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[期刊] 中国科学技术大学学报
[作者]
黄亿 周荣斌
NLRP3是位于细胞质中的模式识别受体,属于NOD样受体家族.在多种危险相关分子模式和病原体相关分子模式的激活下,NLRP3受体通过招募接头蛋白ASC和半胱氨酸蛋白酶原caspase-1形成一个多聚蛋白复合物,称之为NLRP3炎症小体.NLRP3炎症小体的主要功能是通过促进免疫应答清除病原微生物和危险信号,维持体内平衡.但是,NLRP3炎症小体异常活化又会引发多种炎症性疾病.因此,其活化必须受到严格调控.近期,多种激酶和磷酸酶被报道调控NLRP3炎性小体活化,这表明磷酸化在调控炎症小体活化中起着至关重要的作用.在本文中,我们概述了多种激酶和磷酸酶如何调控NLRP3炎症小体活化,并概述了磷酸化在NLRP3炎症小体活化中的调控作用.此外,我们还总结了靶向NLRP3相关激酶或磷酸酶治疗炎症小体相关疾病的潜在药用化合物.
[期刊] 中国科学技术大学学报
[作者]
何鸿宾 江维
NLRP3是一种重要的胞内模式识别受体,可以与ASC及pro-caspase-1形成炎症小体,促进IL-1β和IL-18等炎性介质的成熟和分泌,从而促进炎症反应.NLRP3炎症小体活化失调与多种人类重大疾病密切相关,如痛风、动脉粥样硬化、神经退行性疾病和2型糖尿病等.因此NLRP3炎症小体是上述疾病的潜在干预靶点,许多NLRP3炎症小体抑制剂对相关疾病表现出良好的预防或者治疗效果.本文对NLRP3炎症小体抑制剂最近的研究进展进行简要综述.
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
刘思雨 张月莹 黄江 崔月琦 刘宇 周玉龙 朱战波 张泽财
为分析小鼠感染牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus,BVDV）诱导的NLRP3炎症小体表达情况及其对病毒复制的影响，选用40只4～6周龄雌性SPF级BALB/c小鼠，随机分成8组，其中BVDV接种小鼠7组，对照1组，每组5只。应用105 TCID50的CP型BVDV腹腔感染小鼠后，分别在感染后0、6、12、24、48、96、168和240h采集小鼠的肠道、脾脏和血液，通过qRT-PCR和Western Blot方法对小鼠十二指肠中NLRP3、IL-1β和Caspase-1分别进行基因及蛋白水平的检测。应用qRT-PCR方法确定不同时间点小鼠十二指肠和血液中的病毒载量，同时于感染后第168h检查十二指肠和脾脏病理组织变化。结果表明：1）小鼠感染BVDV早期（6、12和24h）组织中的NLRP3、IL-1β和Caspase-1基因转录水平逐步升高，48h未见明显变化，同时感染24h时，蛋白表达水平均显著高于对照组（P<0.05）;2）小鼠感染BVDV后期（96、168和240h）NLRP3、IL-1β和Caspase-1的基因转录水平呈现下降趋势，168h时转录和蛋白水平降低最为显著（P<0.05）;3）感染小鼠十二指肠、脾脏和血液的病毒载量均在168h达到高峰；第168h采集的小鼠十二指肠有大量炎性细胞浸润，脾脏淋巴细胞变性和坏死，证明BVDV感染模型成立。综上，NLRP3炎症小体在BVDV感染早期被激活，然而，随着病毒载量的增加，可能对其活性有一定的抑制作用。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
高星 李欣 李铮 杜曼婷 张彩霞 张德权 丁武
【目的】研究宰后肌肉中肌球蛋白磷酸化与肌动球蛋白解离之间的关系，分析其磷酸化水平的变化对肌动球蛋白解离的影响，探究肌球蛋白磷酸化对宰后肌肉肌节长度与嫩度的作用。【方法】取宰后３０ ｍｉｎ内的羊背最长肌，在４℃条件下分别成熟６、２４、４８和７２ ｈ，通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳、Ｐｒｏ－Ｑ染色和蛋白质免疫印迹测定肌球蛋白的磷酸化水平和肌动球蛋白解离程度随宰后时间的变化；测定肌动球蛋白ＡＴＰ酶的活性，分析宰后不同时间点肌球蛋白与肌动蛋白结合作用力的强弱；采用透射电镜分析宰后肌节长度随时间的变化。【结果】研究发现宰后肌肉中肌球蛋白轻链２的磷酸化水平在０．５—４８ ｈ快速降低（Ｐ
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王慧利 王婧 孟春花 李静心 曹少先
[目的]进一步明确小鼠卵母细胞中组蛋白H3的磷酸化模式及其对卵母细胞成熟过程的调控。[方法]采用免疫荧光技术,对不同减数分裂阶段小鼠卵母细胞中组蛋白H3S10/H3S28的磷酸化状态进行了检测,在利用Aurora激酶广谱抑制剂ZM447439处理并检测卵母细胞成熟质量的基础上,进一步检测了处理后卵母细胞H3S10/H3S28磷酸化状态、染色体排列形态及Aurora激酶自身磷酸化水平的变化情况。[结果]小鼠卵母细胞减数分裂期间,组蛋白H3S10/H3S28持续磷酸化;ZM447439处理浓度依赖性地损害了卵母细胞的成熟能力,并相应导致H3S10/H3S28磷酸化减弱直至消失、染色体排列异常及Au...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
陈立娟 李欣 李铮 李培迪 李仲文 张德权
【目的】通过激活蛋白激酶的活性提高羊肉肌原纤维蛋白的磷酸化水平，分析磷酸化水平的提高对羊肉肌原纤维蛋白降解程度、收缩功能的影响，进一步揭示蛋白质磷酸化对羊肉肌肉嫩化的作用机理。【方法】通过添加蛋白激酶Ａ激活剂Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ、蛋白激酶Ｃ激活剂佛波酯（ＰＭＡ），提高蛋白激酶的活性，改变羊肉肌原纤维蛋白的磷酸化水平。比较激活剂处理组与空白对照组肌原纤维小片化指数（ＭＦｉ）、条带降解程度、肌节长度等指标的差异，确定蛋白质磷酸化水平对羊肉肌肉收缩和肌肉降解的影响。【结果】将羊肉样品在蛋白激酶溶液中培养２４ ｈ，在培养结束后１、２和４ ｈ，ＰＭＡ处理组（ＰｋＣ激活组）的蛋白激酶活性显著高于空白对照组（．．．
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
尹赜鹏 莫江玲 齐明芳 孟思达 李天来
蛋白质的磷酸化是一种重要的蛋白质翻译后修饰方式。蛋白质的磷酸化与去磷酸化在植物气孔运动过程中起着关键的调节作用。目前,保卫细胞磷酸化蛋白质组学的主要研究内容包括鉴定磷酸化蛋白、定位磷酸化位点、定量磷酸化水平,进而揭示磷酸化和去磷酸化在植物气孔运动过程中所起的生物学功能。Open Stomata 1 (OST1)/SnRK2.6是蔗糖非酵解型蛋白激酶SnRK2(sucrose non-fermenting receptor kinase)家族的成员,具有典型的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶保守域,并主要在保卫细胞中表达。当植物处于正常生长环境时,ABA的受体PYR/PYL/RCAR不能作用于蛋白磷酸酶2C (PP2Cs,protein phosphatase 2Cs),PP2Cs通过与OST1互作抑制OST1的活性;在逆境胁迫下,PP2Cs解除对OST1蛋白激酶的抑制,随后OST1蛋白激酶启动对下游信号组分的调控作用并引起气孔运动。通过综述磷酸化修饰的定性和定量分析方法,以及蛋白质磷酸化修饰在保卫细胞应对非生物胁迫中的作用机制,提出了保卫细胞磷酸化蛋白组学领域目前存在的挑战和研究前景,旨在为深入了解保卫细胞应答非生物胁迫的气孔运动机制提供参考和新方向。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
陈翠霞 林冠烽 陈国荣 蔡政汉 杨旋 黄彪
以菌糠为原料,在机械力化学技术前处理条件下,采用磷酸化学一步炭活化法制备高吸附性能的粉末活性炭.通过单因素试验探讨了不同制备条件对活性炭得率及其吸附性能的影响,并选取浸渍比、球磨时间、活化温度和活化时间4种因素,采用L_9(3~4)正交设计试验,初步筛选较优性能的活性炭制备工艺.采用比表面及孔径分析仪、扫描电镜表征活性炭的孔结构和形貌特征.结果表明:当预处理球磨时间为30 min,浸渍比为2.0,活化温度为450℃,活化时间为60 min时,得到的活性炭的碘吸附值为962.94 mg·g~(-1),亚甲基蓝吸附值为150.0 mg·g~(-1),焦糖脱色率为144.63%,得率为36.20%.
关键词：
菌糠 活性炭 磷酸 吸附性能
[期刊] 中国水产科学
[作者]
陈振威 江藕 唐伟俊 姜明旭 王怀池 简宇清 王欢 郑菲菲 王庆超
NLRP3作为经典的模式识别受体,与ASC和pro-caspase1等蛋白组成NLRP3炎症小体,是鱼类细胞焦亡的主要激活途径。为深入探究大口黑鲈(Micropterus salmoides)中NLRP3相关功能,以大口黑鲈(Micropterus salmoides)cDNA为模板扩增Msnlrp3区段并构建pET-32a-MsNLRP3原核重组质粒,随后将上述重组质粒转化到BL21 (DE3)感受态细胞后以0.8mmol/L的IPTG于16℃过夜诱导重组蛋白的表达。通过亲和层析纯化对获得的上清蛋白液进行纯化,并以SDS-PAGE和质谱分析法对获得的MsNLRP3重组蛋白进行鉴定,从而确认MsNLPR3原核表达系统构建成功。将上述纯化的MsNLRP3蛋白分别免疫日本大耳兔(1只)和Balb/C小鼠(3只)制备多克隆抗体,通过ELISA和Western blotting法检测抗体的效价和特异性。结果表明,免疫后获得的4种抗血清能特异性识别NLRP3重组蛋白和大口黑鲈内源性蛋白,表现出单一而清晰的目的条带,且分子量大小与预期一致;同时兔源和鼠源抗血清效价分别为1∶10240 K和1∶1024 K。为验证抗体的应用效果,首先构建柱状黄杆菌浸泡感染大口黑鲈的模型,大口黑鲈鳃表现出明显的组织病理学变化;应用本研究制备的多克隆抗体进行蛋白质印迹分析,检测到鳃中NLRP3蛋白水平在细菌感染后显著上调。本研究制备的MsNLRP3多克隆抗体为未来开展大口黑鲈NLRP3蛋白的功能研究提供了重要的基础。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
苑克俊 程来亮 牛庆霖 王江勇
【目的】苹果着色是一个重要的质量性状，构建苹果磷酸化蛋白质组并进行鉴定与分析，了解在苹果着色过程中的蛋白质磷酸化，为进一步阐明苹果着色机理提供参考。【方法】以着色‘嘎拉’和非着色‘金冠’两个品种苹果果皮为试材提取总蛋白，用Ｔｉ Ｏ２富集磷酸化肽段，对富集到的磷酸化肽段进行高效液相色谱分离，利用质谱鉴定磷酸化肽段，采用ＭａｓｃＯＴ２．２和ＰｒＯＴｅＯＭｅ ＤｉｓｃＯｖｅｒｅｒ１．４（ＴｈｅｒＭＯ）软件进行蛋白质查库鉴定，使用的数据库为ＵｎｉＰｒＯＴ＿ＭａｌＯｉＤｅａｅ．ｆａｓＴａ。对鉴定到的磷酸化肽段和蛋白质进行分析，找出着色与非着色苹果品种中有差异的磷酸化蛋白质及其修饰位点。【结果】在着色苹果．．．
关键词：
苹果 磷酸化 蛋白质组 蛋白激酶 着色
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张艳 李欣 李铮 李蒙 刘永峰 张德权
【目的】通过测定冰温贮藏及冷藏过程中肌肉肌浆蛋白与肌原纤维蛋白的磷酸化水平，分析冰温贮藏对蛋白质磷酸化水平的影响，为肉类冰温贮藏品质调控提供理论依据。【方法】选取大尾寒羊与小尾寒羊杂交公羊的背最长肌于冷藏和冰温条件下成熟，分别在０．５ ｈ、１２ ｈ、２４ ｈ、３ ｄ、５ ｄ、９ ｄ取样测定蛋白激酶活性、肌浆蛋白与肌原纤维蛋白的磷酸化水平。采用蛋白激酶活性测定试剂盒、运用酶联免疫的方法检测各处理组蛋白激酶的活性随贮藏时间的变化；通过ＳｄＳ－ＰＡＧＥ电泳、荧光染色的方法得到全蛋白染色与磷酸化染色的肌浆蛋白与肌原纤维蛋白条带，运用ＱｕＡｎｔｉｔｙ ＯｎＥ软件分析各处理组各处理时间的肌浆蛋白及肌原纤维．．．
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
单锴 周姗姗 李茜 周克茹 李春保
脂氧合酶（lipoxygenase，LOX）是一类含有非血红素铁的双加氧酶，在人体中广泛表达，并在多种活化的免疫细胞和肿瘤组织中上调。LOX催化长链多不饱和脂肪酸形成相应的氢过氧化物。这些代谢物在生理条件下调节血管功能、肾脏功能、生殖系统功能和免疫防御，而在病理条件下导致疼痛、发热和炎症，进而在多种急、慢性疾病中起着重要作用。目前已经在人类体内发现6个LOX基因，其可以通过可变剪切和蛋白修饰机制形成更多种效应蛋白。6大类LOX分别具有不同的表达谱、不同的底物偏好性和不同的代谢产物，因此也具有不同的功能分工。本文从LOX的分布和代谢特性入手，综述了它们与炎症相关疾病的关系，从生物化学角度介绍了LOX的表达与活性调控机制并展望了靶向LOX功能缓解相关病理损伤的营养学和临床医学策略。
关键词：
脂氧合酶 炎症 多不饱和脂肪酸 脂质介质
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
闫普普 朱君 刘佳丽 黄永熙 余捷 汤锋 郭利伟
为进一步明晰黄芩苷（BCN）对脂多糖（LPS）诱导的小鼠炎症损伤的缓解作用机制，采用体内体外试验结合，体外试验采用LPS建立RAW264.7细胞炎症模型，测定细胞吞噬能力、一氧化氮释放、炎症细胞因子及TGF-β/SMAD2通路相关mRNA表达；体内试验采用不同浓度的黄芩苷对BALB/c小鼠连续7 d灌胃后腹腔注射LPS建立炎症模型，测定小鼠脾脏指数、T细胞亚群及免疫平衡，RT-qPCR法测定脾脏炎症细胞因子和TGF-β/SMAD2通路相关基因的mRNA表达。结果显示：黄芩苷在25μg/mL范围内对RAW264.7无增殖抑制作用，LPS质量浓度为1μg/mL时，细胞存活率为54.55%。不同质量浓度黄芩苷均可增强RAW264.7细胞的吞噬能力（P<0.05），降低NO释放（P<0.05）;LPS刺激后炎症细胞因子mRNA表达上升（P<0.05）,TGF-β和SMAD2表达下降，黄芩苷干预后上述mRNA表达得到逆转。此外，LPS处理后小鼠脾脏指数显著上升（P<0.01），不同剂量的黄芩苷组均改善这一情况（P<0.05）；流式细胞术结果显示：黄芩苷能够改善LPS刺激的CD4+细胞与CD8+细胞的分化，降低CD4+/CD8+的比值，同时，黄芩苷可恢复LPS刺激的Th17/Treg平衡轴失衡。结果表明，黄芩苷对LPS诱导的小鼠炎症具有缓解作用，其作用机制可能与TGF-β/SMAD2信号通路激活、抑制炎症因子的表达及恢复Th17/Treg平衡轴有关。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李付振 邱新棉 王美兴 刘传亮
【目的】了解棉花在盐胁迫条件下相关基因的表达,并克隆与抗(耐)盐相关的重要基因。【方法】通过筛选棉花EST数据库,并对目标EST序列进行整合,对中棉所49在非盐胁迫和盐胁迫条件下进行处理并利用RT-PCR的方法克隆了质膜Na+/H+逆向转运蛋白途径中的1个蛋白磷酸化同源基因,命名为GhSOS2,并通过实时荧光定量PCR对其表达特征进行分析。【结果】序列分析表明,该基因成熟mRNA的剪接存在2种可选择性的剪接体,分别命名为GhSOS2a(GenBank登录号:GU188960)和GhSOS2b(GenBank登录号:GU188961),分别编码445和421个氨基酸残基。由于剪接方式的差异,导致...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
王竹青 任宪云 高保全 刘萍 李健 王磊
为探究近交对三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)氧化磷酸化代谢的影响,首先克隆了三疣梭子蟹线粒体呼吸链4个复合体关键亚基基因的c DNA全长,分别命名为pt Ndufv2、pt SDHC、pt Cytochrome c1与pt COX6B。pt Ndufv2基因c DNA全长1005 bp,编码234个氨基酸,该蛋白是复合体Ⅰ的核心亚基Ndufv2;pt SDHC基因全长915 bp,编码由179个氨基酸组成的复合体Ⅱ关键亚基SDHC;pt Cytochrome c1基因全长2371 bp,编码由313个氨基酸组成的亚基Cyt c1;pt COX6B基因全长1171 bp,编码由105个氨基酸组成的COX6B亚基。生物信息学分析显示,这些复合体亚基基因进化上比较保守。酶活检测及RT-PCR结果表明,随着近交系数的增加,三疣梭子蟹肝胰腺中复合体Ⅰ、复合体Ⅲ活力分别从F4、F2开始呈现显著下降趋势(P<0.05);F10复合体Ⅳ酶活力显著低于其余各代(P<0.05);4个复合体基因表达量均显著下降,且各代表达量显著低于F0(P<0.05)。在心脏中,复合体Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ活力分别从F2、F2、F6开始显著下降(P<0.05),这一结果证实近交衰退已出现在三疣梭子蟹氧化磷酸化代谢通路。
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