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[期刊] 华北农学报
[作者]
姜北宇 刘月焕 景小冬 黄凤军 校海霞 章振华
采用FILTRON中型盒式超滤系统,分别选用截留分子量为30,50,100及300 K 4种不同孔径的超滤膜,对NDV,AIV,EDS76V,IBV及IBDV共5种病毒抗原液进行了浓缩试验研究。结果显示,这4种孔径的超滤膜均可用于上述5种病毒液的浓缩,其病毒的截留率可达99.9%~100%;采用各种病毒浓缩液、未浓缩病毒液及超滤液制成各种相应浓缩苗、未浓缩苗及超滤液乳剂免疫试验鸡。试验证明,浓缩苗明显优于未浓缩苗,在病毒浓缩过程中均未出现有效抗原成分的丢失,其抗原性也未发生变化。
关键词：
病毒浓缩 疫苗 免疫 鸡
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
周斌 刘华雷 曹瑞兵 陈溥言
在用非免疫鸡胚增殖鸭病毒性肝炎病毒 (E5 2株 )过程中 ,发现种毒受到污染。采用聚乙二醇沉淀 SephadexG10 0柱层析法纯化污染病毒 ,在电镜下发现一大小为 70～ 80nm ,无囊膜 ,2 0面体对称的病毒颗粒。挑选 4条随机引物对其进行反转录PCR扩增 ,共扩增出 3条基因片段。序列分析结果表明 ,与禽腺病毒 (鸡胚致死孤儿病毒 )基因组部分序列同源性分别高达 99 5 %、 99 6 %和 99 5 % ,从而证明禽腺病毒污染了鸭病毒性肝炎病毒鸡胚尿囊液种毒
关键词：
禽腺病毒 分离 纯化 PCR 鉴定
[期刊] 华北农学报
[作者]
郑世兰 姜北宇 刘福致 张淑平 景小冬 李林 姚颖
采用ＵＦ１型工业平板式超滤机对鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）及法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）进行了初步的浓缩试验。该设备浓缩工艺简单、效率高，浓缩液ＨＡ效价与未浓缩液比较按浓缩比率相应上升。用浓缩液与未浓缩液制成灭活疫苗免疫鸡，均可获得１００％抵抗ＮＤ及ＩＢＤ的保护力，以浓缩苗免疫的ＮＤＨＩ抗体及ＩＢＤ中和抗体滴度明显高于未浓缩苗。试验表明，浓缩苗安全有效，并优于未浓缩苗。
关键词：
鸡新城疫病毒,法氏囊病毒,浓缩,灭活疫苗
[期刊] 世界农业
[作者]
袁东波 汤德元 曾智勇 汪忠荣
猪瘟是危害养猪业最大的烈性传染病之一,被国际兽疫局(OIE)列为A类法定动物传染病。国家对猪瘟的预防和控制一直都十分重视,尽管中国很早就研制成功了猪瘟兔化弱毒疫苗,并在预防猪瘟的发生中起到了积极作用,但由于近年来猪瘟的流行和发病特点发生了很大的变化,其流行形式从频发的大流行转变为周期性、波浪形的地区性散发性流行,出现了所谓非典型猪瘟、温和型猪瘟和无名高热综合征等,给养猪业造成了严重的经济损失。本文主要介绍了猪瘟病毒基因组结构与功能、病毒基因编码的蛋白产物以及猪瘟病毒新型疫苗的研究进展,为猪瘟的防控提供新的思路。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
胡思顺 郑兴华 蔡开妹 彭伏虎 张文泽 李自力 肖运才 刘梅 毕丁仁
【目的】结合胶体金免疫层析技术建立一种适合养鸡业基层生产人员使用的便捷的快速诊断禽流感病毒感染鸡群的方法。【方法】将含禽流感病毒非结构基因ns1的表达载体KG-NS1转化入BL21(DE3)感受态细胞,筛选阳性克隆进行诱导表达,表达产物用GST亲和层析柱进行纯化和Western-blot分析;以NS1重组蛋白为诊断抗原,抗鸡IgFc的单抗标记的胶体金为示踪物,结合免疫层析技术,组装禽流感病毒NS1抗体的免疫胶体金鉴别诊断试纸条,评价其灵敏度和特异性,并对试验感染和临床采集的血样进行检测。【结果】NS1重组蛋白分子量约为52kD,具有免疫学活性。在25min内用肉眼观察到禽流感病毒感染鸡血清和N...
关键词：
禽流感 NS1蛋白 胶体金试纸条
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
徐为中 薛家宾 诸玉梅 陈兴祥 周永银 杨龙圣 尹秀凤
采用超纳滤技术浓缩家兔产气荚膜梭菌(A)型疫苗,建立家兔产气荚膜梭菌(A)型疫苗浓缩工艺。配制家兔产气荚膜梭菌(A)型超纳滤浓缩疫苗,并对其无菌性、安全性和免疫效力进行了检验。结果显示,该工艺可将家兔产气荚膜梭菌(A)型灭活抗原浓缩约7倍,超纳滤膜用NaOH洗后其通量可以恢复;配制的家兔产气荚膜梭菌(A)型超纳滤浓缩疫苗无菌检验合格,安全检验家兔无不良反应,符合动物用生物制品要求;以2 mL/只的剂量免疫家兔,家兔产气荚膜梭菌(A)型超纳滤浓缩疫苗的保护率达100%,传统铝胶疫苗对照组的保护率平均为86.7%,表明超纳滤浓缩疫苗免疫效力优于传统铝胶疫苗。确定了家兔产气荚膜梭菌病(A)型疫苗超纳...
关键词：
家兔 产气荚膜梭菌 膜浓缩 免疫效力
[期刊] 西南农业学报
[作者]
张俭伟 赵宏坤 杨少华 王长法 高运东 杨宏军 仲跻峰
制备了牛轮状病毒甲醛灭活疫苗,以小鼠和兔子为模型检测其免疫原性。将本室分离鉴定的牛轮状病毒野毒株(CHLY株)在恒河猴肾细胞系(MA-104)上增殖,制备病毒抗原液。当病毒的感染力达到106TC ID50/mL以上时,甲醛灭活,并分别制备油乳佐剂疫苗和铝胶佐剂疫苗,然后免疫试验动物,检测疫苗的免疫原性。小鼠免疫试验结果表明,第2次免疫后所有免疫组均产生了高水平IgG抗体,与对照组差异极显著(P0.05);兔免疫试验中,免疫组母兔产下仔兔血清中含有高水平的牛轮状病毒特异性抗体,与对照组差异极显著(P<0.01)。试验表明制备的牛轮状...
关键词：
牛轮状病毒 灭活疫苗 免疫原性
[期刊] 淡水渔业
[作者]
索钰杰 林格 江南 李逸群 范玉顶 刘文枝 孟彦 薛明洋 曾令兵 周勇
为了探明大鲵虹彩病毒病灭活疫苗的安全性与免疫效力,采用β-丙内酯(β-propiolactone, BPL)灭活鲤上皮瘤细胞(Epithelioma papilloma cyprini,EPC)内增殖的大鲵虹彩病毒(giant salamander iridovirus, GSIV),制备成大鲵虹彩病毒病灭活疫苗,利用免疫剂量为1.0×10~6 TCID_(50)/mL的灭活疫苗腹腔注射健康大鲵(Andrias davidianus),研究疫苗的安全性和免疫效力。结果显示:一次单剂量注射、单剂量重复注射和超剂量注射后,大鲵的行为和摄食均正常,未见不良反应,证明了制备的大鲵虹彩病毒病灭活疫苗安全;用不同剂量的疫苗(0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL/尾)免疫健康大鲵,在免疫后第28 d用GSIV进行攻毒,当免疫剂量为0.1 mL/尾时,相对免疫保护率为44.44%,其它4种免疫剂量的相对免疫保护率相似,均高于70%。大鲵在免疫后7 d已开始产生免疫应答,21 d血清抗体效价达到最高值252.48±28.01。在免疫后两周内,MyD88基因、TLR9基因和MHCIIA基因均显著上调。免疫后150 d进行攻毒实验,大鲵的相对免疫保护率为62.5%。二次免疫实验中,大鲵分别在第一次免疫7、14、21、28、56 d后进行第二次免疫。结果显示,第一次免疫21 d后进行二次免疫,其血清抗体效价可以较长时间维持在最高水平,最高血清抗体效价为274.37±25.23,第二次免疫后的第150 d用GSIV进行攻毒,存活率为86.67%。研究结果表明,大鲵虹彩病毒病灭活疫苗最佳免疫方式为腹腔注射疫苗0.2 mL/尾后,21 d进行第二次免疫,免疫剂量为0.2 mL/尾。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
杨劲松 吴涛 李金祥
对主要用于我国高致病性禽流感防控的重组禽流感病毒H5亚型灭活疫苗的种类和使用情况,以及国内高致病禽流感流行株的主要分支情况作一介绍。随着病毒抗原性的不断变异,疫苗毒株也需随之进行更换,因此必须使用匹配相应分支的疫苗才能取得理想的防控效果。目前国内重组禽流感病毒H5亚型灭活疫苗的生产现状是共有10家生产企业,其中2个厂家采用悬浮细胞工艺生产,其余8个厂家均采用鸡胚工艺进行疫苗生产。笔者根据企业上报的产品批签发报告情况,以2016年至2017年农业部规定的高致病性禽流感强制免疫疫苗重组禽流感病毒H5亚型三价灭活疫苗(Re-6株+Re-7株+Re-8株)为例,着重从疫苗的安全性和效力两方面对4家重组禽流感灭活疫苗生产企业共计488批次产品的批签发检验数据进行了质量分析。从Re-6株、Re-7株、Re-8株不同组分效价的比较可以看出,所有批次疫苗抗体效价几何平均滴度(GMT)至少高于国家标准1个滴度以上,而Re-6株和Re-8株组分抗体效价(GMT)高于国家标准2个滴度以上。虽然产品的效价都超过了国家标准,但抗体水平还是参差不齐,较高产品的3个组分抗体效价(GMT)比较低的要高出1.5个滴度以上。各生产企业产品批间差异较大,这虽有生产工艺不断成熟和优化的因素,但对于相近批次产品批间差异出现较大差异,则说明企业生产工艺并不十分稳定。4个企业在2017年生产的疫苗各组分抗体效价GMT整体水平均比2016年有所提高,说明生产工艺的不断成熟和优化,企业对产品质量的进一步严格把关。我国禽流感病毒灭活疫苗含有的甲醛和细菌内毒素是造成疫苗副反应的直接原因,因此通过生产工艺改进,降低疫苗中甲醛和细菌内毒素的含量,可以降低疫苗的副反应。核酸疫苗是当前禽流感疫苗研究发展的前沿技术,是现阶段禽流感疫苗硏制中最具理想前景的疫苗,也是禽流感疫苗研究的一大热点。另外,具有交叉保护性的广谱免疫原性的通用疫苗可以有效的解决抗原漂移这一难题,是现阶段流感疫苗研究的一个重要研究方向。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
汪浩 乔绪稳 陈瑾 李图帅 张元鹏 侯继波 郑其升 孙卫东
[目的]验证利用革兰氏阳性增强基质颗粒(GEM)浓缩纯化口蹄疫病毒(FMDV)抗原的可行性。[方法]将含有3个自溶素基序的锚钩蛋白基因(PA)与针对O型口蹄疫病毒特异性纳米抗体基因(VHH)串联克隆入原核表达载体p ET-32a(+)中,构建原核表达载体p ET-VPA,将其转化大肠杆菌宿主菌BL21(DE3),表达获得融合重组蛋白VPA。先将GEM颗粒与重组蛋白VPA在37℃孵育30 min,离心,取沉淀用适量的FMDV抗原液重悬,再经一步低速离心,获得沉淀即为浓缩纯化的口蹄疫病毒抗原。利用SDS-PA
关键词：
GEM技术 口蹄疫病毒 抗原纯化
[期刊] 华北农学报
[作者]
黄娟 隋晓梅 王怡男 单虎
为了弄清是否有新基因型犬瘟热病毒出现，对山东省不同地区的免疫水貂、狐狸和犬进行了犬瘟热病毒检测，扩增了病毒核衣壳基因和血凝素基因（Ｈ），并对１３个犬瘟热病毒山东株（８株貂源，２株狐狸源，３株犬源）血凝素基因进行了测序。结果表明，１３个犬瘟热病毒山东株之间Ｈ基因核苷酸同源性为９９．１％～１００．０％，均为ＡｓｉＡ－１型，这也是我国目前水貂犬瘟热病毒唯一的基因型。与２０１２年之前的犬瘟热病毒中国分离株及疫苗株相比，１３个毒株Ｈ基因有４个氨基酸的一致性变异，即Ｐ２００ｓ、Ｍ２６３ｉ、ｉ５４２Ｎ和Ｙ５４９Ｈ，Ｎ－糖基化位点比ＯＮｄｅｒｓｔｅＰＯＯｒｔ株多６或７个，比ＣｄＶ３株多３或４个。抗原性分析表明．．．
关键词：
犬瘟热病毒 血凝素基因 免疫失败
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
屈泰龙 李润成 钱幸 杨宇 余兴龙
为探寻转移因子(TF)对猪圆环病毒亚单位疫苗免疫效果的影响,将猪脾脏研磨,并反复冻融研磨液,离心获取冻融上清,用超滤法从上清液中提取转移因子。TF经理化检验合格后,以添加剂的形式与猪圆环病毒亚单位疫苗(Cap疫苗)混合,制成TF–Cap疫苗,并和未添加TF的Cap疫苗同时进行小鼠免疫试验。TF–Cap疫苗和Cap疫苗免疫的小鼠都设一免组和二免组,首次免疫后每隔10 d对实验鼠进行尾静脉采血,并用间接ELISA方法测定血清中猪圆环病毒2型(PCV2)的抗体水平。结果表明:用超滤法制得的TF,多肽含量为1.83 mg/mL;抗体检测数据显示,4个免疫组与对照组(注射生理盐水)的抗体检测值有极显著差...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王新 郭万柱 周婷 徐志文 王印 王小玉
【目的】构建猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因疫苗,并对其免疫效果和安全性进行研究。【方法】将PCV2ORF2基因从pMD-ORF2*质粒(包含PCV2 SCH A株ORF2基因)酶切回收,插入到真核表达载体pcD-NA-3.1(+)中,构建真核表达质粒pcDNA-ORF2,对该质粒进行酶切和PCR鉴定。将pcDNA-ORF2转染IBRS-2细胞,进行Western blotting检测。将构建好的pcDNA-ORF2制成核酸疫苗,按100μg/只腿部肌肉注射免疫Balb/c小白鼠,同时设pcDNA-3.1(+),PCV2全毒和PBS为对照,共免疫2次,间隔2周。分别于首免后第14天和56...
关键词：
猪圆环病毒2型 ORF2基因 核酸疫苗
[期刊] 西南农业学报
[作者]
叶茂 郭万柱 徐志文 王小玉 李云云
为了构建和筛选良好的猪乙型脑炎和猪细小病毒的核酸疫苗,并提高核酸疫苗的免疫效果,用重叠PCR法把PPV VP2和JEV E10连接,再将扩增的IFN-γ连入构建载体pcDNA.VEI使其共同表达。用脂质体将pcDNA.VEI介导入Vero细胞,通过间接免疫荧光法检测目的基因的体外表达。用pcDNA.VEI和不表达IFN-Κ的pcDNAZ.VE分别免疫Balb/c小鼠,同时设立PBS、猪细小病毒灭活疫苗、乙型脑炎弱毒疫苗和pcDNA3.1空白质粒免疫对照组。共免疫两次,间隔2周检测免疫指标。结果表明,通过鉴定核酸疫苗的构建达到了预期目标,并可在荧光显微镜下观察到了其转染的Vero细胞。该核酸疫苗...
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