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[期刊] 林业科学
[作者]
翟俏丽 范桂枝 詹亚光
将促进白桦三萜积累的拟茎点霉属的内生真菌诱导子添加到白桦悬浮培养体系中,研究40,100,400μg·mL-1的真菌诱导子对生长初期、指数生长期和生长末期的悬浮细胞干质量和三萜积累的影响。结果表明:真菌诱导子的不同诱导方案均促进白桦悬浮细胞中三萜的积累,而细胞干质量积累却被抑制;其中最佳诱导条件为在指数生长期的白桦细胞中添加40μg·mL-1的真菌诱导子诱导1天,诱导后细胞中的三萜含量达29.47mg·g-1,比对照增长78%。在优化诱导条件下,考察培养液pH和电导率、细胞苯丙氨酸解氨酶(PAL)和过氧化物酶(POD)活性,发现真菌诱导后6～10h内,引发培养液的碱化和电导率的升高,特别是白桦...
关键词：
白桦 真菌诱导子 三萜 悬浮细胞培养
[期刊] 林业科学
[作者]
孙美玲 李晓灿 王晓东 詹亚光 范桂枝
以产白桦酯醇的白桦悬浮细胞系为试材,利用药理学试验,结合高效液相色谱和荧光显微镜技术,探讨过氧化氢(H2O2)在拟茎点霉属真菌诱导子促进白桦酯醇积累中的作用。结果表明:外源H2O2降低了细胞的活力和干质量的积累量,却提高了白桦酯醇的含量。其中,1mmol·L-1H2O2处理12h,白桦酯醇的含量比对照增加89.45%,0.1mmol·L-1H2O2处理24h,白桦酯醇的含量比对照增加73.72%。真菌诱导子促进了白桦悬浮细胞中H2O2和白桦酯醇的生成,在处理24h时,分别比对照增加391.67%和185.22%。H2O2的清除剂过氧化氢酶减弱真菌诱导子对H2O2和白桦酯醇的诱导效应。由上述结果...
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
王艳 尹静 马泓思 詹亚光 苏欣 梁甜 张梦岩
为探讨Ca2+作为信号分子在水杨酸(SA)诱导白桦悬浮细胞三萜合成中的作用,本文用SA、Ca2+及Ca2+阻断剂对白桦悬浮细胞进行处理,采用紫外分光光度法和高效液相色谱法测定细胞中总三萜及其组分的积累量;同时利用荧光定量PCR方法检测了白桦细胞中三萜合成途径关键酶基因(FPS、SS、SE、BPW、BPY、CAS)和钙调蛋白基因表达变化。结果显示:水杨酸可诱导白桦悬浮细胞三萜物质(总三萜、齐墩果酸、白桦脂醇、白桦脂酸)的合成及相关基因的上调表达,且Ca2+的加入使得这种诱导效应更为显著,暗示白桦细胞中钙信号分子介导了水杨酸诱导三萜物质的合成。而对SA与各种Ca2+阻断剂互作处理结果显示,Ca2+...
关键词：
白桦 三萜物质 关键基因 钙调蛋白
[期刊] 林业科学研究
[作者]
黄雅婷 詹亚光 马明媚 范桂枝
［目的］探究一氧化氮供体硝普钠（ＳＮＰ）对白桦悬浮细胞中Ｋ～＋、Ｃａ～（２＋）和白桦酯醇累积的影响及外源Ｋ～＋、Ｃａ～（２＋）与ＳＮＰ互作对白桦酯醇累积的影响。［方法］利用高效液相色谱法、原子吸收光谱法及比色法分别测定白桦酯醇、Ｋ～＋及Ｃａ～（２＋）含量。［结果］ＳＮＰ处理对白桦悬浮细胞中Ｋ～＋、Ｃａ～（２＋）的累积存在浓度和时间效应，其中１ ｍｍｏｌ·ｌ－１ＳＮＰ处理１２ ｈ时Ｋ～＋含量最高，是对照组的１．４７倍，而Ｃａ～（２＋）含量在５ ｍｍｏｌ·ｌ－１ＳＮＰ处理９６ ｈ时最高，是对照组的１．５０倍。１ ｍｍｏｌ·ｌ－１ＳＮＰ与不同浓度ＫＣｌ共同处理后，白桦酯醇含量高于单独ＳＮＰ与ＫＣｌ处．．．
关键词：
白桦悬浮细胞 白桦酯醇 硝普钠 钾 钙
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘菲 刘辉 梁元存 刘爱新 魏芳芳 林琎
【目的】阐明核黄素对烟草悬浮细胞苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia-lyase,PAL)、过氧化物酶(peroxidase,POD)活性以及抗病相关的酚类物质、木质素等次生代谢产物含量的影响。【方法】1mmol·L-1的核黄素处理烟草悬浮细胞,用生物化学、细胞化学和高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)等方法测定苯丙烷代谢有关的生理和生化指标。【结果】核黄素处理后,PAL和POD活性明显升高,处理12h和24h后酶活性分别达到峰值;荧光观察细胞壁积累了更多的酚类物质,胞内和胞外scopoletin(7-羟基...
[期刊] 林业科学
[作者]
范桂枝 翟俏丽 于海娣 王晓东 王博 詹亚光
以产三萜的白桦悬浮系为试验材料,在优化白桦悬浮细胞生长与三萜积累的培养基种类和接种量的基础上,分析白桦悬浮细胞生长和三萜积累的动力学关系,同时考察1个培养周期内白桦细胞内外主要营养成分的变化。结果表明:1)在MS,NT,IS,WPM,1/2MS,B56种培养基和10～40g·L-1接种量中,有利于白桦细胞生长和三萜生产的培养基为B5和接种量为20～30g·L-1FW;2)在1个培养周期内,白桦悬浮细胞培养过程中三萜的产量与细胞生物量是相偶联的,随着生物量的增加三萜产量呈增长趋势,其中,白桦细胞在第12天比生长速率达到最高0.18,三萜合成速率和比合成速率在第9天达到最高值,分别为0.73mg·...
关键词：
白桦 悬浮细胞 三萜 营养成分
[期刊] 中国农业科学
[作者]
陈阳辉 刘静 陈琰 侯春燕 王冬梅
【目的】以感染叶锈菌的小麦叶片细胞间隙液IWF-260作为激发子,刺激小麦洛夫林10悬浮细胞,探讨悬浮细胞受激发子刺激引发的NO变化情况及其产生的可能分子机制。【方法】采用Greiss试剂法及荧光分子探针DAF-2DA标记法检测胞内NO的动态变化,同时借助药物学试验探讨Ca2+和NO的关系。【结果】IWF-260能诱导小麦悬浮细胞产生NO,NO在IWF-260刺激诱发的细胞死亡过程中发挥重要作用。药物学抑制剂试验证明NOS和NR及胞外钙离子内流均与IWF-260刺激小麦悬浮细胞产生的NO有密切关系,且在NO的产生途径中,NR途径为主要途径。【结论】IWF-260能够诱导小麦悬浮细胞产生NO,N...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
柳金伟 焦娇 王蕾 王莲莲 褚小静 梁元存
【目的】阐明氯化汞处理烟草悬浮细胞产生的细胞死亡具有细胞编程死亡(programmed cell death,PCD)的特征和分子机制。【方法】采用形态和生物化学方法观察氯化汞处理细胞后的变化,并采用药理学方法,通过添加抑制剂和抗氧化剂阐明氯化汞引发的信号转导途径。【结果】氯化汞诱导产生的细胞死亡具有PCD特征,包括染色质浓缩、细胞核的TUNEL检测呈阳性和DNA ladder的形成。氯化汞诱导烟草悬浮细胞过氧化氢积累,过氧化氢酶和抗坏血酸等抗氧化剂能降低细胞死亡率。蛋白激酶抑制剂、磷脂酶C和磷脂酶D的抑制剂能显著地降低氯化汞引起的细胞死亡和过氧化氢积累。【结论】氯化汞引起的细胞死亡是一种PC...
关键词：
烟草 氯化汞 细胞编程死亡
[期刊] 林业科学
[作者]
王敬文 蒋晶
研究了脱落酸（ＡＢＡ）诱导黑荆树悬浮培养细胞抗冻性发育的有关问题，其中包括ＡＢＡ施用浓度、抗冻性发育的时间进程、ＡＢＡ诱导可溶性蛋白质含量增高、环己亚胺对抗冻性发育的抑制作用等。研究结果表明，黑荆树悬浮培养细胞能够在添加ＡＢＡ的ＭＳ培养基中，在２５℃进行抗寒诱导，以１０ｍｇ／ＬＡＢＡ处理８天的悬浮培养细胞在－６℃的存活率达８３．６％，而对照存活率为零。ＡＢＡ能够诱导悬浮培养细胞可溶性蛋白质含量增高５．５倍，环己亚胺能够抑制蛋白质含量增高，同时也抑制低温驯化和ＡＢＡ诱导的抗冻性发育。
关键词：
黑荆树,抗冻性,ABA
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
胡海英 赵亚美 阎晓磊 王华芳
香花槐是集绿化、固土、饲料等于一体的多用途林木,其细胞培养则是充分利用该树种优良特性的生物工程技术基础.该文以香花槐叶片为外植体,研究愈伤组织诱导和细胞悬浮培养的技术体系.结果表明,愈伤组织诱导最适培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L.愈伤组织生长符合S型曲线,在固体培养基上,培养7 d进入指数生长期,到28 d,愈伤组织鲜重从1.329 3 g增长到10.763 7 g.悬浮培养的细胞,最大生长量为鲜重8.496 g或干重0.474 g.S型生长曲线分析表明,细胞生长迟滞期为3.6 d,最大生长量为14.6 g.
关键词：
香花槐 愈伤组织 悬浮细胞 细胞培养
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
张蜀秋
研究了蚕豆离休叶片失水10％后，叶片与其气孔保卫细胞脱落酸含量的变化及其与叶龄的关系。未受胁迫叶片脱落酸含量在成熟叶片中高于幼嫩叶片，保卫细胞中脱落酸含量均在很低的水平。在叶片自然失水10％的10min内，叶片的脱落酸含量几乎无变化，但保卫细胞的脱落酸含量增加5倍以上。4h后，叶片脱落酸含量也显著增加，从最幼嫩叶片到成熟叶片分别达到处理前的25，26，17，10和6倍。因是离休叶片，排除了脱落酸的其他来源，说明叶片在失去膨压时合成并积累脱落酸；所有保卫细胞脱落酸含量都增加30倍以上，以第2，3片完全展开叶片的保卫细胞最为敏感，其脱落酸含量增加40倍以上。失水处理后保持湿润恢复膨压的叶片和其保卫...
关键词：
水分胁迫 脱落酸 保卫细胞 蚕豆
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
夏启中 张明菊 张献龙 郭小平
棉花悬浮细胞经高浓度细胞分裂素(2mg/LKT或4mg/LKT)处理后第4天大量死亡,培养物呈褐黑色;抽提总DNA,进行琼脂糖胶电泳,结果表明:2mg/LKT和4mg/LKT两处理中有明显的大小为140~180bp及其倍增量片段的DNA“梯”。进行PI和FDA染色显微观察可以看到:2mg/LKT处理中大部分细胞的细胞核较小,核质浓缩,呈棒形或弯月形;胞质浓缩,出现了不对称的质壁分离,且丧失了FDA染色活性。这些结果表明,由高浓度细胞分裂素处理引起的棉花悬浮细胞大规模死亡是一种细胞程序性死亡(PCD)。不同的生理状态(UCSA和BAE)和不同生长时期(指数增长期和静止期)的棉花悬浮细胞对高浓度细...
[期刊] 林业科学
[作者]
尹忠平 上官新晨 陈继光 吴少福 黎冬明
通过大孔树脂吸附、硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶层析、半制备高效液相色谱及重结晶对青钱柳悬浮培养细胞三萜酸进行分离纯化,获得5个单体三萜酸,经高分离度快速液相-飞行时间质谱(RRLCTOF/MS)、核磁共振氢谱(1H NMR)和核磁共振碳谱(13C NMR)等分析,分别被鉴定为2α-羟基齐墩果酸、2α-羟基熊果酸、白桦脂酸、齐墩果酸、熊果酸,其中2α-羟基齐墩果酸和白桦脂酸是首次在青钱柳中得到分离鉴定。
[期刊] 农业现代化研究
[作者]
朱雄梅 蔡慧楠 刘瑞琪 林佩锦 郞双怡 黄悦 邓舒琪 莫亿伟 金晨钟
为了探讨NO和超氧阴离子对水稻种子根侧根生长的影响，以DR5-GUS标记IAA的转基因水稻为材料，种子催芽萌发后，用含有不同浓度的NO供体、NO合成酶抑制剂和清除剂溶液来培养萌发3 d的水稻幼苗，在培养的第3 d和第5 d分别测量初生根长度和初生根上侧根数量，并通过DAF-2DA对NO、GUS对IAA和NBT对超氧阴离子(O_2·~-)染色后，在显微镜下观察NO、IAA和O_2·~-在侧根的定位，分析与NO合成相关的基因表达。结果表明，NO和IAA主要分布在根中柱的维管束部分以及侧根起始形成处和侧根根尖，O_2·~-只极性分布在侧根起始部位和侧根根尖。当NO合成受到抑制或清除时，NO、IAA和O_2·~-在侧根的积累量明显减少，侧根数量及初生根长度也均显著下降。荧光定量PCR分析发现，外源的NO供体SNP处理均能显著诱导水稻OsNIA1和OsNIA2基因表达，而NO合成酶抑制剂处理则抑制OsNIA1和OsNIA2基因表达。基于我们的实验结果，NO作为一种重要的信号物质参与初生根和侧根的生长，并需IAA和O_2·~-极性积累于侧根的起始部位，从而达到促进侧根的形成，当NO合成受阻时初生根和侧根生长均受到抑制。
[期刊] 华北农学报
[作者]
杨起简 周禾 于同泉 张蕾
研究了不同激素组合处理对鲁梅克斯K 1杂交酸模子叶愈伤组织的诱导 ,试验结果表明 ,2 ,4 D配合使用 6 BAP时愈伤组织诱导率最高。在附加 1 0mg/L 2 ,4 D的液体MS培养基中通过悬浮培养分离出的单细胞 ,经数次继代后获得良好的悬浮培养体系
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