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[期刊] 华北农学报
[作者]
刘爵 张杰 刘有昌 张方亮 周蛟
进行了 禽脑脊 髓炎病 毒 Ｌ２ Ｚ 株在 Ｂ Ｇ Ｍ７０ 传 代 细胞 系上 培 养特 性的 研 究。该 毒 株 在细胞上盲 传３ 代后 能产生明 显的细 胞病变，并 且传代 过程中 细胞 病变 稳定 地出 现。利 用琼 脂扩 散试验、免疫 荧光试 验、免疫酶 试验及 负染电镜 观察 研究 表 明， Ｌ２ Ｚ 株 接种 Ｂ Ｇ Ｍ７０ 细 胞具 有良 好 的增殖特性 ，并且病 毒是在细 胞浆中 进行复制 。该研究 报道禽 脑脊髓 炎病 毒能 成功 地在 传代 细胞 系上培养增 殖。
[期刊] 华北农学报
[作者]
马强 张二芹 张同旭
以提取的禽脑脊髓炎病毒总RNA为模板,以P1和P2为引物,反转录为cDNA,再以cDNA为模板进行PCR扩增。将扩增产物克隆pMD18-T载体中,获得重组质粒pMD18-T-VP1,PstⅠ/BamHⅠ双酶切及PCR确认正确后,利用pMD18-T-VP1重组质粒为模板,以P3和P4为引物,经PCR扩增获得了大小约810bp的产物。VP1基因和pBI121植物表达载体用SmaⅠ和SacⅠ双酶切,经纯化后连接,再转化到EHA105农杆菌中,酶切和测序鉴定结果表明,成功地构建了重组质粒pBI121-VP1,为进一步利用转基因植物生产VP1蛋白奠定了基础。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
杨建民 秦卓明 赵继勋 苏敬良
本研究在已制备的 AEV单抗基础上建立了检测 AEV抗原的直接 Dot- ELISA方法。该方法对 AEV最低检出量为 8.0 3μg.m L-1。人工感染 1日龄 SPF鸡 ,取临床发病鸡 (6～ 1 3日龄 )相应病料 ,各病料样本病原阳性检出率分别为 :脑 98% ,胰 94% ,十二指肠 80 % ,腺胃 85%。对 1 0 0份临床自然发病鸡病料检测 ,阳性检出率为 90 %。对 1 0份 AEV病原分离阳性样品检测阳性率为 1 0 0 %。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
赵立红 乔健 田勇 朱立龙 陈巨清
为探讨肉种鸡免疫禽脑脊髓炎 (AE)弱毒疫苗的抗体变化规律及其与后裔雏鸡对禽脑脊髓炎病毒 (AEV)易感性的相互关系 ,本研究用琼脂扩散试验对 14周龄免疫禽脑脊髓炎 (AE)弱毒疫苗的 5群艾维茵父母代肉种鸡 ,其中 1群于 34周龄加免AE油乳剂灭活苗 ,从 2 0至 6 0周龄对其AE抗体进行动态监测。结果发现 :1)单免弱毒疫苗的 4群种鸡 ,其AE抗体阳性率呈双低谷曲线变化规律 ,32周龄之前较高 ,为 95 %～ 83.4 % ;36～ 4 0周龄降至 6 7.5 %～ 71.1% ,最低可至 5 6 .7% ;4 4周龄转而升至 80 %以上 ,4 8～ 5 2周龄再度降至 5 ...
关键词：
肉种鸡 禽脑脊髓炎 弱毒疫苗 抗体
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
赵立红 陈德威 李军 秦秀慧
用禽脑脊髓炎病毒 (AEV) Van Rockel毒株接种 6日龄 SPF鸡胚 ,感染 11d后 ,分别收集鸡胚、绒毛尿囊膜及尿囊液 ,鸡胚剔除羽毛、眼球、爪和喙后与绒毛尿囊膜一起 ,制成匀浆 ,反复冻融 3次。通过 2次氟碳 (三氯三氟乙烷 )从全胚匀浆中萃取制备 AE琼扩抗原 (AGP- Ag)。用进口标准 AE AGP试剂进行标化 ,结果发现 :制备的 AE AGP- Ag与标准阳性血清之间有清晰、致密的沉淀线 ,并与标准 AE AGP- Ag的沉淀线完全吻合 ,表明两者的沉淀反应一致 ,从而建立了 AE AGP- Ag制备新方法——“全胚双氟碳法”。其制备 AEAGP- Ag有如下特点...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
焦铁军 李河林 张浩 李健强
检测了4批自制禽脑脊髓炎冻干活疫苗的安全性和最小免疫剂量,并对疫苗进行了病毒含量测定和攻毒保护试验。结果表明,鸡接种疫苗后精神、食欲及发育均正常,疫苗安全性良好;接种病毒剂量为500 E ID50时,可使免疫鸡产生可靠的免疫力,抵抗AEV VR株强毒的攻击,降低鸡群发病率,所以该疫苗的最小免疫剂量≤500 E ID50/羽。4批疫苗病毒含量均大于103.5E ID50/羽份,攻毒后保护率均在87.5%以上。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
周斌 郑其升 刘华雷 曹瑞兵 陈溥言
为进一步研究的生物学特性,应用鸡胚成纤维细胞(CEF)和鸡胚肾细胞(CEK)培养禽腺病毒江苏分离株,进行培养特性、血凝特性、理化特性、超薄切片观察和PCR检测。实验结果表明,CEF感染病毒后没有出现病变。CEK感染病毒后则表现出很强的聚集性并形成细胞团,有的成束状,最后脱落;ReedMuench方法测得其TCID50为每0.1mL10-5.4。CEK核内存在大量70～80nm、呈典型的晶格状排列的腺病毒颗粒。
关键词：
禽腺病毒 细胞培养 细胞病变 PCR
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
彭克美 刘华珍 何文波 冯悦平 唐文花
在脊髓的颈中部、颈膨大部和腰膨大部单侧引入辣根过氧化物酶 (HRP) ,逆行追踪了北京鸭、麻鸭、鸽子和鹌鹑 ,对红核脊髓束的起始部位、细胞构筑和机能进行了系统的研究。发现大量标记细胞分布在中脑对侧的红核 ,极少量标记细胞分布在同侧的红核。此外 ,双侧的Cajal中介核、中央灰质和动眼神经副交感核 (即EW核 )内 ,中脑中缝核和双侧的中脑外侧网状结构 ,也出现了一些标记细胞。研究结果表明 :禽类红核脊髓束的起始神经元分为大、中、小 3种类型 ,绝大部分纤维投射到对侧脊髓。在 4种动物、3种部位引入HRP后差异不显著 ;免疫组化试验结果表明 ,禽类红核脊髓束的起始神经元是 5 -羟色胺 (5 -...
[期刊] 华北农学报
[作者]
姜北宇 刘月焕 郑世兰 景小冬 姚颖 白丽萍
用NDV La Sota株、IBV M41株、EDS76 V HSH23株、AEV Van Roekel株为种毒,分别接种鸡胚或鸭胚,制备各种病毒抗原液,经福尔马林灭活后,采用FILTRON盒式超滤系统对制苗病毒抗原液进行浓缩,然后按一定比例混合,以司本80及吐温80为乳化剂,10号白油为佐剂,制成ND-IB-EDS76-AE四联灭活疫苗。对四联苗各项技术指标进行了测定,证明本疫苗安全、无任何副作用;免疫10-14 d后产生免疫力;ND部分效检,攻毒100％保护,每羽份含ND效价达50-123 PD50;IB部分效检,免疫21-28 d后攻毒保护率达80％-100％,IB HI效价≥1:64;...
关键词：
鸡 四联疫苗 免疫 浓缩
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
魏燕鸣 龚文孝 杨影 马季 邹忠 金梅林
为建立禽腺病毒4型的禽源细胞感染模型,并考察细胞培养毒株对动物的致病性,将实验室2014-2017年间分离的5株血清4型禽腺病毒接种鸡肝癌细胞(leghorn male hepatocellular cells,LMH)并盲传,选取各病毒的LMH细胞培养物,按一定剂量经腿部肌肉注射接种4周龄SPF鸡;记录试验动物的发病情况,剖检采集发病或死亡鸡的脏器并制作病理切片,观察并分析病毒细胞培养物感染SPF鸡的组织病理变化。结果发现:5株血清4型禽腺病毒在LMH细胞上盲传至第4代时开始出现I群禽腺病毒所致的特异性细胞病变,提取培养物中病毒核酸并进行PCR鉴定,均能扩增出大小约564bp的特异性扩增片段,表明病毒能在LMH细胞上稳定增殖。选取各病毒第10代细胞培养物进行SPF鸡回归试验,发现细胞培养上清接种4周龄SPF鸡后第3天开始,有部分鸡开始精神沉郁,食欲消退、卧地不起瘫痪并迅速死亡,病理剖检及病理组织切片结果显示HB-1、HB-2、HB-3和SD-1毒株保持对4周龄SPF鸡的致病性,病死鸡中能观察到典型的组织病理学变化,而对照组不出现任何临床症状及病理变化。以上结果表明,LMH细胞可用于禽腺病毒增殖传代,是开展禽腺病毒分子致病机制研究的理想细胞模型。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
曾令兵 陈艳红 胡春生
采用微量细胞培养系统测定草鱼出血病病毒854株在草鱼肾脏组织细胞系(CIK)上的繁殖动态。病毒在感染后12小时滴度开始上升,24～72小时呈对数上升,84小时病毒滴度达到最高点,以后渐趋平稳。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
孙裴 张彦明 张浩 高春生 张为民 王晶钰 郭抗抗 党如意
【目的】探索鸡气管上皮细胞(chicken trachea epithelium,CTE)分离培养技术,并研究传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)在CTE中培养特性。【方法】利用气管灌注冷消化法分离培养CTE,对CTE特异性8/18角蛋白作免疫组化鉴定上皮细胞。培养的CTE分别接种IBVM41株和T株,分别在接种后第12～96小时观察接毒细胞形态学变化,应用电镜技术观察CTE细胞病变和病毒粒子结构,利用RT-PCR技术检测CTE中病毒核酸并对CTE中IBV的血凝性和鸡胚致病性进行检测。【结果】利用灌注冷消化法可以获得形态完整并带有纤毛的CTE,细...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
魏中锋 张彦明 孙裴 张永国 洪海霞 倪斌 郭抗抗
根据已发表的猪瘟病毒基因组序列,设计合成了2对引物,以脾毒和细胞毒总RNA为模板,利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、套式聚合酶链式反应(nPCR)及测序技术,对多次动物传代和致细胞病变的猪瘟病毒主要囊膜糖蛋白E2基因的核苷酸序列进行了测定,用DNAstar软件比较分析了E2基因的核苷酸和氨基酸序列的同源性。结果发现,脾毒和标准石门株核苷酸序列的同源性为99.4%,氨基酸序列的同源性为99.0%;细胞毒与标准石门株核苷酸序列的同源性为98.3%,氨基酸序列的同源性为96.7%。由此说明,猪瘟病毒经猪体多次传代和组织培养致细胞病变后,均能保持遗传的稳定性。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
曾令兵 高梦雪 蒋勇华
本文对草鱼细胞和病毒的两种大规模培养方式进行了研究和比较。静置培养条件下，细胞生长速度快，２—３天内可形成单层，单层均匀而稳定；旋转培养条件下，细胞７天左右长成单层，细胞单层面积大，病毒培养产量高。这两种培养方式所观察到的细胞病变过程及表征基本相同，病毒的ＴＣＩＤ５０／ｍｌ值稳定在６．０左右。采用这两种培养方式，可实现草鱼细胞和病毒的大规模培养。
关键词：
草鱼,细胞,病毒,大规模培养
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