【目的】AbrB是枯草芽孢杆菌中重要的过渡态调节因子，在细菌从对数生长到稳定期的转换阶段发挥作用，但其功能在短小芽孢杆菌中知之甚少，进一步探究其究竟发挥何种调控作用。【方法】为了解AbrB在短小芽孢杆菌中所参与的生物学功能，利用具有反向选择标记的温度敏感型质粒载体在短小芽孢杆菌SCU12中对abrB基因进行无痕敲除，获得菌株SCU12(ΔabrB)。为研究敲除菌表型变化，对细菌生长曲线和胞外蛋白酶活性进行测量，观察菌落形态和生物膜形成并利用swarming平板检测其运动性。【结果】获得一株abrB敲除菌株SCU12(ΔabrB)。生长曲线结果显示，与亲本菌株相比，abrB敲除菌株的最高OD_(600nm)值降低24%，生长受到抑制；肉眼观察菌落形态发现菌落颜色和形态发生改变；运动性实验表明敲除菌株运动性降低；18 h以内敲除菌株生物膜形成时间提前；胞外蛋白酶活性显著增加，是亲本菌株的1.59倍。【结论】本研究结果表明，abrB基因在短小芽孢杆菌中具有广泛的调节作用。

采用平皿计数法和抑菌圈法研究了24种农药助剂对稻瘟病生防菌短短小芽孢杆菌TW-2菌株菌体和芽孢存活的影响。结果表明,供试的24种农药助剂中有11种农药助剂(D425、D450、D500、EFW、500、505、507、AEO-5、AEO-9、NP-10、OP-10)在供试浓度范围内(12.5～100 g.L-1)可以完全杀灭短短小芽孢杆菌TW-2菌株的菌体和芽孢,其它助剂随着浓度的提高,对菌体和芽孢存活的抑制作用也越大。在24种农药助剂中,U-3A和By-110对菌体和芽孢的存活影响最小,可用于短短小芽孢杆菌TW-2菌株固体制剂和液体制剂加工中的湿润展布剂。

从健康养殖大黄鱼肠道中筛选出对病原弧菌有拮抗作用的潜在益生菌株X93,利用细菌快速鉴定系统和16S rDNA方法进行细菌种类鉴定;通过点种法对其抗菌谱进行测定;采用平板扩散法,研究了培养时间、温度、盐度、蛋白酶K和Fe3+等因素对其胞外产物抑菌活性的影响。结果显示:该菌株为短小芽孢杆菌(GenBank accession No.HM137033);对20株病原指示菌中的13株均产生不同程度的抑制作用,抗菌谱较广;菌株培养48 h后的胞外产物抑菌作用最强;在pH为7时,抑菌活性最大;达到最大抑菌活性的温度和盐度分别为28℃、5;蛋白酶K和不同浓度的FeCl3均会降低其抑菌活性。该菌对病原弧菌、迟...

为研究松材线虫拮抗细菌短小芽孢杆菌ＬＹＭＣ－３的内生性及其在马尾松体内的定殖规律，采用扫描电子显微镜（ＳＥＭ）观察菌株在马尾松组培苗体内的定殖，并采用高渗透法将质粒ｐＧＦｐ７８转入菌株ＬＹＭＣ－３，对其进行绿色荧光蛋白（ＧＦｐ）标记，同时测定标记菌株的遗传稳定性。在此基础上，以ＧＦｐ标记和抗性标记作为示踪手段，将标记菌株接种到２年生马尾松盆栽实生苗的根部，借助激光扫描共聚焦显微镜（ＬＳＣＭ）和稀释涂板的方法，对马尾松根部、茎部的标记菌株进行定期回收检测。结果显示，通过ＳＥＭ成功观察到菌株ＬＹＭＣ－３在马尾松体内的定殖，并成功获得ＬＹＭＣ－３菌株荧光表达强烈且遗传稳定的转化子，经过连续８次的稀释．．．

【目的】研究GFP标记的短小芽孢杆菌在水稻植株上的定殖规律,为其生物防治应用提供科学依据。【方法】从短小芽孢杆菌GFP标记的转座突变株库中筛选强表达GFP且遗传稳定的突变株,用作水稻植株的定殖示踪。【结果】采用荧光酶标仪、流式细胞术检测及荧光显微镜观察等手段,对1 467株Tn5-egfp随机插入突变株的GFP表达作了定量和定性分析,最终获得8株荧光表达较强的突变株,并对突变株作了T-DNA插入拷贝数鉴定。在开放和封闭系统中,标记菌在水稻幼苗根际土壤中均可以存活15 d以上,且前者标记菌的数量下降相对更慢。【结论】短小芽孢杆菌在根毛区及侧根分生处的数量最多,并在根表面形成菌膜。该菌可通过水稻幼...

采用盆栽试验法研究了短小芽孢杆菌EN16对番茄青枯病的诱导抗病效应.结果表明,菌株EN16诱导番茄产生对青枯病的防病效果达到49.45%-68.89%;分别在挑战接种间隔期为7-10 d、菌株灌根接种2种处理条件下,菌株EN16表现出较好的诱导抗病效果.测定EN16处理对番茄叶片中几种防御酶的影响,结果显示,在病菌挑战接种前后菌株EN16处理均能引起过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)等防御酶活性的显著增强.

【目的】对分离自烟草根际土壤中的一株短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)AR03菌株产生的挥发性有机物进行抑菌活性测定和组分分析。【方法】采用培养皿对扣熏蒸法和凹玻片孢子萌发法测定挥发性有机物对烟草黑胫病菌(Phytophthora parasitica var.nicotianae)和赤星病菌(Alternaria alternata)菌落、菌丝生长以及孢子萌发的影响,采用离体叶片接种法测定挥发性有机物对烟草黑胫病和赤星病的防治效果;采用顶空加热法收集抑菌挥发性有机物,对其进行气相色谱-质谱(GC-MS)检测,并结合保留指数(retention index,RI)和内标(internal standard,IS)1-十五烯对其组分进行定性和定量分析。【结果】短小芽孢杆菌AR03菌株分泌的挥发性有机物对供试的两种病原真菌均具有一定的抑制作用,表现为经处理后的烟草黑胫病菌菌丝生长稀疏缓慢变粗、分支增多且扭曲、断裂;赤星病菌菌丝生长畸形,其上不产生分生孢子梗,内含物大部分聚集成团导致菌丝干瘪、缢缩。对峙培养2、4、6和8 d时,挥发物对黑胫病菌和赤星病菌菌丝生长的抑制率分别为56.21%和59.23%、64.75%和59.86%、66.13%和61.10%、67.04%和70.00%;对黑胫病菌游动孢子和赤星病菌分生孢子的抑制作用表现为延迟萌发且萌发后的芽管生长缓慢;黑胫病菌产生孢子囊数明显减少,赤星病菌分生孢子各分隔处的细胞畸形肿胀成泡状。离体叶片抗病测定结果显示,挥发性有机物抑制黑胫病菌和赤星病菌病斑在叶片的扩展,对峙熏蒸40 h时,对照叶片黑胫病的发病率为92.50%,圆形坏死病斑直径是25.10 mm,经挥发物处理后叶片发病率为70.83%,病斑直径为9.45 mm,对黑胫病斑扩散的抑制率为62.35%;对峙熏蒸80 h时,对照叶片赤星病的发病率为88.33%,病斑扩散为近圆形的褐色坏死斑,平均直径为8.32 mm,经挥发物处理后赤星病的发病率为60.80%,病斑扩展较慢,平均直径为2.85 mm,挥发物对赤星病斑扩散的抑制率为65.75%。SPME GC-MS分析表明,AR03菌株胞外分泌7种组分挥发性物质,均为C15H24结构的倍半萜烯类化合物,分别是二氢姜黄烯、(E)-β-金合欢烯、γ-姜黄烯、α-姜烯、π-红没药烯、β-倍半萜水芹烯和γ-E-红没药烯;AR03培养1 d后,其中β-倍半萜水芹烯相对含量最高,为80.64%,其次为(E)-β-金合欢烯和α-姜烯,相对含量分别为7.20%和6.67%;随着AR03培养时间的延长,各组分种类相同,但相对含量差异较大,除二氢姜黄烯含量保持基本不变外,其他组分含量呈递减趋势,培养至第6天时,各组分含量下降超过50%。【结论】短小芽孢杆菌AR03菌株能够产生具有较强抑菌活性的挥发性有机物,有潜力作为开发抗真菌代谢物和新药物的重要微生物资源。

侧孢短芽孢杆菌G4菌株在侵染线虫的过程中可以分泌蛋白酶,降解线虫体壁,从而帮助细菌侵入宿主体内.在本文中,侧孢短芽孢杆菌的胞外蛋白酶BLG4基因经克隆后插入到改造后的枯草芽孢杆菌表达载体pWT22中,构建重组表达质粒pWT22-BLG4.构建成功的重组质粒通过化学转化法转入枯草芽孢杆菌蛋白酶缺失菌株WB600中,转化子pWT22-BLG4/WB600在IPTG(1.0 mmol.L-1)的诱导下,发酵液上清中的蛋白酶活可达到620 U.mL-1,高于出发菌株G4的BLG4酶活(240 U.mL-1).经SDS-PAGE分析,重组子pWT22-BLG4/WB600产生了一条分子质量约为30 ku...

河流输送大量的陆源有机物、无机物和微生物到海洋，沉积到近海海盆。随着陆源和海源沉积物在盆地的逐渐堆积，这些陆源微生物被埋藏，进而逐渐演变为沉积物中固有微生物群体的一部分，是研究微生物环境适应与进化的理想生态系统。本课题组从国际大洋钻探计划(IODP) 337航次的一个西太平洋煤层岩芯(1，999 mbsf， meter below the seafloor)中，成功分离到一株革兰氏阳性细菌泛酸枝芽孢杆菌19R1-5(19R)。研究发现，19R与分离自陆源土壤的泛酸枝芽孢杆菌DSM 26(26~(T))相比，16S rRNA基因序列相似性为100%，DNA杂交同源性高达91.7%。我们将19R和26~(T)作为研究对象，从比较基因组的角度对19R的来源和代谢潜能进行研究。结果表明，分离自海底深部的19R来源于陆地；同时，19R较26~(T)拥有3个额外的磷酸葡萄糖转移酶系统(PTS)，提示19R具有更强的糖利用能力，使之能够适应原位中特殊的营养环境，研究结果对探索海底深部生物圈微生物的来源及其在深海物质循环中的作用具有重要意义。

根据GenBank中cry2Ad基因序列设计1对特异性引物,以苏云金芽孢杆菌新菌株S249质粒 DNA为模板,应用PCR扩增技术得到了1条大小约为2．0 kb的DNA片段(cry2Ad2)。通过引物步行法测定该片段长1919 bp,其中开放阅读框(ORF)长1902 bp,编码633个氨基酸;经DNASTAR软件分析,预测其蛋白分子量为70．72 ku,等电点pI=8．26。序列比较结果表明,该基因与cry2Ad类基因高度同源(同源性达99%)。该基因已在GenBank中登录,登录号为DQ219823,并被Bt δ-内毒素基因国际命名委员会正式命名为cry2Ad2。

通过改变水体的盐度、温度、pH值等环境因子的药物敏感试验 ,观察环境因子的改变及不同抗生素对枯草芽孢杆菌生长的影响。结果表明 ,枯草芽孢杆菌的活性受环境因子及抗生素的影响较大 ,酸性环境、低温及多种常用抗生素对芽孢杆菌有明显的抑制作用 ,其最适生长环境是 :pH 7 5～ 8 5 ,温度 6～30℃ ,而盐度对枯草芽孢杆菌的生长影响较小。

[目的]本试验旨在研究一株牦牛源短小芽孢杆菌(命名：TS1)的分离鉴定、抗逆性、对常用抗菌药物的耐药性以及对常见致病菌的抑菌活性，初步探索其作为益生菌添加剂在畜牧养殖中应用的可行性。[方法]对健康牦牛新鲜粪便进行100℃水浴处理10 min以筛选具有抗逆性的芽胞杆菌，进行形态学、生理生化特征及16S rRNA序列分析鉴定，通过测量生长曲线、耐酸、耐胆盐试验、药敏试验及抑菌试验等方法对其生物学特性进行研究，通过全基因测序分析其可能产生抗菌物质的类型。[结果]TS1为短小芽胞杆菌且具有耐酸、耐胆盐生长特性；TS1对于12种常见的抗菌药物敏感，且对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、猪链球菌具有抑菌作用。测序分析显示该菌株可编码与Amylocyclicin同源性达48.90%的一种新型抗菌肽，进而发挥其抗菌活性。[结论]短小芽胞杆菌TS1有一定的抗逆性和潜在的益生能力及广谱抗菌效果，并且在畜禽肠道微生物系统中对抗生素耐药性传递的风险较低，适合作为益生菌添加剂类抗生素替代产品。

从烟草根际土壤中分离到1株生防细菌侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)B8,为了将B8应用于植物病害生物防治,对菌株B8产生的抑菌物质粗提物理化性质进行研究,并采用薄层层析、Pharmadex LH-20柱层析和高效液相色谱对抑菌物质进行分离纯化。试验结果表明:侧孢短芽孢杆菌B8抑菌物质粗提物具有较好的热稳定性,可耐受100℃的高温;其p H值适应范围较宽,在p H值4~10时都有较好的活性,在中性条件下活性最强;对紫外光和日光灯照射不敏感,可长时间保存;侧孢短芽孢杆菌B8产生的抑菌物质为蛋白类,经SDS-PAGE电泳确定蛋白分子量约为11.2k Da;质谱分...

海洋微生物溶菌酶发酵液经低温离心、超滤浓缩、乙醇提取、Superdex 75 10/300凝胶层析和反相高效液相色谱层析纯化得到电泳纯海洋溶菌酶,分子量为17.1 kD,比活达到3 987.7 U/mg,纯度提高41.98倍,活力回收率为21.7%。对该酶冷冻干燥过程的研究结果表明,海藻糖、蔗糖和麦芽糖对该酶均有一定的冻干保护作用。其中,以海藻糖的保护效果最佳。0.5 mol/L海藻糖与20 mg/ml吐温80复合作为冻干保护剂,使冻干后的溶菌酶活性维持在95%以上,为该酶进一步研究和应用提供了稳定的酶制剂。

为探明利用甘薯淀粉生产废水培养侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)的最适条件,采用单因素试验,研究了甘薯淀粉废水浓度、初始p H值、培养温度对侧孢短芽孢杆菌菌体生长的影响。结果表明:甘薯淀粉废水浓度40%,初始p H值为7.0~8.0,培养温度为30~35°C,以2%比例接种侧孢短芽孢杆菌种子液,150r·min-1培养24h时,菌体浓度最高可达1.63×109cfu·m L-1。在此基础上,应用Placket-Burman设计,对微生物培养基中常用的8种无机盐离子(KH2PO4,Mg SO4,Ca Cl2,Na Cl,Fe SO4,Cu SO4,Mn SO4...