将克氏原螯虾(Procambarus clarkii)成虾在Zn2+质量浓度为0、0.40 mg/L、4.04 mg/L和40.37 mg/L的硫酸锌溶液中浸浴21 d,分别于第7、14和21天时每组随机抽取5只虾,采集肝胰腺、鳃、触角腺、性腺、肌肉及消化道组织,于Bouin′s液中固定24 h。采用石蜡切片和HE染色的方法,观察其组织的病理变化,从组织学水平研究硫酸锌对克氏原螯虾的慢性毒性作用。结果显示,浸浴时各Zn2+浓度组肝胰腺、触角腺细胞质中出现被染成红棕色的颗粒,且颗粒的数量与浸浴浓度及时间成正相关。0.40 mg/L组在浸浴期间各组织均未出现其他明显病变;4.04mg/L组及40....

调查克氏原螯虾（Ｐｒｏｃａｍｂａｒｕｓ ｃｌａｒｋｉｉ）容易感染的固着类纤毛虫种类，并挑选寄生虫种类较单一的寄生部位分割成若干小块，分别放入不同浓度硫酸锌溶液，观察硫酸锌对固着类纤毛虫的药效。结果显示：容易感染克氏原螯虾的种类主要有钟虫、聚缩虫、累枝虫及莲蓬虫。硫酸锌对这几种虫体的２４ ｈ和４８ ｈ的ｌｃ＿（５０）分别为５．６３和２．１８ ｍｇ／ｌ、５．０１和２．４４ ｍｇ／ｌ、６．２８和２．９３ ｍｇ／ｌ、３．２３和１．７２ ｍｇ／ｌ，对硫酸锌敏感度莲蓬虫＞钟虫＞聚缩虫＞累枝虫。结果表明硫酸锌对克氏原螯虾常见固着类纤毛虫病有效。

研究了高ｐＨ胁迫对克氏原螯虾鳃、肝胰腺中酶活性的变化，以及对鳃、肝胰腺组织结构的影响。在得出９６ Ｈ Ｌ Ｃ＿（５０）的基础上，设置对照（ｐＨ７．６）和实验（ｐＨ１０．２）２个ｐＨ处理组，进行９６ Ｈ高ｐＨ胁迫，于胁迫后０、２、８、２４和９６ Ｈ测定鳃Ｎａ～＋－Ｋ～＋－ａＴｐ酶、乳酸脱氢酶（ＬａＣＴａＴｅ ｄｅＨｙｄｒｏｇｅＮａｓｅ，ＬｄＨ）、延胡索酸还原酶（ｆｕｍａｒａＴｅ ｒｅｄｕＣＴａｓｅ，ｆｒｄ）、肝胰腺超氧化物歧化酶（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕＴａｓｅ，ｓｏｄ）、过氧化氢酶（ＣａＴａＬａｓｅ，ＣａＴ）的活性以及丙二醛（ｍａＬｏＮｄｉａＬｄｅＨｙｄｅ，ｍｄａ）的含量，并采集完整的．．．

【目的】研究硫酸锌对酵母细胞的毒性作用,为揭示高浓度锌的毒性作用机理提供依据。【方法】以模式生物酵母细胞为材料,在YPD培养基中添加终浓度为0,0.5,1,3,5和10 mmol/L的硫酸锌进行毒性试验。缓解组为抗氧化剂AsA、NO清除剂c-PTIO和Ca~(2+)螯合剂EGTA分别与0.5或5 mmol/L硫酸锌同时作用。培养一定时间后,采用分光光度法、美蓝染色法和流式细胞术,研究硫酸锌对酵母细胞生长、细胞死亡率及胞内ROS、NO和Ca~(2+)水平的影响。【结果】低浓度硫酸锌(0.5 mmol/L)促进酵母细胞生长,而高浓度硫酸锌(1～10 mmol/L)抑制酵母细胞生长,诱导细胞死亡,且细胞死亡率随着硫酸锌浓度升高和胁迫时间延长而逐渐升高。酵母细胞经5 mmol/L硫酸锌胁迫12或24 h后,胞内ROS、NO和Ca~(2+)水平均显著高于对照组;但加入对应抗氧化剂AsA、NO清除剂c-PTIO和Ca~(2+)螯合剂EGTA后,酵母细胞死亡率均显著低于硫酸锌单独处理组。【结论】高浓度硫酸锌可诱导酵母细胞死亡,在此过程中ROS、NO和Ca~(2+)水平显著提高,从而造成毒性。

采用急性毒性实验方法测试了硫酸锌对中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)仔蟹、克氏原螯虾(Procambarus clar-kii)幼虾、异育银鲫(Carassius auratus gibelio♀×Cyprinus carpiovar.singuonensis♂)幼鱼及田螺(CipangopaludinachinensisGray)4种常见淡水经济养殖动物的半致死浓度(LC50)及安全浓度。结果显示:中华绒螯蟹仔蟹24、48、72、96 h LC50(Zn2+)分别为18.39、11.10、7.63、5.84 mg/L;克氏原螯虾幼虾分别为84.48、16.50、4.78、2....

采用石蜡切片技术，结合生物酶的测定，以体重（２５．８８±４．４０）ｇ的克氏原螯虾（Ｐｒｏｃａｍｂａｒｕｓ ｃｌａｒｋｉｉ）为研究对象，研究了低ＰＨ胁迫对克氏原螯虾鳃和肝胰腺生理代谢与组织结构的影响。在得出９６ Ｈ ｌｃ５０的基础上，将克氏原螯虾暴露于半致死浓度ＰＨ水体中９６ Ｈ，以ＰＨ７．６作为对照，并于胁迫后０ Ｈ、２ Ｈ、８ Ｈ、２４ Ｈ、９６ Ｈ采集鳃和肝胰腺样品，测定鳃部分代谢酶和肝胰腺主要抗氧化指标，并对鳃和肝胰腺组织进行切片观察。实验结果表明，ＰＨ ９６ Ｈ ｌｃ５０为３．６７５。低ＰＨ暴露后，实验组鳃Ｎａ～＋－ｋ～＋－ａＴＰ酶和乳酸脱氢酶（ｌａｃＴａＴｅ ｄｅＨｙｄｒｏｇｅＮａｓ．．．

为研究溴氰菊酯对克氏原螯虾的毒性效应及致毒机制,实验将克氏原螯虾成虾暴露于农药溴氰菊酯0.5、0.1和0.005μg/L等3个浓度的药液中24 h后,采用透射电镜观察克氏原螯虾肌肉组织超微结构损伤情况,并以细胞色素氧化酶活力(CCO)、乳酸脱氢酶活力(LDH)和乳酸(LD)含量为生物标志物评价溴氰菊酯对克氏原螯虾肌细胞呼吸产能功能的影响。结果显示,3个浓度的溴氰菊酯都会造成肌细胞超微结构不同程度的损伤,且浓度越大损伤越严重,损伤主要表现为肌原纤维断裂、肌浆网溶解,线粒体溶解。此外,3个浓度的溴氰菊酯都会对CCO活力、LDH活力和LD含量产生影响。其中0.1μg/L的溴氰菊酯在6~24 h的暴露...

为了解溴氰菊酯对克氏原螯虾的毒性及致毒机理,采用24h换水式生物试验研究了溴氰菊酯对克氏原螯虾的96h急性毒性,分光光度法检测了6、12、24和48h后0.01、0.02和0.04μg/L溴氰菊酯对肝胰腺超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力和丙二醛(MDA)的含量等氧化胁迫相关指标的影响。结果表明,24、48和96h的半致死浓度分别为0.1560、0.0993和0.0562μg/L,安全浓度为5.62ng/L;在整个暴露过程中,溴氰菊酯各个处理组都引起了氧化胁迫相关指标的变化。SOD和CAT活力的变化趋势相同,都呈抑制-诱导-抑制的变化规律,MDA含量则一直高于对照组。暴露6h后...

为探讨高pH急性和慢性胁迫对克氏原螯虾(Procambarus clarkii)非特异性免疫和抗氧化能力的影响,分别设置对照(pH 7.6)和试验(pH 10.2)2个pH处理组,对克氏原螯虾进行急性(0 h、3 h、6 h、12 h、24 h、5 d)和慢性(10 d、15 d)pH胁迫试验。结果显示:高pH应激后,试验组血浆总蛋白(TP)含量和酸性磷酸酶(ACP)活性呈上升趋势。高pH急性胁迫下,24 h内试验组血浆碱性磷酸酶(AKP)呈先上升后下降趋势,5 d AKP活性显著上升;试验组血浆血糖(GLU)及皮质醇(CORTISOL)含量于pH胁迫5 d后达到峰值,且显著高于对照组;试验组肝胰腺超氧化物歧化酶(SOD)活性呈下降趋势,并于24 h开始显著低于对照组;试验组肝胰腺谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性在3～24 h显著低于对照组;试验组鳃乳酸脱氢酶(LDH)活性先下降后上升。高pH慢性胁迫下,试验组血浆AKP、ACP活性显著高于对照组;试验组血浆GLU及CORTISOL含量、鳃LDH活性呈下降趋势,肝胰腺SOD则呈上升趋势;肝胰腺GSH-Px、MDA水平于胁迫10 d时达到峰值。结果表明,高pH急性胁迫会对克氏原螯虾的免疫防御机制产生影响,导致氧化应激,随着胁迫时间的延长(慢性胁迫),机体部分非特异免疫和抗氧化指标逐步恢复。

为了解自噬相关基因Atg2在克氏原螯虾(Procambarus clarkia)先天免疫中的作用，本研究克隆了克氏原螯虾Atg2 (PcAtg2)基因全长序列。生物信息学分析显示，PcAtg2蛋白编码序列全长为9966 bp，推测其编码2189个氨基酸。组织定量表达分布显示，PcAtg2在克氏原螯虾的各个组织中均有表达，其中在肝胰腺中表达最高，在眼柄中表达最低。在白斑综合征病毒(WSSV)感染实验中，PcAtg2基因表达量在不同组织中均呈现显著上调趋势。RNA干扰(RNAi)实验显示，PcAtg2基因沉默后，WSSV在克氏原螯虾体内的增殖明显被抑制，同时自噬相关基因的表达量上调。透射电镜分析结果显示，在WSSV感染后，PcAtg2基因沉默组中克氏原螯虾肝胰腺组织中的自噬小体多于对照组。本研究结果可为了解克氏原螯虾应对WSSV胁迫下的调控机制提供理论参考。

虾青蛋白(Crustacyanin， CRCN)在甲壳动物脂类代谢及低氧胁迫应激调控等方面具有重要的功能。为获取虾青蛋白在克氏原螯虾(Procambarus clarkii)性腺发育和低氧胁迫应答中的作用，本研究在克氏原螯虾肝胰腺组织中鉴定出1个类虾青蛋白PcCRCN-L基因的cDNA序列，分析了PcCRCN-L基因的结构特征和进化模式，研究了PcCRCN-L基因在不同组织与性腺不同发育时期的表达特征，探讨了PcCRCN-L在低氧–复氧胁迫下的表达响应模式。结果显示，PcCRCN-L基因cDNA序列长2 700 bp，其开放阅读框(ORF)长度为1 587 bp，编码528个氨基酸残基；DNA序列长6 130 bp，位于克氏原螯虾基因组的第12号染色体，包含5个外显子和4个内含子，内含子/外显子剪接方式符合GT-AG规则。PcCRCN-L具有1个完整的lipocalin结构域，包含典型的序列保守区Ⅰ(SCR1)序列G-X-W、保守区Ⅱ(SCR2)序列T-D-Y和保守区Ⅲ(SCR3)序列精氨酸R。多序列比对与系统进化分析结果显示，PcCRCN-L独立于传统虾青蛋白A和C亚族，单独聚为一支。PcCRCN-L在克氏原螯虾多个组织中均有表达，在肝胰腺中表达量最高；在性腺不同发育时期，肝胰腺以及卵巢组织中的PcCRCN-L基因表达量显著降低；低氧胁迫下，肝胰腺组织中PcCRCN-L表达量显著降低，复氧后显著升高。研究结果表明，PcCRCN-L与克氏原螯虾性腺发育密切相关，并参与了克氏原螯虾的低氧–复氧胁迫应激调控。

为了解海洋菲污染对海洋水产经济鱼类的毒性及致毒机理,在实验室条件下采用半静态毒性实验研究了菲对红鳍笛鲷的96 h急性毒性,同时分析和比较了不同浓度(10.0、50.0、250.0μg/L)菲胁迫96 h后红鳍笛鲷肝脏、鳃中超氧化物歧化酶(SOD)活力,丙二醛(MDA)含量以及脑组织中乙酰胆碱脂酶(AChE)活力的变化。结果表明,菲对红鳍笛鲷幼鱼的24、48和96 h半致死浓度(LC50)分别为4.65、3.46和3.17 mg/L,安全浓度为0.317 mg/L。在整个胁迫过程中,低浓度(10.0μg/L)菲可诱导红鳍笛鲷肝脏和鳃组织SOD活力显著性升高(P<0.05);随着浓度升高,50.0...

【目的】研究克氏原螯虾在晒田环境胁迫条件下卵巢组织学特点、卵黄蛋白原浓度及营养物质代谢水平的变化，探索其性成熟过程中体内营养物质变化相关机制，为晒田环境胁迫促进克氏原螯虾卵巢成熟这一生产操作的改良和标准化提供参考依据。【方法】试验对象分为晒田组与对照组克氏原螯虾，在晒田胁迫0、3、7、10 d时分别采集30只雌性克氏原螯虾，取卵巢进行石蜡切片和HE染色，并采集试验组的卵巢、肝胰腺和血清，检测卵黄蛋白原mRNA表达水平和浓度及营养物质代谢水平。【结果】雌性克氏原螯虾在晒田胁迫期间共鉴定出4个卵巢发育阶段，包括卵黄发生前阶段(I期，卵巢为黄色，卵母细胞直径150～250 μm)、初级卵黄发生阶段(II期，卵巢为橙色，卵母细胞直径250～600 μm)、次级卵黄发生阶段(III期，卵巢为棕色，卵母细胞直径高于600 μm)、成熟阶段(IV期，卵巢为黑褐色，卵母细胞直径高于1000 μm)。晒田胁迫0 d时，晒田组与对照组雌性克氏原螯虾卵巢成熟率相似；晒田胁迫10 d时，晒田组雌性克氏原螯虾卵巢成熟率升至96.67%，而对照组仅升至60.00%。随着胁迫时间增加，晒田组和对照组雌性克氏原螯虾的卵巢与肝胰腺的卵黄蛋白原mRNA相对表达量均呈上升趋势，且卵黄蛋白原mRNA在肝胰腺的相对表达量大于卵巢；试验期间，晒田组和对照组雌性克氏原螯虾卵黄蛋白原在肝胰腺的表达总量均大于在卵巢的表达总量，且卵黄蛋白原在肝胰腺的贡献率均大于在卵巢的贡献率。晒田组与对照组雌性克氏原螯虾卵巢、肝胰腺和血液中的卵黄蛋白原浓度均随时间增加呈现上升趋势；晒田组浓度上升幅度大于对照组，肝胰腺卵黄蛋白原浓度与卵巢卵黄蛋白原浓度、肝胰腺卵黄蛋白原浓度与血清卵黄蛋白原浓度、卵巢卵黄蛋白原浓度与血清卵黄蛋白原浓度呈极显著正相关（P<0.01）。随着晒田胁迫时间增加，晒田组和对照组雌性克氏原螯虾血蓝蛋白（Hem）、总蛋白（TP）、乳酸（LA）和葡萄糖（Glu）含量均呈现下降趋势，晒田组的下降幅度大于对照组；晒田组和对照组雌性克氏原螯虾甘油三酯（TG）和胆固醇（TC）含量呈现上升趋势，晒田组的上升幅度大于对照组。【结论】晒田环境胁迫期间共鉴定出4个克氏原螯虾卵巢发育阶段。随胁迫时间增加，克氏原螯虾不同组织卵黄蛋白原mRNA相对表达量和浓度均呈上升趋势，卵黄蛋白原的肝胰腺贡献率大于卵巢贡献率。克氏原螯虾体内Hem、TP、LA和Glu含量降低，TG和TC含量升高，表明晒田环境胁迫对卵巢发育具有积极作用。

采用投喂感染白斑综合征病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)对虾肌肉的方式,对养殖克氏原螯虾(Procambarus clarkii)进行人工感染,以确定WSSV对养殖克氏原螯虾的易感性。结果发现,投喂病虾感染组螯虾的死亡率达到90%,而对照组未出现死亡。采用PCR对试验组螯虾的肌肉进行WSSV检测,发现投喂感染组的阳性检出率为100%,对照组的阳性检出率均为0。PCR检测结果发现,濒死螯虾的肝胰腺、中肠、肌肉、鳃、性腺、心脏六种组织的PCR结果均为WSSV阳性,而对照组的各组织检测结果均为阴性。组织切片的光镜观察也证实,濒死螯虾的肝胰腺、中肠、肌肉、鳃、性腺、心...