- 年份
- 2024(2516)
- 2023(3508)
- 2022(3055)
- 2021(2832)
- 2020(2359)
- 2019(5104)
- 2018(5312)
- 2017(9618)
- 2016(5525)
- 2015(6235)
- 2014(6586)
- 2013(6130)
- 2012(5851)
- 2011(5317)
- 2010(5292)
- 2009(4991)
- 2008(4701)
- 2007(4284)
- 2006(3744)
- 2005(3258)
- 学科
- 济(21346)
- 经济(21316)
- 管理(13514)
- 业(9854)
- 方法(8618)
- 学(8030)
- 数学(7640)
- 数学方法(7576)
- 企(7311)
- 企业(7311)
- 中国(6404)
- 地方(5897)
- 农(5611)
- 体(5515)
- 制(5427)
- 财(4915)
- 理论(4528)
- 环境(4236)
- 融(4189)
- 金融(4182)
- 银(4060)
- 银行(4031)
- 行(3939)
- 地方经济(3926)
- 及其(3771)
- 农业(3534)
- 业经(3527)
- 教育(3373)
- 划(3060)
- 体制(3017)
- 机构
- 学院(77473)
- 大学(77309)
- 研究(31125)
- 济(28892)
- 经济(28186)
- 管理(24297)
- 中国(22310)
- 科学(21061)
- 理学(20505)
- 理学院(20227)
- 管理学(19682)
- 管理学院(19561)
- 农(19188)
- 所(17238)
- 京(16825)
- 研究所(15944)
- 农业(15498)
- 业大(14043)
- 中心(13843)
- 财(13671)
- 江(13066)
- 院(11554)
- 技术(11360)
- 省(10878)
- 财经(10447)
- 北京(10226)
- 范(10200)
- 室(10064)
- 师范(9932)
- 州(9762)
- 基金
- 项目(53366)
- 科学(40333)
- 基金(37035)
- 研究(36811)
- 家(34115)
- 国家(33832)
- 科学基金(27225)
- 省(22191)
- 社会(21994)
- 社会科(20682)
- 社会科学(20679)
- 基金项目(18829)
- 划(18729)
- 自然(17959)
- 自然科(17537)
- 自然科学(17531)
- 教育(17221)
- 自然科学基金(17188)
- 资助(15854)
- 编号(14534)
- 重点(12798)
- 成果(12515)
- 发(12121)
- 计划(11470)
- 课题(11426)
- 部(11363)
- 体(10863)
- 创(10750)
- 科技(10535)
- 科研(10530)
共检索到120520条记录
发布时间倒序
- 发布时间倒序
- 相关度优先
文献计量分析
- 结果分析(前20)
- 结果分析(前50)
- 结果分析(前100)
- 结果分析(前200)
- 结果分析(前500)
[期刊] 中国水产科学
[作者]
宋振荣
以长缟(Pseudocaranxdentex)孵化仔鱼为材料,通过神经坏死病毒(NervousNecrosisVirus,NNV)浸浴感染实验,明确病毒浓度越高,供试鱼被病毒感染的时间越早,病毒检出率越高;运用细胞组织病理学和酶联免疫(Enzyme linkedimmunosorbentassays,ELISA)的原理和方法,了解了神经坏死病毒的侵入、感染和在神经组织中的扩散方式;利用ELISA技术,结合电子显微镜对NNV感染细胞进行超显微观察,确认育苗水环境中神经坏死病毒可水平感染供试鱼皮肤上皮的基底细胞;病毒感染细胞发生细胞质内质网膨胀、细胞核变性、细胞小器官数减少等病理变化;病毒感染细...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李守湖 范玉锋 高欣 李宝玉 吴鹏程 胡永浩 柳纪省
【目的】克隆传染性造血器官坏死症病毒（IHNV）G基因，构建其重组腺病毒载体，为IHN预防及疫苗的研制提供参考。【方法】通过RT-PCR和PCR技术扩增IHNV G基因，将G基因插入到腺病毒穿梭载体中，再用带有目的基因的腺病毒载体与骨架载体在大肠杆菌BJ5183中同源重组，构建重组腺病毒质粒，通过PCR扩增及Sal Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切鉴定，经PacⅠ酶切后转染HEK-293细胞进行包装，获得带有目的基因的重组腺病毒，通过观察绿色荧光蛋白表达情况来监控重组腺病毒，用Western-blot法检测糖蛋白的表
关键词：
传染性造血器官坏死症 G基因 腺病毒载体
[期刊] 中国水产科学
[作者]
艾海新 王崇明 王秀华 刘英杰 李赟 贺桂珍 宋微波
从发病疫区栉孔扇贝(Chlamysfarreri)组织中分离出病毒和立克次体(Rickettsiaorganism,RO),对健康栉孔扇贝进行人工感染。结果显示,病毒注射组死亡率为75%,病毒浸浴组死亡率为68.7%;RO注射组死亡率仅为18.7%;灭活RO注射组死亡率为31%;灭活病毒注射和空白对照组死亡率皆为12.5%;病毒注射、浸浴组与灭活病毒注射组、空白对照组死亡率有显著差异。而RO注射组与灭活RO注射组、空白对照组死亡率没有显著差异。电镜复检结果显示,发病扇贝的外套膜、鳃、消化腺组织中分布有大量病毒粒子,该病毒粒子的形态特征、病理学特征与自然海区发病扇贝中的病毒粒子特征完全一致。人工...
关键词：
栉孔扇贝 病毒 立克次体 人工感染实验
[期刊] 水产学报
[作者]
林蠡 黄剑南 翁少萍 王云新 刘付永忠 张海发 何建国
用逆转录-聚合酶链式反应(RTPCR)检测患病赤点石斑鱼苗,呈Beta诺达病毒阳性。光学显微镜下观察到病鱼的脑、视网膜、脊髓有空泡。在脑部,空泡主要分布在端脑、间脑和小脑。受感染的细胞明显收缩、致密变化和嗜碱性。包涵体常为圆形,大小不一。透射电镜下,在感染细胞的细胞质可观察到含有病毒粒子的致密体。病毒粒子呈等面体,无外膜,直径为25～28nm,随机分布在细胞质或在致密体内排列成晶格状。致密体大小不一。偶尔观察到较大致密体的外膜已破裂,病毒粒子被释放到细胞质。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
田佳音 陈康勇 张畅 宋云杰 高谦 邹钧
肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,Tnf)作为重要的炎症因子,在抵抗细菌和病毒感染以及清除被感染的细胞等方面发挥着重要的作用。对斑马鱼进行腹腔注射免疫刺激物、细菌和病毒病原,并采用荧光定量PCR技术分析tnfα及其受体[tnf receptor superfamily(tnfrsf)member 1a]在肾脏和脾脏中的表达。实验结果显示:tnfα和tnfrsf1a在斑马鱼各组织中均有常量表达。脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)和聚肌苷酸-聚胞苷酸[polyinosinic acid-polycytidylic acid,poly(I:C)]能够调控肾脏和脾脏中tnfα和tnfrsf1a的表达。腹腔注射嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)感染斑马鱼后,tnfα在脾脏(48 h和72 h)和肾脏(72 h)中表达显著升高;tnfrsf1a在脾脏(48 h)表达水平也有显著上调。在注射迟缓爱德华氏菌(Edwardasiella tarda)的斑马鱼中,肾脏的tnfα表达显著增加,但在脾脏的表达则完全被抑制;tnfrsf1a基因在脾脏和肾脏(6 h和72 h)有明显上调。鲤春病毒血症病毒(spring viraemia of carp virus,SVCV)感染斑马鱼后,tnfα和tnfrsf1a在感染早期表达量有显著升高;而且在感染1～7 d中,肾脏的tnfrsf1a始终维持高水平诱导表达。实验结果表明:tnfα和tnfrsf1a在鱼类抵抗细菌和病毒感染过程中发挥重要作用。
[期刊] 水产学报
[作者]
战文斌 王远红 铃木信一 俞开康 福田颖穗
用投喂患白斑症病毒病的虾组织人工感染日本对虾稚虾。每日取样，整虾冰冻切片，单克隆抗体的荧光抗体方法，原位观察病毒在虾体内的感染增殖。结果表明：感染后三天内，在感染虾的各组织器官内均未观察到明显的病毒感染的阳性细胞；第四天首先在鳃丝腔内的小量血细胞观察到病毒感染；第五天除血细胞外同时在血窦、鳃上皮组织、皮下组织内观察到；第六天进而在心脏、胃上皮组织内观察到；第七天进一步又在淋巴器官、中肠内观察到；第八天和第九天观察的所有样品在以上组织器官中均为病毒感染阳性。整个观察过程中在肝胰腺没有发现病毒感染的阳性细胞。
关键词：
日本对虾 白斑症病毒 感染增殖
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
郭露玲 刘海滨 石剑 李谷 肖庚富
通过RT-PCR获得了传染性造血组织坏死症病毒(infectious hematopoietic necrosis virus,IHNV)囊膜糖蛋白(G蛋白)基因,并将其克隆入新型MBP(麦芽糖结合蛋白)融合表达质粒pMAL-c2X,构建重组质粒pMAL-c2X/IHNV-G并转入大肠杆菌Rossetta-gami2(DE3)splyS。经IPTG诱导后,表达出包含全长G蛋白在内、预期分子质量为99 ku的融合蛋白。基于anti-MBP抗体的Western blot鉴定证实表达蛋白存在。
[期刊] 水产学报
[作者]
黄桂菊 陈健光 喻达辉 曾令兵 龙华
利用Invitrogen公司的在线生物学软件分析斜带石斑鱼神经坏死病毒CP基因,设计针对CP基因不同位置的小发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰序列[其结构特征为正链(19 nt)-环(4 nt)-负链(19 nt)]。化学合成这些序列,并退火连接为双链干扰片段,将双链干扰片段定向克隆到干扰载体pENTRTM/U6中,构建shRNA干扰载体pshRNA-124、pshRNA-896和pshRNA-NNV。然后,用脂质体转染法分别将3种shRNA干扰载体和pEGFP-CP基因共转染导入黑头呆鱼(FHM)肌肉细胞,荧光显微镜观察细胞荧光强度,分析荧光抑制效率,Real-...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
陈晓艳 何建国
将含有斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)神经坏死病毒(orange-spotted grouper nervous necrosis virus,OGNNV)的主衣壳蛋白(main capsid protein,MCP)基因的重组质粒pET32a-MCP转入大肠杆菌BL21后,用异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用柱层析纯化表达的融合蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔,制备抗MCP融合蛋白的血清。用ELISA方法检测抗血清的效价,用Western-blot检测抗血清的特异性。结果显示,获得的抗血清稀释1∶22 000倍时仍呈阳性,并能有效中和OGNNV,实验组的相对...
关键词：
斜带石斑鱼神经坏死病毒 主衣壳蛋白 抗体
[期刊] 水产学报
[作者]
于佐安 王崇明 李赟 任伟成 蔡玉勇
急性病毒性坏死病毒已被证实为是一种对养殖栉孔扇贝危害极大的病原体,探讨其传播途径是防控扇贝"大规模死亡症"的前提之一。将亲贝各放在一独立育苗水体内产卵、孵化,并进行幼虫培育。通过春季和秋季室内人工育苗,从40个独立育苗水体中,采获亲贝、卵各23个家系样品,受精卵、D形幼虫、壳顶幼虫各12个家系样品,眼点幼虫2个家系样品。采用间接ELISA法、间接免疫荧光技术和电子显微镜技术对亲贝、卵和发育各期的幼虫进行定性和定位的检测。结果发现,栉孔扇贝的性腺组织中存在病毒粒子,而卵、受精卵及各期发育幼虫体内均未检测到病毒。由此可以判断:AVNV可以感染栉孔扇贝的性腺,但并不存在卵内垂直传播的可能性。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
许海东 区又君 郭志勋 苏友禄 王瑞旋
2008年5月,湛江市某网箱养殖场的卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)幼鱼发生大规模死亡,调查发现病鱼呈现体色发黑、反应迟钝、呈螺旋状或旋转游动等典型的病毒性神经坏死症症状,在鱼体没有发现寄生虫或细菌感染,PCR检测发现病鱼感染了鱼类神经坏死病毒(NNV)。利用已经发表的NNV核酸序列设计引物,克隆外壳蛋白基因并测序,根据同源性比较和系统进化分析,该病毒与斜带石斑神经坏死病毒(ECNNV)碱基相似率达99.2%,属于赤点石斑鱼神经坏死病毒基因型(RGNNV)。同时进行人工感染试验,采用4种方法感染该病毒,累计死亡率均达100%,并对感染样品进行克隆测序鉴定,证明导致此次湛江卵形鲳...
关键词：
卵形鲳鲹 神经坏死病毒 序列分析
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
林楠 吴斌 李苗苗 王巧煌 林国清 樊海平 林克冰
对福建省漳州市某水产养殖场发生的疑似病毒性神经坏死病的病鱼进行病原分离和鉴定.从出现疑似病毒性神经坏死病症状的石斑鱼苗上取眼部、脑部组织进行研磨,将匀浆液接种到条纹月鳢细胞系(SSN)细胞株SSN-1及其克隆细胞株E-11,两株细胞均出现明显的细胞病变,细胞肿胀变圆,呈空泡化并脱落,E-11细胞较SSN-1细胞更早出现细胞病变,且病变更明显.将病鱼眼部、脑部组织的研磨液、细胞培养上清进行RT-PCR检测,均检测出病毒性神经坏死病病毒(VNNV)的特异性条带,目的片段大小为427 bp,序列比对结果提示该病原为赤点石斑鱼神经坏死病毒(RGNNV).电镜观察结果显示,细胞培养上清中存在直径约30 nm的病毒颗粒,细胞质内大量病毒颗粒聚集成团,细胞器受损,细胞结构被破坏.将分离得到的VNNV进行温度、酸碱度敏感性试验,结果显示:50℃下处理30 min后该病毒滴度明显下降,60℃处理30 min后病毒失活;在pH为3、11的条件下病毒滴度均明显下降.
关键词：
石斑鱼 病毒性神经坏死病 分离 鉴定
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
程国富 胡薛英 周诗其 熊道焕
本实验运用单克隆抗体ＰＡＰ法，对实验感染鸭肝炎病毒雏鸭的组织切片进行染色观察，旨在动态研究病毒在雏鸭体内的分布以及病毒与组织病变的关系。研究结果显示，感染后３ｈ，雏鸭心肌、肝、脾、肾、胰、腿部肌肉、大脑等组织的细胞浆内均出现了ＰＡＰ染色的特异性棕黄色产物，除胰脏组织切片的ＰＡＰ反应性在感染后１６８ｈ达到最高外，上述其他组织的最高ＰＡＰ反应性均在感染后２４ｈ；对同期的不同组织切片比较观察发现，肝、脾、胰外分泌腺、肾小管上皮细胞及腿部肌肉细胞的ＰＡＰ反应性比心肌及大脑神经元细胞的ＰＡＰ反应性强。由此表明，鸭肝炎病毒在感染后３ｈ达全身化，并主要侵害肝、脾、肾、胰及腿部肌肉，继而引起相应的变化
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
李晋 史成银 王胜强 粟子丹
本研究依据赤点石斑鱼神经坏死病毒(Red-spotted grouper nervous necrosis virus,RGNNV)RNA2的序列,在其3′端设计反转录引物,在5′端设计PCR扩增引物,构建了一种可以评价RNA链相对完整性的RT-PCR方法,命名为LR RT-PCR(Left reverse transcript Right amplify RT-PCR),并对该方法的引物浓度、Mg2+浓度、d NTPs浓度、退火温度4个重要参数进行了优化。结果显示,优化后的LR RT-PCR反应体系为:引物浓度0.2μmol/L、Mg2+浓度4 mmol/L、d NTPs浓度0.5 nmol...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
乐文静 史文琦 季英华 周益军
使用斑点免疫结合试验(DIBA)和PCR法分别对灰飞虱体内水稻条纹病毒(rice stripe virus,RSV)和沃尔巴克氏体(Wolbachia)的感染特点进行研究。结果发现:灰飞虱体内广泛存在Wolbachia感染,但是灰飞虱体内Wolbachia的感染与其体内携带RSV的特点不存在明显的相关性,同时二者在经卵传播过程中也没有明显的相关性。这暗示了RSV和Wolbachia在灰飞虱体内虽然都可以垂直传播给下一代,但是二者在传播方式上或者在传播过程中可能是两个相对独立、相互间没有明显影响的过程。
文献操作()
导出元数据
文献计量分析
导出文件格式：WXtxt
删除
