【目的】比较不同抗褐化剂减轻福建柏组织培养过程中褐化现象的效果,以提高福建柏愈伤组织培养的增殖分化能力。【方法】以福建柏鳞叶和茎段为外植体,通过单因素试验,研究0.0～2.5 mg/L NAA和2,4-D及0.0～3.0 mg/L IBA对愈伤组织诱导率与生长状态的影响;以福建柏茎段为外植体,采用单因素和多因素组合试验,研究100～2 000 mg/L聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)、100～1 000 mg/L活性炭(AC)和V_C以及不同质量浓度V_C与AC组合,对愈伤组织污染率、死亡或褐化率及诱导率的影响;以诱导的愈伤组织为材料,采用单因素试验,研究100～1 000 mg/L PVPP、100～300 mg/L V_C、200～1 000 mg/L AC、30～100 mg/L V_B对愈伤组织增殖生长量、增殖率、褐化率及PPO、POD活性的影响。【结果】(1)不同质量浓度NAA、2,4-D和IBA对福建柏鳞叶愈伤组织的诱导率总体高于茎段,各生长素对福建柏鳞叶和茎段愈伤组织的诱导率均表现为NAA>IBA>2,4-D,所有处理中以1.0 mg/L NAA对福建柏鳞叶愈伤组织的诱导率最高,为83.33%;以0.5 mg/L NAA对茎段愈伤组织的诱导率最高,为61.11%;愈伤组织生长状态和抗褐化效果优劣依次为NAA、2,4-D、IBA。(2)仅100 mg/L V_C+200 mg/L AC处理的愈伤组织污染率低于不添加抗褐化剂的对照;死亡或褐化率仅500 mg/L PVPP处理与对照相同,均为0.00%,其余处理均高于对照;诱导率则以不同质量浓度PVPP、1 000 mg/L V_C、100 mg/L V_C+200 mg/L AC处理与对照相当或高于对照,其余处理均低于对照;愈伤组织生长状态总体以PVPP处理表现最优。(3)仅300 mg/L PVPP、200和400 mg/L AC处理的愈伤组织增殖率高于对照,增殖生长量仅100和200 mg/L PVPP、100 mg/L V_C、200 mg/L AC处理高于对照;所有处理中以200 mg/L AC处理的愈伤组织增殖率和增殖生长量最高,分别为70.00%和10.07 g;各抗褐化剂对福建柏愈伤组织增殖效果的优劣依次为PVPP、AC、V_C、V_B。(4)不同抗褐化剂处理的愈伤组织褐变率均呈先增加后趋于稳定的变化趋势,但变化幅度存在显著差异;各抗褐化剂的抗褐化效果优劣依次为AC、PVPP、V_C、V_B。(5)不同质量浓度PVPP、V_C、AC处理对福建柏愈伤组织PPO和POD活性的影响具有显著差异,但各处理PPO活性均与对照无显著差异,POD活性以500 mg/L AC处理显著高于其他处理。【结论】在福建柏愈伤组织诱导阶段,愈伤组织的褐化与生长素种类有关,生长素NAA、2,4-D适用于福建柏愈伤组织的诱导,IBA诱导的愈伤组织容易褐化,添加适量抗褐化剂能减少愈伤组织的褐化情况。在愈伤组织增殖培养阶段,适宜质量浓度的PVPP、AC作为抗褐化剂能有效减缓福建柏愈伤组织的褐化进程,保持愈伤组织的正常增殖生长,但高质量浓度的抗褐化剂会抑制愈伤组织的生长。

以‘泰山１号’板栗新梢茎段为试材，采用正交试验设计和单因素试验法，研究了不同培养基、消毒时间、外植体、激素、蔗糖含量、抗氧化剂及光照条件对愈伤组织诱导及外植体褐化的影响。结果表明：‘泰山１号’板栗愈伤组织诱导的最佳培养基是ＷＰＭ培养基；用０．１％Ｈｇ Ｃｌ２消毒１３～１５ Ｍｉｎ，外植体褐化率明显降低；以茎段（带顶芽）为外植体，蔗糖浓度为３０ ｇ·～（－１），愈伤组织诱导率最高；愈伤组织诱导最佳激素组合为：６－ＢＡ１．０Ｍｇ·ｌ～（－１）＋ｎＡＡ０．２ Ｍｇ·ｌ～（－１）；１００ Ｍｇ·ｌ～（－１）ＶＣ和６ ｇ·ｌ～（－１） ＰＶＰ能有效抑制外植体褐化；先暗培养两周再进行光培养，可显著降低外植．．．

　采用杜仲优树的幼叶、嫩茎及种子无菌苗的下胚轴、子叶、真叶、根为外植体,以B5和MS为基本培养基,添加1.0mg/LNAA和0.3mg/LBA,进行了不同外植体种类、外植体大小、试验接种方式、外植体采样时间、光照条件、培养基pH值共6种因素对杜仲愈伤组织诱导的影响试验。结果表明,在杜仲愈伤组织诱导中,田间材料幼叶取样时间以3月中旬为好,幼茎的取材时间以4月中旬以前最佳;无菌苗以下胚轴、子叶、真叶诱导效果较好;诱导愈伤组织的培养基pH值以6.3较适宜;培养室的光照条件以12h光照、12h暗培养较有利于愈伤组织诱导;茎段的大小和接种方式以0.7cm长度横放方式诱导效果较好。

为了探究3种激素不同配比对甜荞愈伤组织诱导的影响,筛选出高效诱导甜荞愈伤组织的最佳激素配方,以甜荞幼嫩茎段为外植体,运用正交试验研究2,4-D,6-BA和KT 3种激素对其茎段愈伤组织诱导的影响。结果表明,3种激素均能促进甜荞愈伤组织的产生,其中以生长素2,4-D对甜荞茎段愈伤组织的诱导影响最为显著,诱导甜荞茎段愈伤组织的最佳培养基配方为MS+2,4-D2.0 mg/L+6-BA1.0 mg/L+KT0.5 mg/L。

为了优化籼稻品种的组织培养特性,以N6培养基为基础,分析了微量元素3种不同浓度处理对籼稻品种粤泰B在组织培养中愈伤组织诱导率及褐化率的影响。结果表明:微量元素的浓度对愈伤组织的诱导率影响不大,而对褐化的控制有明显的影响,在1.2倍浓度下愈伤组织的褐化率最低为10.35%,并且愈伤组织致密、状态较好,0.8倍次之,褐化率为26.15%,而一般使用的1.0倍浓度下褐化率为44.55%,褐化情况是最严重的,并且愈伤组织软化,状态很差。

利用小佛肚竹、凤尾竹和孝顺竹幼竹的茎尖和带节茎段研究了愈伤组织诱导和控制褐变的方法。试验结果表明:在3种生长调节剂(2,4-D、KT、IBA)的组合中,以2,4-D(2-3 mg·L-1)效果最好,愈伤组织的诱导率最高,大部分外植体都能诱导出愈伤组织,生长良好;2,4-D 2 mg·L-1+KTO．5 mg·L-1能使部分茎段诱导出愈伤组织,而茎尖诱导的愈伤组织水渍化,易褐变;KT 4 mg·L-1能使个别茎段有愈伤组织产生,但易褐化;KT 4 mg·L-1+IBA 0．5 mg·L-1能诱导出愈伤组织,但生长缓慢。添加抗氧化剂控制愈伤组织褐变的效果要优于吸附剂,其防褐化能力:抗坏血酸(5 m...

利用乐东拟单性木兰成龄树嫩枝茎段作外植体,研究了控制褐变和组织培养的技术。试验结果表明,抗氧化剂控制褐变的效果比吸附剂好,以抗坏血酸最好,其次是巯乙醇和二硫苏糖醇。在培养基中分别加入抗坏血酸(10mgL-1)、巯茎乙醇(1mL·L-1)和二硫苏糖醇(1 5mg·L-1)使外植体的褐变率分别比对照降低67%、53%和33%。在接种前,将外植体在4℃下冷处理2h,能使外植体的褐变率从对照的35%降低为25%。1 2MS和WPM均是较合适的基本培养基。外植体在BA1 5mg·L-1+NAA0 2mg·L-1+2,4 D1 0mg·L-1的激素组合下,能诱导出较多的愈伤组织;在WPM+BA1 5mg·...

研究了卡那霉素、潮霉素对浙江红山茶、大花红花油茶愈伤组织的生长及对攸县油茶幼苗叶片诱导愈伤的影响,确定作为选择压力的卡那霉素质量浓度为50～60mg·L-1,潮霉素为25～30mg·L-1。在3种抑菌性抗生素中,羧苄青霉素促进愈伤组织诱导,对愈伤组织的生长没有影响,头孢霉素则有抑制作用,而羟氨苄青霉素轻微抑制愈伤组织的生长,但对愈伤组织的诱导影响不大。考虑到抑菌效果,适于在转基因研究中使用的羧苄青霉素的抑菌质量浓度为250mg·L-1,羟氨苄青霉素为125mg·L-1。

以薤白鳞茎基部组织为外植体,运用二次回归通用旋转组合设计不同植物外源生长物质培养基,进行愈伤组织诱导.结果表明,培养基中添加的2,4-D(x1),NAA(x2)和6-BA(x3)3种植物生长调节剂,2,4-D起决定作用,愈伤组织诱导率与三者之间的回归方程为:y=23.727+3.482 x1-2.195 x2+2.322 x3+2.706 x12+1.344 x22-1.272 x32-7.438 x1 x2-11.962 x1 x3-1.187 x2 x3.经计算机模拟推测,薤白愈伤组织最佳诱导培养基为:MS+2,4-D(2.212～2.317)mg/L+NAA(0.842～1.002)mg...

由于不同植物不同外植体对抗生素的反应不同,在进行国槐农杆菌介导的遗传转化研究之前,必须对新霉素磷酸转移酶基因(nptⅡ)有抗性的抗生素种类及其使用浓度进行探讨.结果表明,卡那霉素在浓度达到150mgL时仍然没有完全抑制国槐叶片和茎段的生长;而遗传霉素在低浓度下对国槐愈伤组织的诱导和生长的抑制作用较卡那霉素明显.随着遗传霉素浓度的增加,愈伤组织形成的频率降低,外植体的死亡率上升.当遗传霉素的浓度超过10mgL时,叶片和茎段愈伤组织的诱导和生长已完全受到抑制.另外,研究发现不同外植体对遗传霉素的敏感程度不同,茎段较强,叶片稍弱茎段的抗生素致死浓度在8～10mgL之间,叶片的抗生素致死浓度8mgL左...

通过不同外植体、基本培养基、暗培养、激素对小红参愈伤组织诱导和分化的试验研究,结果表明诱导小红参愈伤组织产生的最佳条件为:以真叶和顶芽(或侧芽)为外植体,在MS+BA 0.2 mg/L+NAA 3.0mg/L培养基上,进行暗培养,愈伤诱导率达95%。芽形成的愈伤组织组织在MS+BA 5.0+NAA 1.5~2.0中均能分化出幼苗,分化率达100%,但叶形成的愈伤组织未能分化出苗。

以成熟合子胚为外植体,用完全随机、正交设计等试验方法加之组培技术来研究影响华北落叶松(Larix princi-pis-rupprechtii)胚性愈伤组织诱导的几种主要因子。结果表明:诱导胚性愈伤组织过程中的最佳灭菌方式为2%Na-ClO灭菌30 min,剥皮、去胚乳处理。其中污染率和NaClO的灭菌时间呈负相关:NaClO灭菌时间越长,污染率越低。诱导胚性愈伤组织的最佳琼脂浓度为4 g·L-1,且过高和过低的琼脂浓度不仅降低了其诱导率,提高了愈伤组织的褐化水平,也影响了外植体的发育形态。外源激素的正交试验结果表明:2,4-D是主要影响因子,对诱导率的影响显著,其次是KT,最后是6-BA。最...

以Nubiana叶片为试材,对其愈伤组织的诱导、继代培养及褐变调控进行了研究。结果表明:Nubiana叶片愈伤的诱导及继代培养以WPM附加BA 0.5 mg/L和2.4-D 2.0 mg/L的培养基上效果最好;0.1%的柠檬酸(CA)具有明显地促进愈伤组织生长、抑制褐变的作用,而聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的效果最差;3%的葡萄糖(Glu)最适于愈伤组织的诱导及继代。综合以上研究结果,获得较好的愈伤组织的适宜培养条件是:WPM+BA 0.5 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L+Glu 3%+CA 0.075%~0.1%,暗培养28~30 d。

芍药组织培养是解决其快速繁殖的有效方法,更为其新品种的繁育提供有效途径。本试验分别从5个芍药品种的不同部位取材,研究了影响芍药愈伤组织诱导和再分化的主要因素。结果表明:2,4-D、NAA与TDZ诱导愈伤组织效果较好,KT、IAA和IBA不利于愈伤组织诱导和不定芽分化;在愈伤组织再分化中,NAA效果优于2,4-D,TDZ优于6-BA;在所选外植体中只有胚轴产生的愈伤组织分化出不定芽,平均分化率为7.95%。