爱德华氏菌感染引起的免疫应答，这一发现为探索Galectin-6在硬骨鱼类中的免疫功能奠定了基础。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
黄镇太 杨金玲 程克棣 朱平
凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)是氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)的主要受体,它与动脉粥样硬化过程密切相关。通过RT-PCR从THP-1细胞系获得LOX-1 cDNA并被克隆到载体pPIC9K的a信号肽的下游。线性化的重组质粒转化Pichia pastoris GS115。阳性转化子经过BMMC液体培养基培养,上清液经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,出现1条在受体菌对照中不曾有的大小约43 kDa的蛋白带。重组蛋白的功能研究在进行中。
[期刊] 华北农学报
[作者]
杨在君 刘玲玲 彭正松
为克隆盾叶半夏凝集素基因，并对其功能进行分析。采用ＲＡＣＥ技术从盾叶半夏中克隆得到盾叶半夏凝集素基因的全长ＣＤＮＡ序列，命名为ｐｐｌ。同时，构建了ｐｐｌ基因的原核表达载体，并成功实现了３３ ｋ ＤＡ重组蛋白在Ｅ．Ｃｏｌｉ Ｂｌ２１中的表达。纯化后的重组蛋白ｐｐｌ用于凝血和体外抗癌试验。该基因的全长ＣＤＮＡ序列为１ ５０４ Ｂｐ，其中开放性阅读框（ｏＲＦ）８１３ Ｂｐ，编码２７０个氨基酸，具有３个甘露糖结合识别位点。ｐｐｌ具有凝血活性，这种凝血活性可受甘露糖抑制。ｐｐｌ对人鼻咽癌细胞（ＣＮＥ）、人宫颈癌细胞（ＨＥｌＡ）及人乳腺癌细胞（ＢＣＡｐ－３７）的生长均具有抑制作用，其中对ＨＥｌＡ细胞的抑制．．．
关键词：
盾叶半夏 凝集素 基因克隆 功能分析
[期刊] 华北农学报
[作者]
赵欢
为了克隆掌叶半夏凝集素基因(Pinellia pedatisecta agglutinin,PPA),并对其进行生物信息学分析和亚细胞定位。采用PCR技术扩增掌叶半夏凝集素基因的ORF序列,构建pCAMBIA1300-35S-PPA-e GFP重组载体,导入农杆菌GV3101并在烟草中进行瞬时表达,采用激光扫描共聚焦显微镜观察其亚细胞定位。克隆获得的PPA基因全长由777个核苷酸组成,编码258个氨基酸,含有3个甘露糖结合位点和2个保守的B-lectin结构域,Gen Bank登录号为KF154981,氨
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
高焕 赖晓芳 王伟继 孟宪红 孔杰
本研究探讨了7种细胞凝集素基因在中国对虾中应答白斑综合征病毒(WSSV)感染上的生物学功能差异。结果显示,LT1(DQ167572.1)、LT2(EU834289.1)、LT3(EU834292.1)和LT5(EU834290.1)是肝胰腺组织特异、受WSSV感染诱导表达的基因,其他3种基因主要在肌肉、肠和腮中表达,与WSSV感染诱导无明显相关;在应答WSSV感染不同时间段的表达特征上,7种凝集素基因各不相同;在各组织中的表达量上,方差分析表明7种凝集素基因除在肝胰腺中的表达上存在显著差异外,其他组织中不存在显著差异。这些结果显示这7个凝集素基因在应答WSSV侵染的表达特征上存在较大差异,推测...
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