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[期刊] 水产学报
[作者]
康平 汪秋宽 宋琳琳 徐玲
采用(NH4)2SO4分段盐析、透析、阴离子(DEAE-52)交换柱层析、SephadexG-200凝胶柱层析等分离纯化技术,通过SDS-PAGE电泳分析了皱纹盘鲍内脏酶的组成,结果表明鲍内脏酶主要含有两种褐藻胶裂解酶Ⅰ,Ⅱ,一种纤维素酶,一种琼脂酶。对酶的酶学性质分析结果表明两种褐藻胶裂解酶Ⅰ,Ⅱ的最适pH分别为8.6,7.2,最适温度为35℃,分子量分别为35.2 ku,67 ku;两种褐藻胶裂解酶的热稳定性比较差,且易受金属离子影响;纤维素酶的最适pH为5.0,最适温度为40℃。并确定了皱纹盘鲍内脏酶分离纯化的方法及参数,为进一步研究鲍内脏复合酶的性能提供了基础参数。
关键词：
皱纹盘鲍 褐藻胶裂解酶 纤维素酶 纯化
[期刊] 中国水产科学
[作者]
孙丽萍 薛长湖 许家超 李兆杰 蔡跃飘 赵雪
采用硫酸铵沉淀、离心超滤、DEAE-SephadexA25、SephadexG-100和SephacrylS-300HR柱层析等方法从海洋食藻性锈凹螺(Chlorostomarustica)消化腺中分离纯化出一种褐藻胶裂解酶(Alginatelyase),得到电泳纯酶制品,并对此酶的酶学性质进行了研究。结果表明:此褐藻胶裂解酶的分子量为28kD,反应的最适温度为40℃,具有热不稳定性,最适pH为7.0;酶的反应受多种离子的影响,Mn2+、Co2+和Cd2+对此褐藻胶裂解酶活性具有明显的抑制作用,而Mg2+、Zn2+、Na+和K+则具有促进作用;采用透明圈法和底物法验证了此裂解酶对聚甘露糖醛酸和...
关键词：
锈凹螺 褐藻胶裂解酶 特异性
[期刊] 水产学报
[作者]
杨蕙萍 童圣英 王子臣
利用分光光度计比色法测定了２～３ｃｍ的皱纹盘鲍（ＨａｌｉｏｔｉｓｄｉｓｃｕｓｈａｎｎａｉＩｎｏ）的淀粉酶和褐藻酸酶的最适温度和最适ｐＨ以及１１种金属离子对其的影响。结果表明：最适温度分别为３０℃、３５℃，最适ｐＨ分别为６．２４、７．１９，在最适温度下的活化能分别为５．０３×１０４Ｊ／ｍｏｌ和１．３３×１０４Ｊ／ｍｏｌ；皱纹盘鲍的三种主要消化酶的活性依次为：褐藻酸酶＞蛋白酶＞淀粉酶。Ｃｕ２＋、Ｈｇ２＋、Ａｇ＋、Ｐｂ２＋对淀粉酶活性具有显著的抑制作用，其他离子则具有促进作用，其中又以Ｍｎ２＋、Ｂａ２＋、Ｃａ２＋三种金属离子尤为突出，其促进作用比对照组高一倍以上。而对褐藻酸酶，Ｚｎ２＋、Ａｇ＋、Ｈｇ...
关键词：
皱纹盘鲍,淀粉酶,褐藻酸酶,金属离子
[期刊] 水产学报
[作者]
陈守峰 杨汝晴 陈玉磊 孙乐常 张凌晶 刘光明 曹敏杰
为探究脯氨酰内肽酶(prolyl endopeptidase，PEP)在皱纹盘鲍性腺发育过程中的作用，实验采用荧光定量PCR (qRT-PCR)技术分析皱纹盘鲍不同组织中PEP的表达情况。通过硫酸铵分级沉淀和连续柱层析，从皱纹盘鲍性腺中分离纯化得到高纯度天然PEP。利用LC/MS/MS鉴定肽片段序列，以Suc-Gly-Pro-MCA为底物分析PEP的酶学性质。利用圆二色谱分析温度对PEP结构的影响。采用免疫印迹(Western Blot)和qRT-PCR分析鲍鱼性腺在不同发育时期PEP的蛋白和基因表达水平。结果显示，皱纹盘鲍的性腺中，PEP基因表达量和酶活性最高。利用硫酸铵分级沉淀和连续柱层析，从性腺中分离纯化得到分子量约为82 ku，等电点约为5.5的PEP，LC/MS/MS分析得到502个氨基酸残基，与NCBI中皱纹盘鲍脯氨酰内肽酶(KY214290)一致。PEP的最适温度和最适pH分别为25 ℃和6.0，在15～25 ℃和pH 5～8能够保持较高的酶活力。随着温度升高，PEP的二级结构有明显的改变，拟合热变性温度为（51.4±0.2）℃。PEP在雄性和雌性性腺的各个生长期均能被检测到，在雄性性腺的成熟中期和雌性性腺的成熟后期表达量最高。研究表明，PEP在鲍鱼性腺不同发育时期表达量的差异表明其可能参与到性腺发育的过程。
[期刊] 水产学报
[作者]
游银川 张凌晶 颜龙杰 翁凌 刘光明 曹敏杰
为了研究鲍鱼肌原纤维中副肌球蛋白(PM)的性质,以皱纹盘鲍为原料,采用硫酸铵盐析和羟基磷灰石柱层析相结合的方法,从肌肉中纯化得到PM。利用肽质量指纹图谱测定其内部肽片段氨基酸序列;采用双向电泳测定其等电点;用圆二色谱研究其二级结构特征,进一步利用红外光谱对其官能团进行表征。SDS-PAGE结果显示,PM分子量约为97.0 ku。肽质量指纹图谱分析获得36条肽段共403个氨基酸残基,与盘鲍和太平洋牡蛎PM的一致性分别为99.7%和72.0%,表明纯化蛋白确为PM。双向电泳测得PM等电点约为5.4,证明其为一
[期刊] 水产学报
[作者]
麻金花 翁凌 颜龙杰 张凌晶 刘光明 曹敏杰
针对海参自溶现象,研究海参内脏中与胶原降解相关蛋白酶的存在情况,以期了解内源性蛋白酶在海参自溶过程中发挥的作用,为解明自溶的内在机理提供理论依据。通过硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose阴离子交换柱层析、Sephacryl S-200凝胶过滤柱层析、Phenyl Sepharose FF疏水柱层析及M ini Q离子交换柱层析等方法,从海参内脏中分离纯化出降解明胶的蛋白酶。利用荧光底物研究其酶学性质及其对海参体壁胶原蛋白的降解情况。结果表明,该酶最适温度为30℃,最适p H为7.5,可被金属蛋白酶抑制剂EDTA、EGTA完全抑制,亦可被PM SF、Pefabloc SC等丝氨酸蛋白酶抑制剂...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
王斌 甘纯玑 管华诗 谢苗
以九孔鲍(Haliotis diversicoloeaquatilis)为原料制备一定纯度的褐藻酸酶,并对影响其降解褐藻胶的条件和产物的性质进行分析。该酶的最适温度和pH分别为45℃和7.0;与磷酸盐缓冲液相比,其在Tris-HCl缓冲液中与底物的亲和力相对较高。动力学曲线表明酶解反应主要发生在1 h之内,在2 h之内达到平衡,酶的剂量和底物的浓度对该平衡起到一定的影响作用。反应2 h之后,添加同数量的酶或者底物发现,产物的反馈抑制只是反应达到平衡的一个影响因素,而酶的变性失活也起到了重要的作用。金属离子对酶的活性具有明显的影响,Co2+、Mg2+对酶的活性具有较强的促进作用,而Cu2+、Ag...
关键词：
九孔鲍 褐藻酸酶 降解
[期刊] 水产学报
[作者]
游银川 麻金花 段雪昆 章骞 沈建东 刘光明 曹敏杰
针对加工副产物鲍鱼外套膜利用率低的现象，对鲍鱼腹足和外套膜胶原蛋白相关性质进行比较研究，以期为鲍鱼的综合加工提供一定的理论依据。本研究以皱纹盘鲍为原料分别提取得到腹足酶促溶性胶原蛋白（ｐｅｐｓｉｎ－ｓｏｌｕｂｌｅ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｏｆ ａｂａｌｏｎｅ ａｄｄｕｃｔｏｒ，ｐｓｃ１）和外套膜酶促溶性胶原蛋白（ｐｅｐｓｉｎ－ｓｏｌｕｂｌｅ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｏｆ ａｂａｌｏｎｅ ｍａｎｔｌｅ，ｐｓｃ２），对ｐｓｃ１和ｐｓｃ２相关特性进行比较分析，并利用ｐｓｃ１制备得到兔抗鲍鱼胶原蛋白多克隆抗体。ｓｄｓ－ｐａｇｅ显示，ｐｓｃ１和ｐｓｃ２分子组成均为（α１）３，且α１的分子量为１４０ ｋｕ，与水产无脊．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
杨蕙萍 童圣英 王子臣
利用分光光度计比色法测定了2－3cm的皱纹盘鲍（HaliotisdiscushannaiIno）的蛋白消化酶的最适温度、最适pH以及11种金属离子对其的影响。结果表明：在最适温度50℃下的活化能为4．89×10~4J／mol；最适pH为2．60和5．00。对其最适pH值的分析表明：皱纹盘鲍存在有胃蛋白酶，且活性颇高。在11种离子中，Cu~(2+)、Hg~(2+)、Ag~+对蛋白酶活性具有显著的抑制作用，而Fe~(3+)。Mg~(2+)则具有一定的促进作用。
关键词：
皱纹盘鲍 蛋白酶
[期刊] 水产学报
[作者]
刘艳青 李兆杰 楼乔明 刘小芳 薛长湖
对皱纹盘鲍内脏脂质进行了分析。采用Folch法提取内脏总脂,硅胶柱层析对中性脂及磷脂进行分离;TLC法对中性脂、磷脂不同组分进行分离与其主要组分的制备;10%硫酸—甲醇对样品进行甲酯化,通过气相色谱法对其进行脂肪酸分析比较。结果表明,皱纹盘鲍内脏中磷脂含量可达31.58%,不饱和脂肪酸在磷脂中含量显著高于中性脂中含量。磷脂中含有一定量的缩醛磷脂,磷酯酰乙醇胺(PE)中缩醛型磷脂含量可达50%。研究表明,皱纹盘鲍内脏中含有丰富的磷脂,多不饱和脂肪酸,并含有一定量的缩醛磷脂,具有较好的食用和药用价值,应得到充分利用。
关键词：
皱纹盘鲍 中性脂 磷脂 脂肪酸 气相色谱
[期刊] 西南农业学报
[作者]
马慧娇 郭洪伟 曾朝玮 郭家俊 章中
【目的】皮层裂解酶是芽孢所特有的专一水解皮层肽聚糖的酶,肽聚糖的水解是造成芽孢死亡的重要原因,分离提取芽孢皮层裂解酶CwlJ为推动CwlJ水解肽聚糖进而杀灭芽孢并应用于食品杀菌提供了原材料。【方法】本文将获得的皮层裂解酶CwlJ基因导入质粒pCZN 1,成功构建了基因工程菌。运用IPTG诱导重组菌表达目的蛋白CwlJ,SDS-PAGE和Western-Blot检验重组皮层裂解酶的表达情况,并用亲和层析法纯化重组蛋白CwlJ。【结果】0.5 mM的IPTG能实现CwlJ基因的大量表达,纯化后的重组皮层裂解酶CwlJ分子量为17.9 KD,最适温度为40℃、最适pH为5,比酶活力146.67 U/mg。【结论】相比从天然芽孢中提取出来的皮层裂解酶,重组皮层裂解酶CwlJ的活性提高了2倍,保证了皮层裂解酶CwlJ进一步水解肽聚糖实验的进行。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
苗雪霞 李喜梅 王金荣 贾新成
根霉（Ｒｈｉｚｏｐｕｓｓｐ．）ＭＲ０２０菌株所产胞外植酸酶，经硫酸铵分级沉淀、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤和ＤＥＡＥ－ｃｅｌｕｌｏｓｅ离子交换层析，获得了２种植酸酶同工酶，其相对分子质量分别为３４０００和４００００，等电点分别为３．４８和３．８５。二者作用的最适温度均为５５℃；最适ｐＨ分别为２．６和４．６。Ｃａ２＋、Ｆｅ２＋和Ｍｇ２＋对酶有激活作用，Ｃｕ２＋和ＮＢＳ２＋对酶有抑制作用
关键词：
植酸酶 根霉 纯化
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
荣雅利 周婷婷 施文正 汪之和 李燕
南极磷虾生活在在极寒环境，其体内特殊的蛋白酶系统是其维持正常新陈代谢的关键因素。羧肽酶为南极磷虾蛋白酶系统中一类主要且关键的蛋白酶，酶学性质研究对其后续基础研究开展及商业利用都具有指导意义。本研究以南极磷虾为原料，采用缓冲液提取、硫酸铵分级盐析，DEAE-琼脂糖凝胶FF阴离子层析和Sephadex G-100凝胶层析，从南极磷虾匀浆液中分离纯化出一种羧肽酶，SDS-PAGE结果显示其分子量为30ku。酶学性质研究结果显示：该酶最适温度为30℃；最适pH为8.0。热稳定性较差，即使在4℃下保温超过2h酶活性会急剧下降。金属离子Ni~(2+)、Mn~(2+)、Zn~(2+)、Mg~(2+)具有激活作用，且激活作用依次增强；而Ca~(2+)、Fe~(3+)、Cu~(2+)起抑制作用，Cu~(2+)抑制效果最明显。对巯基有修饰作用的抑制剂DTT、β-巯基乙醇对其有抑制作用，推测该酶活性中心存在二硫键；金属蛋白酶抑制剂EDTA、1,10-菲罗啉对该酶活性有明显的抑制作用，说明了其具有金属蛋白酶特性；而丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF对该酶抑制作用并不强烈。以脲酰-L-苯丙氨酸为底物溶液，测得该酶Km为0.0059mg/mL、Vmax为4.9091U/min。
关键词：
南极磷虾 羧肽酶 分离纯化 酶学性质
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
张继平 郭照良 唐冬生 陈建酬 贺顺莲
为了探明 pH 值、温度及矿物质离子对暗纹东方鲀胃蛋白酶活性的影响效果,用暗纹东方鲀的胃为材料,经柠檬酸缓冲液抽提,硫酸铵分级沉淀,CM-纤维素离子交换柱、Sephedex G75 层析柱纯化,获得比活为 7.13μmol/(min·mg)的胃蛋白酶.酶经聚丙烯酰胺电泳,表现为单一蛋白带,经 SDS-PAGE 测得酶的亚基相对分子质量为18 600.酶水解酪蛋白的最适温度为50 ℃,在pH2.5, ℃下酶催化酪蛋白水解的Km值为0.715 mmol/L;pH5.0, 3737 ℃下酶...
关键词：
暗纹东方鲀 胃蛋白酶 纯化 性质
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