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[期刊] 中国农业科学
[作者]
苑克俊 程来亮 牛庆霖 王江勇
【目的】苹果着色是一个重要的质量性状，构建苹果磷酸化蛋白质组并进行鉴定与分析，了解在苹果着色过程中的蛋白质磷酸化，为进一步阐明苹果着色机理提供参考。【方法】以着色‘嘎拉’和非着色‘金冠’两个品种苹果果皮为试材提取总蛋白，用Ｔｉ Ｏ２富集磷酸化肽段，对富集到的磷酸化肽段进行高效液相色谱分离，利用质谱鉴定磷酸化肽段，采用ＭａｓｃＯＴ２．２和ＰｒＯＴｅＯＭｅ ＤｉｓｃＯｖｅｒｅｒ１．４（ＴｈｅｒＭＯ）软件进行蛋白质查库鉴定，使用的数据库为ＵｎｉＰｒＯＴ＿ＭａｌＯｉＤｅａｅ．ｆａｓＴａ。对鉴定到的磷酸化肽段和蛋白质进行分析，找出着色与非着色苹果品种中有差异的磷酸化蛋白质及其修饰位点。【结果】在着色苹果．．．
关键词：
苹果 磷酸化 蛋白质组 蛋白激酶 着色
[期刊] 中国农业科学
[作者]
鲁小山 韩宾 张兰 冯毛 房宇 李荣丽 周天娥 李建科
【目的】通过对王浆高产蜜蜂(Apis mellifera L.)(浙江浆蜂)哺育蜂(6-12 d)咽下腺的磷酸化蛋白质组分析,以期探明蛋白质磷酸化修饰对王浆分泌的生物学意义。【方法】将哺育蜂咽下腺蛋白质液内酶切后,用固相金属离子亲和层析色谱法(IMAC)、强阳离子交换(SCX)及LC-MS/MS和生物信息学分析,对工蜂咽下腺磷酸化蛋白质组进行研究。【结果】在哺育蜂的咽下腺中,共鉴定117个蛋白质,其中6个蛋白质的6条磷酸肽段的8个位点发生磷酸化修饰。这些磷酸化蛋白质是王浆主蛋白1和7的前体、与蛋白翻译合成相关的60S酸性核糖体蛋白P0、P1、P2和60S核糖体蛋白L15。【结论】哺育蜂咽下腺核...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张艳 李欣 李铮 李蒙 刘永峰 张德权
【目的】通过测定冰温贮藏及冷藏过程中肌肉肌浆蛋白与肌原纤维蛋白的磷酸化水平，分析冰温贮藏对蛋白质磷酸化水平的影响，为肉类冰温贮藏品质调控提供理论依据。【方法】选取大尾寒羊与小尾寒羊杂交公羊的背最长肌于冷藏和冰温条件下成熟，分别在０．５ ｈ、１２ ｈ、２４ ｈ、３ ｄ、５ ｄ、９ ｄ取样测定蛋白激酶活性、肌浆蛋白与肌原纤维蛋白的磷酸化水平。采用蛋白激酶活性测定试剂盒、运用酶联免疫的方法检测各处理组蛋白激酶的活性随贮藏时间的变化；通过ＳｄＳ－ＰＡＧＥ电泳、荧光染色的方法得到全蛋白染色与磷酸化染色的肌浆蛋白与肌原纤维蛋白条带，运用ＱｕＡｎｔｉｔｙ ＯｎＥ软件分析各处理组各处理时间的肌浆蛋白及肌原纤维．．．
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
刘秋林 钟月仙 万伟峰 田甜 林授楷 黄健 薛李春 艾玉芳 柯玉琴 何华勤
首先阐述了植物细胞蛋白质磷酸化的作用机制,并从植物磷酸化蛋白质的分离与鉴定技术、植物磷酸化蛋白质数据库及植物蛋白质磷酸化位点的预测工具,对植物磷酸化蛋白质组的研究进展进行综述.最后分析了植物磷酸化蛋白质组研究中亟需关注的3个问题,即磷酸化蛋白质的分离与鉴定技术的提升、位点预测工具的完善及蛋白质功能的分析.
关键词：
植物 磷酸化蛋白质组学 进展
[期刊] 中国农业科学
[作者]
周天娥 房宇 冯毛 韩宾 张兰 李荣丽 李建科
【目的】通过对中华蜜蜂(中蜂)和意大利蜜蜂(意蜂)雄蜂胚胎发育期3个日龄差异蛋白质组和磷酸化蛋白质组进行分析,以探明中蜂、意蜂雄蜂胚胎发育特征并了解雄蜂胚胎发育生物学,为蜜蜂遗传改良提供理论依据。【方法】采用双向电泳方法建立中蜂、意蜂雄蜂胚胎发育3个日龄的蛋白质组及磷酸化蛋白质组表达谱,获得图谱中蛋白质的分子量、等电点和表达量等信息,并对部分差异蛋白质进行质谱分析、功能鉴定和生物信息学分析。【结果】在雄蜂胚胎发育的第1、2、3日龄,中蜂表达332、362、340个蛋白质,其中111、117、112个蛋白质发生了磷酸化修饰;意蜂表达302、331、311个蛋白质,其中有107、110、106个发...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
陈立娟 李欣 李铮 李培迪 李仲文 张德权
【目的】通过激活蛋白激酶的活性提高羊肉肌原纤维蛋白的磷酸化水平，分析磷酸化水平的提高对羊肉肌原纤维蛋白降解程度、收缩功能的影响，进一步揭示蛋白质磷酸化对羊肉肌肉嫩化的作用机理。【方法】通过添加蛋白激酶Ａ激活剂Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ、蛋白激酶Ｃ激活剂佛波酯（ＰＭＡ），提高蛋白激酶的活性，改变羊肉肌原纤维蛋白的磷酸化水平。比较激活剂处理组与空白对照组肌原纤维小片化指数（ＭＦｉ）、条带降解程度、肌节长度等指标的差异，确定蛋白质磷酸化水平对羊肉肌肉收缩和肌肉降解的影响。【结果】将羊肉样品在蛋白激酶溶液中培养２４ ｈ，在培养结束后１、２和４ ｈ，ＰＭＡ处理组（ＰｋＣ激活组）的蛋白激酶活性显著高于空白对照组（．．．
[期刊] 华北农学报
[作者]
袁敏 葛伟娜 王莉 张岚 张家琦
为了获得纯化的SnRK1.1与FD蛋白,分析蛋白激酶SnRK1.1是否能够磷酸化开花调控途径中的转录因子FD,成功克隆了1 608 bp的SnRK1.1基因以及858 bp的FD与FD-T282A基因,分别与PGEX-4T-3载体连接,获得原核表达载体GST-SnRK1.1、GST-FD和GST-FD-T282A,并分别转化大肠杆菌BL21菌株;SDS-PAGE电泳和考马斯亮蓝染色(CBB)表明,0.5 mmol/L IPTG能够成功诱导出GST-SnRK1.1、GST-FD和GST-FD-T282A蛋白
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李付振 邱新棉 王美兴 刘传亮
【目的】了解棉花在盐胁迫条件下相关基因的表达,并克隆与抗(耐)盐相关的重要基因。【方法】通过筛选棉花EST数据库,并对目标EST序列进行整合,对中棉所49在非盐胁迫和盐胁迫条件下进行处理并利用RT-PCR的方法克隆了质膜Na+/H+逆向转运蛋白途径中的1个蛋白磷酸化同源基因,命名为GhSOS2,并通过实时荧光定量PCR对其表达特征进行分析。【结果】序列分析表明,该基因成熟mRNA的剪接存在2种可选择性的剪接体,分别命名为GhSOS2a(GenBank登录号:GU188960)和GhSOS2b(GenBank登录号:GU188961),分别编码445和421个氨基酸残基。由于剪接方式的差异,导致...
[期刊] 华北农学报
[作者]
曾广娟 李春敏 张新忠 陈东玫 赵永波 董文轩
为探索苹果叶片蛋白质SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析的样品制备方法,比较了三氯乙酸(TCA)/丙酮沉淀法、改良的Tris-HCl法、酚-甲醇/醋酸铵沉淀法、二硫苏糖醇(DTT)/丙酮法及Tris-HCl法等5种蛋白质的提取方法。制备的样品经SDS-PAGE分离采用银染显色。结果表明,改良的Tris-HCl法在加大PVPP用量和蛋白质提取缓冲液的基础上,将丙酮沉淀蛋白质的时间由30 min增加到1 h,使蛋白质的得率最高为3.243μg/μL,上样量5μL得到的蛋白质条带数量最多,条带最清晰为41条。利用这一改良方法对苹果实生树不同节位蛋白质的动态变化进行了研究,共发现6条蛋白...
关键词：
苹果 SDS-PAGE 蛋白质提取
[期刊] 中国农业科学
[作者]
曹尚银 张秋明 朱志勇 郭俊英 陈玉玲 薛华柏
【目的】苹果为中国乃至世界最主要果树之一,但由于童期长、其育种工作一直落后于其它作物。本研究旨在揭示苹果花芽分化机理,缩短苹果童期,加速苹果育种进程。【方法】运用蛋白质组学研究技术(双向电泳技术、生物质谱技术、生物信息学技术)对富士苹果树短枝停长后3～9周的花芽、叶芽进行蛋白质分析研究。【结果】短枝停长后第7周花芽形态分化开始,第7周花芽较叶芽的2-DE图谱有283个蛋白点在表达上有明显的质和量的变化。4个蛋白点(16.4、30.2、40.3、65.1kD)为花芽形态分化开始时初前(花序原始体出现)花芽2-DE图谱所特有;3个蛋白点(39.3、60.2、66.3kD)为初后(侧花出现)花芽2-...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
高星 李欣 李铮 杜曼婷 张彩霞 张德权 丁武
【目的】研究宰后肌肉中肌球蛋白磷酸化与肌动球蛋白解离之间的关系，分析其磷酸化水平的变化对肌动球蛋白解离的影响，探究肌球蛋白磷酸化对宰后肌肉肌节长度与嫩度的作用。【方法】取宰后３０ ｍｉｎ内的羊背最长肌，在４℃条件下分别成熟６、２４、４８和７２ ｈ，通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳、Ｐｒｏ－Ｑ染色和蛋白质免疫印迹测定肌球蛋白的磷酸化水平和肌动球蛋白解离程度随宰后时间的变化；测定肌动球蛋白ＡＴＰ酶的活性，分析宰后不同时间点肌球蛋白与肌动蛋白结合作用力的强弱；采用透射电镜分析宰后肌节长度随时间的变化。【结果】研究发现宰后肌肉中肌球蛋白轻链２的磷酸化水平在０．５—４８ ｈ快速降低（Ｐ
[期刊] 中国农业科学
[作者]
兰海燕 李立会
随着世界各国经济贸易和农业科学技术的发展 ,特别是植物新品种保护法的实施 ,品种鉴定越来越引起人们的关注。大量证据显示 ,凝胶电泳技术在作物品种鉴定中起着举足轻重的作用。对各种凝胶电泳技术现状做了全面综述 ,包括电泳方法的发展过程、电泳方法间的比较、影响因素、应用范围、己取得的成就和未来的发展方向。随着我国植物新品种保护范围的不断扩大 ,电泳方法必将在作物品种鉴定中发挥更大的作用。
关键词：
蛋白质 凝胶电泳 作物品种鉴定 种子检验
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李蒙 李铮 李欣 杜曼婷 宋璇 张德权
【目的】肌红蛋白是影响肉色最主要的色素物质,主要存在于肌浆中,其绝对含量和3种肌红蛋白(氧合肌红蛋白、脱氧肌红蛋白、高铁肌红蛋白)间的相对含量决定了肉色。已有研究表明蛋白质的磷酸化可能会通过对糖酵解代谢途径以及肌红蛋白的调控进而负向调控肉色的稳定性,本研究旨在探究磷酸化对肌红蛋白稳定性的影响,进而为通过调控磷酸化水平提高肉色稳定性提供理论依据。【方法】用连二亚硫酸钠还原骨骼肌肌红蛋白纯品,再经超滤除去连二亚硫酸钠。随后采用碱性磷酸酶(AP)体外孵育催化肌红蛋白的去磷酸化反应,采用SDS-PAGE凝胶电泳和
[期刊] 华北农学报
[作者]
滕云龙 李春敏 赵永波 曾广娟 陈东玫 董文轩 张新忠
利用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术(SDS-PAGE)分析了5株苹果杂种实生树(红玉×金冠)韧皮部中蛋白质含量随节位升高的动态变化。结果表明,随节位升高蛋白质带发生变化,共发现3条阶段转变特异蛋白质带,分子量估算值分别为17.0,21.0,55.0 kDa。其中55.0 kDa蛋白质表现为定性变化,从46节出现,之后含量保持稳定,到125节后突然消失。21.0 kDa蛋白质111~125节以上含量突然降低;17.0 kDa蛋白质在在实生树低节位含量低,在51~65节以上含量突然增加并保持稳定,到106~120节含量突然下降。
关键词：
苹果 阶段转变 蛋白质 SDS-PAGE
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
尹赜鹏 莫江玲 齐明芳 孟思达 李天来
蛋白质的磷酸化是一种重要的蛋白质翻译后修饰方式。蛋白质的磷酸化与去磷酸化在植物气孔运动过程中起着关键的调节作用。目前,保卫细胞磷酸化蛋白质组学的主要研究内容包括鉴定磷酸化蛋白、定位磷酸化位点、定量磷酸化水平,进而揭示磷酸化和去磷酸化在植物气孔运动过程中所起的生物学功能。Open Stomata 1 (OST1)/SnRK2.6是蔗糖非酵解型蛋白激酶SnRK2(sucrose non-fermenting receptor kinase)家族的成员,具有典型的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶保守域,并主要在保卫细胞中表达。当植物处于正常生长环境时,ABA的受体PYR/PYL/RCAR不能作用于蛋白磷酸酶2C (PP2Cs,protein phosphatase 2Cs),PP2Cs通过与OST1互作抑制OST1的活性;在逆境胁迫下,PP2Cs解除对OST1蛋白激酶的抑制,随后OST1蛋白激酶启动对下游信号组分的调控作用并引起气孔运动。通过综述磷酸化修饰的定性和定量分析方法,以及蛋白质磷酸化修饰在保卫细胞应对非生物胁迫中的作用机制,提出了保卫细胞磷酸化蛋白组学领域目前存在的挑战和研究前景,旨在为深入了解保卫细胞应答非生物胁迫的气孔运动机制提供参考和新方向。
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