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[期刊] 中国水产科学
[作者]
么宗利 应成琦 周凯 王慧 来琦芳
以广盐性养殖的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)为研究对象,采用抑制消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)和定量PCR的方法,研究其在高碳酸盐碱度胁迫下转录组水平的基因表达差异,以期从基因组水平研究对虾对高碳酸盐碱度胁迫的适应机制。结果表明,以高碳酸盐碱度(20 mmol/L)胁迫第4天凡纳滨对虾鳃组织和低碱度(2 mmol/L)对照组鳃组织为材料,通过斑点杂交筛选,发现鳃组织中有158个克隆子表达上调,291个克隆子表达下调。挑选150个高表达差异的克隆子进行测序,获得100个序列,其中50个得到成功注释。经过GO分...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
魏威 何玉英 李朝霞 周雨欣 李健 谢拥军
采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术获得中国对虾(Fenneropenaeus chinensis) ATG5基因cDNA全长，命名为FcATG5。利用实时荧光定量技术分析了FcATG5的组织表达及其在pH和碳酸盐碱度胁迫下的表达特征，并利用RNAi技术验证其功能。基因分析显示，FcATG5 cDNA全长为2225 bp，开放阅读框为810 bp，编码269个氨基酸，预测其编码的蛋白质分子量为31.10kDa，理论等电点为5.59，为疏水性蛋白，包含一个APG5自噬相关蛋白结构域，无跨膜结构，不包含信号肽。同源性和系统进化分析显示，FcATG5具有高度保守性，与凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)同源性最高，达98.14%。组织表达分析显示，FcATG5在中国对虾各组织中均有表达，其中，肌肉中表达量最高(P<0.05)，血淋巴细胞中最低(P<0.05)，表明该基因的表达量越高，越有利于中国对虾存活。结果表明，FcATG5在pH、碳酸盐胁迫下的表达量均显著升高(P<0.05)，推测自噬可能参与中国对虾应对非生物胁迫的调控。本研究结果对水生动物特别是甲壳动物中细胞自噬研究具有重要的借鉴意义，有助于推进中国对虾盐碱水养殖的研究进程。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
李亚伦 何玉英 王琼 管晨惠 周玉洁 李朝霞
为探究急性盐碱胁迫下中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis) ABC转运蛋白(ATP-binding cassette transporter) G5基因的表达特征，本研究应用RACE克隆技术获得中国明对虾ABCG5基因，并将其命名为FcABCG5。该基因cDNA全长为2 718 bp，开放阅读框1 923 bp，共编码640个氨基酸，预测的蛋白分子量为71.39 kDa，理论等电点为9.12，预测基因位于内质网上，为疏水性蛋白，包含一个NBD和一个TMD结构域，不包含信号肽。同源性与系统进化分析结果显示，FcABCG5转运蛋白保守性强，与斑节对虾(Penaeus monodon) ABCG5蛋白同源性最高，达到98.91%。组织特异性分析结果显示，FcABCG5在各组织中均有表达，鳃中表达水平最高(P<0.05)，眼柄中最低(P<0.05)。盐碱胁迫下，FcABCG5在鳃组织中的表达量呈先升高后下降的趋势，胁迫6 h时达最高值(P<0.05)，比对照组高2.12倍，利用dsRNA干扰实验对该基因进行敲降，盐碱胁迫下，沉默FcABCG5基因会使对虾的死亡率高达60%，显著高于对照组40% (P<0.05)，说明该基因的表达量越高，对中国明对虾的存活越有利。本研究中受胁迫的中国明对虾FcABCG5表达量高，可能是由于鳃在直接接触盐碱水环境后，通过FcABCG5介导的物质转运启动渗透压调节，应对渗透压失衡。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
王旭江 么宗利 来琦芳 于明超 李新苍 高鹏程 周凯 崔青曼 刘一萌 孙真 李燕
凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)具有较强的环境适应能力，对盐碱水环境有一定的耐受性，但在高pH、高碱环境下的存活率不稳定。为探究凡纳滨对虾对长期高碱胁迫的响应机制，本研究以低碱对照组(LSW：碳酸盐碱度为3 mmol/L，盐度为6,pH为8.1)和高碱胁迫组(AW：碳酸盐碱度为10 mmol/L，盐度为6,pH为8.8)养殖42 d的凡纳滨对虾肠道和鳃组织作为实验材料，通过Illumina平台进行转录组测序，对测序数据进行拼接、注释，进而筛选、分析高碱胁迫下的差异表达基因及调控通路并进行定量PCR验证。结果显示，2个组织共同差异表达基因有243个，其中，98个表达上调，145个表达下调。肠道中差异表达基因主要集中在糖代谢、碳水化合物消化吸收、胆汁分泌、ABC跨膜转运、紧密连接以及免疫调节等途径。鳃中差异表达基因主要集中在谷胱甘肽代谢、碳酸氢盐转运、精氨酸合成、糖代谢以及离子转运等相关途径。进一步筛选获得10个最显著的差异表达基因，经qRT-PCR验证发现，凡纳滨对虾鳃中碳酸酐酶(CA1、CA10)、蜕皮激素诱导蛋白(Eip74EF)、β-半乳糖基转移酶(UGT8)基因在高碱胁迫下均表达下调，而Na~+/K~+ -ATPase-α(NKA-α)、Na~+/K~+ transporting ATPase interacting (NKAIN)、氨转运蛋白(Rhbg)、苹果酸脱氢酶(MDH)等基因表达上调，与转录组表达趋势一致，推测其可能参与了对虾高碱胁迫下的应激响应。凡纳滨对虾表现出较强的高碱适应性，可能是通过下调鳃中CA的表达，补偿体内碱中毒，上调Rh氨转运蛋白防止氨在体内积累，上调NKA相关基因维持体内渗透平衡；但蜕皮激素诱导蛋白(Eip74EF)显著下调，推测其蜕皮功能受到影响。本研究为深入探讨凡纳滨对虾在长期高碱胁迫条件下的生理响应机制提供了基础数据。
[期刊] 海洋渔业
[作者]
刘一萌 包锬 李航 么宗利 孙真 高鹏程 周凯 王菲 来琦芳
通过青海湖裸鲤(Gymnocypris przewalskii)转录组数据获得热激蛋白60基因(GpHsp60)的序列片段,利用RACE克隆完善GpHsp60的mRNA全序列,得到序列全长2 995 bp:包括开放阅读框1 728 bp, 5′UTR和3′UTR分别为137 bp和113 bp;编码氨基酸575个,分子量为61.34 kDa,理论等电点为5.38,具有线粒体Hsp60高度保守序列。通过实时荧光定量PCR检测发现,青海湖裸鲤幼鱼受碳酸盐碱度(29 mmol·L~(-1))胁迫后,GpHsp60基因在脑、鳃、肝、肾、心脏、肠、肌肉、脾脏和皮肤等组织都有所表达。与对照组相比,胁迫组青海湖裸鲤幼鱼鳃(1.99倍)、脑(1.95倍)、肝脏(3.52倍)、心脏(2.29倍)、肌肉(3.53倍)和肾脏(4.34倍)中GpHsp60基因都呈现高表达,说明以上组织细胞中的Hsp60可能被招募参与应答水环境碱度胁迫;而肠(0.257倍)和脾脏(0.251倍)组织中的Hsp60表达量却呈现下降,这可能与组织细胞线粒体功能效率降低有关;皮肤组织在受碱度胁迫后GpHsp60基因表达量无显著变化,表明青海湖裸鲤幼鱼皮肤组织未参与对碳酸盐碱度胁迫的应答。研究结果为揭示Hsp60基因在青海湖高碳酸盐碱度环境中生活的特有物种青海湖裸鲤在碱度胁迫下发挥的作用,为探讨和研究高碳酸盐碱度胁迫下水生生物体内分子响应机制研究提供了基础数据。
关键词：
青海湖裸鲤 热激蛋白60 碳酸盐碱度
[期刊] 淡水渔业
[作者]
杨富亿 李秀军 杨欣乔 孙丽敏
采用虾塘水添加天然盐碱水的方法,进行凡纳滨对虾(Litopenaeus vannam eiBoone)对东北地区碳酸盐类盐碱水环境的驯化适应试验。结果表明,驯化速度采用每隔12 h、24 h、48 h分别提高1次碱度1、2、4 mmol/L,经过14 d,从碱度为3.17 mmol/L的盐碱水环境,分别驯化至30.44、29.13及27.32 mmol/L的水环境,幼虾的存活率分别为41%、39%及34%。通过驯化适应,可提高幼虾对碳酸盐类盐碱水环境的适应能力及其存活率。
关键词：
凡纳滨对虾 碳酸盐类盐碱水 驯化
[期刊] 中国水产科学
[作者]
吴俊伟 赵金良 赵岩 罗明坤 王燕 赵永华
为了解尼罗罗非鱼（ＯｒｅＯｃｈｒＯｍｉｓ ｎｉｌＯｔｉｃｕｓ）在碱环境适应过程中氨代谢调节途径，本研究选取了５个氨代谢相关酶：谷氨酰胺合成酶（ｇｌｕｔａｍｉｎｅ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ，ｇｓ）、碳酸酐酶５ａ（ｃａｒｂＯｎｉｃ ａｎｈｙｄｒａｓｅ ５ａ，ｃａ－５ａ）、谷氨酰胺酶（ｇｌｕｔａｍｉｎａｓｅ ２，ｇｌｓ２）、氨甲酰磷酸合成酶（ｃａｒｂａｍｙｌ ｐｈＯｓｐｈａｔｅ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ １，ｃｐｓ１）、氨转运蛋白（ａｍｍＯｎｉｕｍ ｔｒａｎｓｐＯｒｔｅｒ ｒｈ ｔｙｐｅ ｃ－２ ｌｉｋｅ，ｒｈｃｇｌ２），研究了急性碳酸盐碱度胁迫条件下，尼罗罗非鱼血氨浓度变化、氨代谢相关酶基因表达水平及其酶．．．
[期刊] 中国水产科学
[作者]
房文红 王慧 来琦芳
实验结果表明 ,pH为 8.6、9.0、9.3和 9.5时 ,中国对虾 (Penaeuschinensis)幼虾 2 4h半致死碱度(LC50 )分别为 2 2 .0 0、11.66、6.57和 3.2 8mmol/L ;随着碱度、pH的升高 ,中国对虾幼虾的存活率下降。碱度和 pH对幼虾的致毒效应具综合作用 ,pH 8.6～ 9.0时 ,HCO3- 、CO32 - 共同影响幼虾的存活率 ;pH 9.0～9.5时 ,OH- 协同CO32 - 影响幼虾的成活 ;pH 9.5以上时 ,OH- 逐渐成为影响幼虾成活的主要因子
[期刊] 中国水产科学
[作者]
葛红星 李健 陈萍 葛倩倩 梁忠秀 李东利 王莹
为探讨亚硝酸盐氮胁迫对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)急性肝胰腺坏死综合征(Acute Hepatopancreatic Necrosis Syndrome,AHPNS)发生的影响,设置1个凡纳滨对虾对照组和4个不同亚硝酸盐氮质量浓度(2.0、4.0、6.0和10.0 mg/L)胁迫组,亚硝酸盐氮暴露20 d,于凡纳滨对虾后腹肌注射副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)进行感染。观察到在感染后9~24 h各实验组出现死亡高峰,濒死对虾表现出与AHPN相同的临床症状,48 h后,各实验组对虾不再出现死亡,对照组和各实验组对虾累计死亡率分别为0、4%、8...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
董丽君 孟宪红 孔杰 罗坤 栾生 史晓丽
凡纳滨对虾(Litopenaeusvannamei)是中国主要的对虾养殖品种之一,对低温的耐受性较差,低于18℃就会停止摄食。为了探究凡纳滨对虾耐低温性状相关基因,选用凡纳滨对虾低温胁迫组(18℃)和常温组(24℃)肝胰腺组织为实验材料,进行Illumina HiSeq 2500测序,对测序原始数据进行拼接、注释,以及筛选分析低温胁迫下的差异表达基因。结果显示,测序共获得50921条基因(unigene),平均长度为828 bp, N50为1589 bp,其中28.13%为已知基因。基因差异表达分析共筛选得到243个低温胁迫相关基因,其中89个上调表达, 154个下调表达。功能富集分析发现,差异表达基因多富集在生物结合和催化过程、过氧化物酶、溶酶体、精氨酸和脯氨酸的代谢以及氨基酸的生物合成途径中。进一步根据Q-值共筛选出10个差异表达最显著的基因,其中ATP结合盒B亚家族6转运蛋白基因(ATP-binding cassette sub-family B member 6, ABCB6)、C型凝集素基因(C type lectin)、谷氨酰胺合成酶基因(glutamine synthetase, GS)在低温胁迫下均呈下调表达,推测可能参与了凡纳滨对虾低温应答反应。利用Real time RT-PCR验证转录组数据,结果证明基于转录组测序筛选低温胁迫下的差异表达基因是可行的。本研究为揭示凡纳滨对虾耐低温分子调控机制提供了基础数据和理论依据。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
常玉梅 何强 孙言春 梁利群 孙效文
为了从不同层面解析达里湖瓦氏雅罗鱼（Ｌｅｕｃｉｓｃｕｓ ｗａＬｅｃｋｉｉ）耐高碱的生理机制，本研究对达里湖瓦氏雅罗鱼在２个时间段（２２ ｄ和６０ ｄ）和３个不同浓度碳酸盐碱度（１８ ｍｍｏＬ／Ｌ、３０ ｍｍｏＬ／Ｌ和５０ ｍｍｏＬ／Ｌ）胁迫下的１５种血浆游离氨基酸（ＰＦａａｓ）含量的变化趋势进行了分析。结果显示，血浆ＰＦａａｓ总量随着碱度的上升而显著增加，而且随着胁迫时间的延长，由必需氨基酸增量为主转向非必需氨基酸增量为主；作为能量代谢的主要底物，非必需氨基酸中的脯氨酸（Ｐｒｏ）和缬氨酸（ＶａＬ）含量随着碱度的增加而显著增加（Ｐ＜０．０５），尤其是Ｐｒｏ在碱度胁迫组中的含量增幅为对照组的２３倍．．．
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
何强 常玉梅 苏宝锋 孙博 孙效文 梁利群
采用封闭流水式呼吸室法，研究了不同浓度碳酸盐碱度（以下简称ＣＡ，１０、３０、５０、７０、９０、１１０ ｍｍｏｌ／ｌ）对体质量为（８４．６２±６．７０）ｇ的达里湖瓦氏雅罗鱼耗氧率、氨氮排泄率、血氨含量及排氨基因Ｒｈ家族（ＲｈＡｇ、Ｒｈｂｇ、ＲｈＣｇ１和ＲｈＣｇ２）在鳃组织中表达量的影响。结果表明，随着碱度的升高，瓦氏雅罗鱼的耗氧率和排氨率均表现为先下降后上升的趋势，且都显著低于对照组（Ｐ＜０．０５）。在ＣＡ９０时，耗氧率和排氨率均达到最低值，表明ＣＡ９０可能是达里湖瓦氏雅罗鱼所能承受的最大碱度胁迫。相反，随着碱度的升高，瓦氏雅罗鱼的血氨含量呈现先上升后下降的趋势，在ＣＡ９０时达到峰值。然而在ＣＡ．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
汤上上 韩凤禄 周利 刘世誉 徐畅 陈立侨 李二超
为研究低盐胁迫(盐度3)下,饲料添加不同含量的甘露寡糖(mannan oligosaccharide, MOS)对凡纳滨对虾生长性能、抗氧化能力、免疫力和肠道微生物的影响。低盐条件下,给实验组对虾(0.68±0.01)g分别饲喂含有2、4和8 g/kg MOS的实验饲料,并将在盐度25和3条件下饲喂0 g/kg MOS饲料的对虾作为海水对照组和低盐对照组,养殖周期42 d。结果显示:(1)相比于低盐对照组,海水对照组、4和8 g/kg MOS组对虾生长性能显著升高。(2)与海水对照组相比,低盐条件下各处理组对虾肝胰腺总超氧化物歧化酶、谷胱甘肽硫基转移酶活力显著降低(P
[期刊] 中国水产科学
[作者]
梁从飞 赵金良 甘远迪 王飞 Thammaratsuntorn Jeerawat 伍勇 李传阳 罗明坤
为了探讨盐碱胁迫条件下鱼类渗透生理调节机制，以尼罗罗非鱼（ＯｒｅＯｃｈｒＯｍｉｓ ｎｉｌＯｔｉｃｕｓ）为实验材料，Ｐｃｒ扩增得到了ｎａ～（＋）／３ｈｃＯ～（－）共转运子（ｎＢｃｅ１）基因ｃ Ｄｎａ部分序列，比较了单盐（盐度１０、盐度１５）、单碱（１．５ ｇ／ｌ、３ ｇ／ｌ ｎａ ｈｃＯ３）、盐碱混合（盐度１０，碱度１．５ ｇ／ｌ；盐度１５，碱度３ ｇ／ｌ）胁迫后不同时间（０ ｈ、６ ｈ、１２ ｈ、２４ ｈ、４８ ｈ、７２ ｈ、９６ ｈ）血清渗透压、离子浓度（ｎａ～（＋）、Ｋ～（＋）、ｃｌ–、ｃａ２～（＋））以及鳃碳酸酐酶（ｃａ）活性、ｃａ与ｎＢｃｅ１基因ｍ ｒｎａ表达变化。结果显示，不同胁迫条．．．
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
葛红星 李健 陈萍 梁忠秀 任海 李东利
为探讨养殖水体中总氨氮胁迫对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)"急性肝胰腺坏死综合征(Acute Hepatopancreatic Necrosis Syndrome,AHPNS)"发生的影响,设置了1个对照组和4个不同质量浓度氨氮实验组:2.5、5.0、7.5、10.0 mg/L实验组,胁迫20 d后腹肌注射副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)进行感染。凡纳滨对虾感染后6–24 h,除对照组外,各实验组均出现死亡高峰。24 h后,5.0、7.5和10 mg/L实验组对虾累积死亡率均高于2.5 mg/L组,且在同一取样时间各实验组对虾累积死亡率随着氨...
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