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[期刊] 中国农业大学学报  [作者] 王庆涛  高琛  刘畅  赵红琼  郝智慧  
对比分析盐补骨脂不同种提取物对3种细胞的毒性,本研究使用HK-2细胞、Hep-G2细胞及LLC-PK1细胞作为评价模型,采用CCK-8方法检测盐补骨脂水、醇提取物及其主要成分对3种细胞活力的影响。结果表明:1)盐补骨脂乙醇提取物对HK-2、Hep-G2及LLC-PK1细胞毒性均强于其水提取物。2)补骨脂甲素、补骨脂乙素、补骨脂定、异补骨脂定、甲基补骨脂黄酮A对HK-2、Hep-G2细胞毒性较强,且补骨脂甲素对HK-2细胞和Hep-G2细胞毒性要强于其他主要成分,而补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂宁对HK-2、Hep-G2细胞毒性相对较小。综上,盐补骨脂水提取物、乙醇提取物对HK-2细胞、Hep-G2细胞及LLC-PK1细胞均具有一定的细胞毒性,且盐补骨脂乙醇提取物毒性更大;补骨脂甲素、补骨脂乙素、甲基补骨脂黄酮A、补骨脂素、异补骨脂素、异补骨脂定、补骨脂定对HK-2细胞、Hep-G2细胞具有一定的细胞毒性,且补骨脂甲素的毒性要大于补骨脂其他主要成分。本研究可为后续开展补骨脂或补骨脂有效成分的相关研究提供科学依据,在发挥其药理作用的同时,减少其毒性。
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 董芳   张志岐   聂冬霞   范楷   娄秀萍   朱雪婷   韩铮   赵志辉  
[目的]本研究旨在探讨细胞培养基中添加不同浓度血清对赭曲霉毒素A (ochratoxin A, OTA)毒性的影响,以期更深入了解OTA的毒性,同时为其他OTA体外毒性研究提供重要参考价值。[方法]首先测定了OTA对人肾皮质近曲小管上皮细胞(human proximal tubule-derived epithelial cells, HK-2)细胞活力的影响,同时利用超高效液相色谱串联质谱技术检测了细胞上清液中OTA水平以间接反应细胞对OTA的摄入量,最终分析培养基中不同浓度血清对OTA毒性的影响。[结果]细胞培养基中添加5%浓度血清在48 h内不会影响细胞活力,可以作为细胞正常培养条件,添加2%浓度血清在36 h不会影响细胞活力,可以作为配制OTA工作液的细胞处理条件。基于优化的细胞培养及处理条件,OTA对HK-2细胞活力的影响结果表明,OTA抑制细胞活力呈现时间和剂量依赖性,OTA处理HK-2细胞12、24、36 h的IC_(50)分别为39.29、6.28和2.72 μmol·L~(-1)。同时OTA可以时间依赖性极显著提高细胞释放LDH,损伤细胞膜的完整性(P<0.01)。[结论]细胞培养基中添加不同浓度血清可影响OTA的毒性,且血清浓度越高,对OTA毒性影响越大。其中,当使用2%血清浓度的培养基配制OTA工作液时,可在不影响细胞活力的前提下最大限度降低血清浓度对OTA毒性的影响。
[期刊] 中国农业大学学报  [作者] 刘恩  郑楠  范彩云  张养东  王尚  黄帅  程建波  
为研究砷(Arsenic,As)和铅(LeAd,Pb)单独以及联合作用对人肝癌细胞(HumAn Liver cArcinomA ceLLs,HePG2)毒性作用和细胞氧化损伤的机制,采用不同质量浓度的As(2.65、3.15、3.65、4.15和4.65μG/mL)和Pb(160、190、220、250和280μG/mL)以及质量浓度比为1∶55的As+Pb分别或联合处理HePG2细胞24、48和72H,使用mTT法检测细胞活力;细胞培养24H后测定细胞活性氧(ros)、乳酸脱氢酶(LdH)、丙二醛(mdA)和还原性谷胱甘肽(GsH)的相对含量。mTT结果表明:As、Pb和As+Pb的24、4...
[期刊] 中国农业科学  [作者] 王立峰  陈静宜  谢慧慧  王玉梅  石嘉怿  梁正昌  刘瑞海  鞠兴荣  袁建  
【目的】了解薏米多酚的体内抗氧化能力,着重分析薏米结合多酚的抗氧化能力,确定结合多酚对总抗氧化能力的贡献;研究薏米多酚对肝癌细胞的毒性和抗增殖作用,在细胞层面上对薏米多酚的功能作用进行评价分析。【方法】以贵州黑谷薏米、辽宁5号薏米、龙薏1号薏米为原料,通过对薏米样品多酚类物质游离型和结合型部分构建细胞模型,评价细胞内抗氧化能力指数,以HepG2细胞为研究对象,测定分析薏米多酚提取物对细胞毒性的中位浓度CC50值和细胞抗增殖作用的半最大效应浓度EC50值。【结果】薏米结合型多酚抗氧化能力显著高于游离型多酚。不同品种间总多酚含量和抗氧化能力差异显著,辽宁5号薏米和龙薏1号薏米明显优于贵州黑谷薏米。...
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 赵欢欢  WANTANA Sinsiri  黄继光  吴娇  张卫云  周利娟  
用MTT法测定20种泰国植物乙醇提取物对斜纹夜蛾(SpodopTera liTura)卵巢细胞系Sl-1的增殖抑制作用,用倒置相差显微镜观察细胞形态变化,用流式细胞术测定细胞线粒体膜电位变化。结果表明:5种植物(姜(Zingiber officinale roScoe)、高良姜(alpinia galangl(l.)Willd.)、印楝泰国变种(aZadirachTa indica a.JuSS var.SiaMenSiS valeTon)、姜黄(curcuMa longa dennST)、泰国青柠(ciTruS hySTrix dc))乙醇提取物的细胞增殖抑制效果较好,抑制率明显大于阳性对照...
[期刊] 华北农学报  [作者] 霍爱华  孙雪荣  于文慧  李华涛  李乐  李洪才  田文儒  
拟探讨热应激诱导LLC-PK1细胞线粒体凋亡相关因子的表达和活性情况,以及激活线粒体凋亡通路的时间。采用qRT-PCR方法和CasPase活性检测试剂盒分别检测42℃热应激处理后0,2,4,8,16 h以及37℃培养的LLC-PK1细胞中hsP72、BCL-2、Bax、aIF和CyT.C的基因表达以及CasPase-9和CasPase-3的活性。结果显示,42℃热应激1 h,LLC-PK1细胞BCL-2/Bax(P<0.05)和aIF(P<0.01)基因表达以及CasPase-3(P<0.01);hsP72基因表达和CasP...
[期刊] 华北农学报  [作者] 王占美  赵园  陈健伟  国晓瞳  丛霞  姜忠玲  田文儒  
为研究不同浓度葛根素对热应激诱导的LLC-PK1细胞HSP70 mRNA和蛋白表达的影响,筛选出葛根素诱导HSP70表达的最佳浓度。选取处于对数增长期的猪肾小管上皮细胞,分为37℃对照组和42℃热应激组,热应激组细胞先在加入不同浓度(0.01~100μmol/L不等)葛根素的培养基中培养,热应激之后,提取总RNA和总蛋白,用RT-PCR和Western Blot检测HSP70 mRNA和蛋白的相对表达量。结果显示,42℃热应激和不同浓度的葛根素均能显著诱导LLC-PK1细胞的HSP70 mRNA和蛋白的表达,并且,随葛根素浓度升高,HSP70表达量增加,在各浓度组中,10μmol/L的葛根素诱...
[期刊] 西南农业学报  [作者] 李莹馨  原茜  王震宇  黄磊  覃文君  赵勤  
[目的]研究魔芋葡甘露聚糖(KGM)对镉导致的L02细胞毒性损伤的影响。[方法]MTT法确定KGM对L02细胞的最适作用浓度和无菌处理方式;设置空白对照组、镉单独作用组、镉先作用3 h再加KGM作用组、KGM先作用3 h再加镉作用组,分别培养不同时间段后用MTT法检测L02细胞活力;检测ALT、AST、GSH-Px、MDA水平,并在光镜下进行细胞形态观察。[结果]0.2mg/mL的KGM溶液经121℃30 min灭菌处理后最适作用于L02细胞;L02细胞活力与CdCl_2浓度呈明显的剂量-效应关系;CdCl_2与KGM联合作用后其细胞活力均高于镉单独作用组,且其ALT、AST、MDA的检测结果均呈极显著差异。[结论]KGM对镉染毒后的L02细胞有一定的保护作用。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 魏中锋  张彦明  孙裴  张永国  洪海霞  倪斌  郭抗抗  
 根据已发表的猪瘟病毒基因组序列,设计合成了2对引物,以脾毒和细胞毒总RNA为模板,利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、套式聚合酶链式反应(nPCR)及测序技术,对多次动物传代和致细胞病变的猪瘟病毒主要囊膜糖蛋白E2基因的核苷酸序列进行了测定,用DNAstar软件比较分析了E2基因的核苷酸和氨基酸序列的同源性。结果发现,脾毒和标准石门株核苷酸序列的同源性为99.4%,氨基酸序列的同源性为99.0%;细胞毒与标准石门株核苷酸序列的同源性为98.3%,氨基酸序列的同源性为96.7%。由此说明,猪瘟病毒经猪体多次传代和组织培养致细胞病变后,均能保持遗传的稳定性。
[期刊] 华北农学报  [作者] 温立斌  何孔旺  杨汉春  王玉然  李广东  惠孝鑫  
为了研究类猪圆环病毒2型因子P1和P2体外诱导的细胞凋亡作用,将P1和P2分子克隆分别转染PK-15细胞。结果表明,用透射电镜可以观察到P1和P2诱导PK-15细胞出现凋亡的典型形态学变化。
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 郑露  朱海  郭爱珍  范放  李金峰  赵芳  杨小夏  洪小柳  马淑棉  司徒翠华  
小鼠神经母细胞瘤细胞经体外培养后,加入不同剂量的太平洋西加毒素(Pacific ciguatoxin-1,P-CTX-1)、箭毒苷和藜芦定,在不同时间点终止培养,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)标定活细胞量,分析西加毒素剂量与细胞活性之间的线性关系。结果发现,细胞与毒素作用不同时间,西加毒素剂量(x)与光密度值(y)之间的线性关系呈现差异。在10 h、15 h及20 h等不同时间,其线性方程分别为y=-0.082 6x+0.923 0(R2=0.978 9)、y=-0.044 3x+0.601 5(R2=0.962 1)、y=-0.020 4x+0.323 7(R2=0.928 1)。以10 h的检...
[期刊] 中国水产科学  [作者] 魏世娜  简纪常  吴灶和  鲁义善  闫秀英  
自然杀伤细胞(NK)进化上的前体细胞在鱼类中被称作非特异性细胞毒性细胞(NCC),主要来源于血液和淋巴器官,是防御细菌、病毒、寄生性原生动物等入侵的第一道防线,在非特异性免疫中起重要作用,还具有体外杀伤肿瘤细胞的功能。近年来免疫荧光显微镜技术表明NCAMP-1和NCCRP-1两种受体蛋白均表达于NCC膜上,并且这种免疫细胞从鱼类到哺乳动物上的进化是保守的,这些膜蛋白在鱼类炎症反应期可能通过颗粒胞吐途径参与抗菌的先天性免疫。本文就NCC的分离鉴定、形态结构、功能受体作用机制等方面的研究成果作一综述,旨在为深入研究NCC在鱼类先天性防御中的作用提供依据。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)  [作者] 罗维  赵墩  蒋大良  余兴龙  
为筛选出PCV2培养滴度最高的PK15细胞克隆株,采用稀释法从PK15混合细胞中分离单细胞克隆株,获得的细胞克隆用于接毒试验,即用同步接种法将猪圆环病毒2(PCV2)病毒细胞混合液以1∶100的比例接种单克隆细胞,接毒后经PCR与定量PCR检测得出A10细胞克隆培养PCV2,获得的病毒含量最高。将A10细胞进行第2轮细胞克隆,之后用同步接种法和异步接种法将PCV2感染A10细胞,并检测A10细胞接毒后的PCV2 DNA含量,2种接毒方法获得的最高PCV2基因组的拷贝数分别为3.0×109、6.2×109/mL,高于用PK15混合细胞培养PCV2所获得的最高PCV2基因组拷贝数(107/mL)。...
[期刊] 中国农业科学  [作者] 张新晨  赵其岭  陈萌萌  孙嘉瑞  鲍恩东  张书霞  吕英军  
【目的】研究猪圆环病毒2型(porcine circovirus type2,pcv2)感染pK-15细胞后调控β-干扰素(interferon-β,ifn-β)生成的信号通路,为猪圆环病毒病的发生机理和防治提供理论基础。【方法】将pK-15细胞随机分成5组:对照组、pcv2组、BX795(tBK1/iKKε抑制剂)组、BAy 11-7082(nf-κB抑制剂)组和BX795+BAy11-7082(混合抑制剂)组。BX795组、BAy 11-7082组、BX795+BAy 11-7082组分别用0.5μmol BX795、5μmol BAy11-7082、0.5μmol BX795+5μmol...
[期刊] 中国农业科学  [作者] 邵秋红  凌榕镔  朱兆荣  刘娟  郭志兴  王鹏  
【目的】探讨中药复方苦芩对感染猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus of swine,TGEV)的猪肾细胞(PK-15)中凋亡基因Bcl-2/BAX mRNA转录的影响。【方法】体外扩增TGEV,用TGEV感染PK-15细胞的模型进行体外试验研究,试验中设有复方苦芩组、空白组、模型组及黄芪多糖组,在测定了病毒半数感染细胞量(TCID50),复方苦芩及黄芪多糖药液对PK-15细胞的最大无毒浓度后,制作细胞爬片采用瑞士染色法染色观察PK-15细胞的形态变化;按试剂盒操作提取各试验组RNA并及时反转录为cDNA,采用实时荧光定量PCR法检测细胞中...
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