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[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
刘小玲 葛海燕 田珍 顾泽茂 雷曼红
用Percoll连续密度梯度离心法分离黄颡鱼头肾巨噬细胞,经含0.1%牛血清的L-15培养液中培养,在光镜和电镜下观察其形态、超微结构和吞噬作用;采用硝基四氮唑蓝(NBT)与多孔酶标仪检测细胞在佛波豆蔻酸乙酯(PMA)刺激下产生的呼吸爆发,并观察外源皮质醇对黄颡鱼体内外头肾巨噬细胞呼吸爆发活动的影响。结果表明:每尾黄颡鱼可分离出1.2~1.6 mL浓度为1×107cells/mL的高纯度头肾巨噬细胞;培养3~18 h后,贴壁纯化的头肾巨噬细胞达到95%~98%;分离培养的头肾巨噬细胞具有巨噬细胞的形态结构特征,对福尔马林灭活的金黄色葡萄球菌(F-SA)的吞噬率达95%以上。PMA刺激分离的头肾...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
史春路 刘小玲 葛海燕
炎症是免疫系统对感染的重要应答。以皮质醇混饲投喂的方法,模拟自然发生的应急反应,研究了应激激素皮质醇对黄颡鱼腹腔渗出炎症细胞的影响。结果表明:通过腹腔注射液体石蜡后诱导的黄颡鱼腹腔渗出炎症细胞主要包括嗜中粒细胞、巨噬细胞和嗜酸性颗粒细胞(EGC)。注射后2 d,腹腔渗出细胞以嗜中性粒细胞为主(占嗜中粒细胞和巨噬细胞总数的61.5%±1.1%);注射后6 d、10 d则以巨噬细胞为主(在嗜中粒细胞、巨噬细胞和EGC分类计数中分别占77.8%±2.8%和82.3%±1.1%);注射后6 d出现EGC,随后数量逐渐增加。炎症过程中腹腔渗出嗜中粒细胞和巨噬细胞对福尔马林灭活金黄色葡萄球菌(F-SA)的...
关键词：
皮质醇 黄颡鱼 腹腔炎性渗出细胞
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
郗明君 刘立春 张涓 汤孝成 刘小玲 林蠡
采用51%Percoll非连续密度梯度离心法分离团头鲂头肾吞噬细胞,在光镜和电镜下观察所分离细胞的显微、超微结构及吞噬作用;以二氢罗丹明(DHR123)为荧光探针,流式细胞仪检测细胞在佛波豆蔻酸乙酯(PMA)刺激下产生的呼吸爆发活动;光镜下观察壳聚糖对吞噬细胞吞噬功能的影响。结果表明:分离得到的细胞具有吞噬细胞(巨噬细胞与中性粒细胞)的形态学及功能特征;3种壳聚糖组(100μg/mL)均能提高吞噬细胞的呼吸爆发功能,在发荧光细胞比例及细胞发荧光强度上均极显著高于对照组。其中水溶性壳聚糖组的发荧光细胞比例显著高于其他试验组,而在细胞发荧光强度上,普通壳聚糖作用相对较高;同时壳寡糖能增强吞噬细胞的...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
葛海燕 刘小玲 罗贤奎 胡正波 方伟
采用皮质醇混饲投喂的试验方法,模拟自然条件下的慢性应激,观察和分析了应激激素皮质醇对黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)幼鱼生长和外周血细胞的效应。试验组饲料中皮质醇添加剂量为100 mg/kg,日投饵率为3%,试验期5周。结果表明:(1)外源皮质醇通过减少肠道黏膜皱褶和促进糖异生作用使黄颡鱼幼鱼增重受阻;(2)外源皮质醇使黄颡鱼幼鱼外周血白细胞数量显著减少、淋巴细胞百分比显著降低,但是中性粒细胞和单核细胞百分比则呈上升趋势;(3)外源皮质醇能促进红细胞增生,增加黄颡鱼幼鱼外周血红细胞数量。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
施兆鸿 张晨捷 彭士明 张艳亮 王建钢 高权新
挑选平均体重为(5.0±1.4)g,平均全长为(8.3±0.8)cm的黄姑鱼(Nibea albiflora)幼鱼,进行低盐度胁迫试验,以23盐度组为对照组,设置9和16两个盐度胁迫组,在0、1、3、7 d进行取样。通过检测鳃Na+/K+-ATP酶(NKA)、Ca2+-ATP酶、H+-ATP酶、乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)活力以及血清皮质醇含量,研究低盐度对黄姑鱼离子调节和呼吸代谢的影响。结果显示,鳃NKA活力在盐度胁迫后出现显著增强(P<0.05);Ca2+-ATP酶活力略有上升后即出现下降的变化,而H+-ATP酶活力呈现上升后恢复的变化。血清皮质醇含量在低盐度胁迫后呈显著的...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
施兆鸿 张晨捷 彭士明 张艳亮 王建钢 高权新
挑选平均体重为（５．０±１．４）ｇ，平均全长为（８．３±０．８）ｃｍ的黄姑鱼（Ｎｉｂｅａ ａｌｂｉｆｌｏｒａ）幼鱼，进行低盐度胁迫试验，以２３盐度组为对照组，设置９和１６两个盐度胁迫组，在０、１、３、７ ｄ进行取样。通过检测鳃Ｎａ～＋／Ｋ～＋－ａＴＰ酶（ＮＫａ）、ｃａ～（２＋）－ａＴＰ酶、Ｈ～＋－ａＴＰ酶、乳酸脱氢酶（ｌｄＨ）、琥珀酸脱氢酶（ＳｄＨ）活力以及血清皮质醇含量，研究低盐度对黄姑鱼离子调节和呼吸代谢的影响。结果显示，鳃ＮＫａ活力在盐度胁迫后出现显著增强（Ｐ＜０．０５）；ｃａ～（２＋）－ａＴＰ酶活力略有上升后即出现下降的变化，而Ｈ～＋－ａＴＰ酶活力呈现上升后恢复的变化。血清皮质醇含量在．．．
[期刊] 淡水渔业
[作者]
李芹 邓丽蓉 刁晓明
研究了禁食及再投喂对瓦氏黄颡鱼(Pelteobagrus vachelli)幼鱼(体质量平均为(3.12±0.16)g)皮质醇及糖代谢的影响。试验分成5组,分别为对照组(G1)正常投喂、禁食1 d(G2)、禁食7 d(G3)、禁食14 d(G4)、禁食21 d(G5)后再恢复投喂。选取样品分析测定了瓦氏黄颡鱼幼鱼禁食和再投喂后皮质醇水平、肝指数、血糖浓度、肝糖原及肌糖原含量。结果表明:G2组幼鱼皮质醇水平与对照组无显著性差异(P>0.05),而G3、G4、G5组则极显著升高(P
[期刊] 水产学报
[作者]
李冰 张木子 黎明 袁莉霞 王日昕
为了研究急性氨氮胁迫对黄颡鱼头肾巨噬细胞抗氧化及炎症相关基因表达的影响,实验通过建立黄颡鱼离体头肾细胞模型,开展为期96 h的急性氨氮胁迫实验。结果显示,0.14和0.28 mg/L总氨氮处理组SOD基因的相对表达量显著低于对照组,但0.28 mg/L总氨氮处理组GPX基因的相对表达量显著高于其他组;0.14和0.28 mg/L总氨氮处理组IL-1和TNF基因的相对表达量显著低于对照组,而0.28 mg/L总氨氮处理组IL-8基因的相对表达量显著低于0.14 mg/L总氨氮处理组和对照组;吖啶橙染色检测发现,0.14 mg/L总氨氮处理组实验鱼头肾巨噬细胞内可见边缘不规则的黄绿色荧光,0.28 mg/L总氨氮处理组实验鱼头肾巨噬细胞内可见致密浓染的黄绿色荧光信号。研究表明,氨氮毒性能够影响黄颡鱼头肾巨噬细胞抗氧化相关基因的表达;细胞凋亡可能是造成鱼类氨中毒致死的主要原因之一。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
刘雨曦 孙亦如 王思进 马思思 喻伟峰 尹绍武 王涛
应激反应对暗纹东方鲀(Takifugu fasciatus)养殖业危害极大，而皮质醇(Cortisol)是判断鱼类应激反应的重要标志物。肠道是鱼体与外界环境接触的媒介，肠道生理状态能反应鱼体的应激水平，但目前肠道在鱼类响应应激反应中的作用不详。本研究以暗纹东方鲀肠上皮细胞为对象，分别采用胰蛋白酶和DMEM培养基、胰蛋白酶和1640培养基、Ⅰ型胶原酶和DMEM培养基、Ⅰ型胶原酶和1640培养基4种方法对其进行原代培养，旨在建立暗纹东方鲀原代肠上皮细胞体外培养方法，并在此基础上探讨皮质醇对暗纹东方鲀肠上皮细胞氧化应激、细胞凋亡和脂代谢的影响。利用CCK-8法检测肠上皮细胞活力，透射电镜观察皮质醇处理后细胞内线粒体的形态结构，荧光定量PCR (qRT-PCR)检测氧化应激相关基因、细胞凋亡相关基因及脂代谢相关基因在肠上皮细胞内的表达模式，Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡等。结果显示，在4种培养方法中，采用胰蛋白酶消化和DMEM培养基进行培养的肠上皮细胞增殖率最高，贴壁情况最佳；与对照组相比，当皮质醇浓度高于2 000 nmol/L时，肠上皮细胞活力显著下降(P<0.05)；透射电镜显示，所有皮质醇处理组肠上皮细胞内线粒体结构发生改变，线粒体数量增加；随皮质醇处理浓度的升高，肠上皮细胞内氧化应激相关基因(sod、cat和gsh-px)及促凋亡基因(caspase-3、caspase-7、caspase-9、bax和p53)表达量和凋亡指数均显著上升，抗凋亡基因bcl-2表达量显著下降(P<0.05)；脂肪合成相关基因(g6pd、6gpd、pparγ、fas和acc)表达量显著下降，脂肪分解相关基因(hsl、pparα、lpl和cpt-1)表达量显著上升(P<0.05)；TG和TC含量显著下降，NEFA含量显著上升(P<0.05)。结果表明，皮质醇能够促进暗纹东方鲀肠上皮细胞的氧化应激和细胞凋亡，同时促进脂肪的分解并抑制脂肪的合成。本研究以期为暗纹东方鲀抗应激养殖提供一定的参考资料。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李文文 卢政 谭勋 李君君
【目的】围产期奶牛对细菌性疾病的易感性升高。本研究的目的在于探讨Nod-2受体在围产期奶牛中性粒细胞(PMN)中的表达变化及其对PMN细胞呼吸爆发功能的影响,以揭示Nod-2在围产期奶牛免疫机能改变中的作用。【方法】采用RT-PCR法检测围产期和非围产期泌乳奶牛外周PMN细胞中Nod-2 mRNA的表达变化;全血分别用佛波醇酯(PMA)和Nod-2受体特异性配体胞壁酰基二肽MDP刺激,采用流式细胞仪检测PMN呼吸爆发功能。【结果】围产期奶牛PMN细胞Nod-2 mRNA表达量显著低于非围产期奶牛(P<0.05);受PMA刺激后,围产期奶牛PMN呼吸爆发功能显著低于非围产期奶牛(P<0.05);...
关键词：
奶牛 中性粒细胞 Nod-2受体
[期刊] 水产学报
[作者]
李庆飞 崔坤 艾庆辉 麦康森
为研究温度对离体大黄鱼头肾巨噬细胞抗氧化能力和炎性反应的影响,从大黄鱼头肾组织中分离巨噬细胞结合贴壁筛选法得到细胞单层后,在不同温度(16、22和28°C)下培养备用。使用25μg/mL的脂多糖(LPS)孵育细胞2 h后,测定不同培养温度下离体细胞活力、呼吸爆发活性、抗氧化酶(SOD和CAT)活性以及相关基因(SOD、CAT、Hsp70和IL-1β)表达的情况。结果显示,体外培养细胞36 h后,16°C和22°C条件下培养的细胞活力显著高于28°C处理组;LPS处理组大黄鱼头肾巨噬细胞呼吸爆发活性显著升高,但SOD和CAT酶活性较对照组显著下降。高温(28°C)显著提高了细胞CAT酶的活性和基因表达水平,但SOD酶活性和基因表达变化差异不显著;LPS显著促进了大黄鱼头肾巨噬细胞IL-1β基因的表达,并且随培养温度升高细胞IL-1β基因的表达水平显著降低;但大黄鱼头肾巨噬细胞Nrf2和Hsp70的基因表达量随温度升高而显著增加,且LPS处理组细胞基因表达水平显著高于对照组。研究表明,温度显著影响了离体大黄鱼头肾巨噬细胞的抗氧化能力和LPS所诱导的促炎基因的表达,Nrf2和Hsp70在这一过程中可能发挥重要作用。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
王宣刚 孔祥福 王欣桐 李恒顺 刘金相 王志刚 于海洋
牙鲆(Paralichthys olivaceus)是我国重要的海水增养殖鱼类，先天性免疫在其抵抗外界病原体入侵中发挥重要作用。巨噬细胞作为先天性免疫过程的重要组成部分，在鱼类免疫应答中扮演重要角色。巨噬细胞一般无法传代培养，因此，建立高效的巨噬细胞分离及原代培养技术显得尤为重要。本研究使用密度梯度离心法从牙鲆头肾中分离得到了巨噬细胞，通过差速贴壁法对获得的细胞进行纯化，后续经过优化培养条件和培养过程，采用L-15培养基(Gibco)、5%胎牛血清、1%青–链霉素、1%非必需氨基酸、30% L929细胞培养基在24℃、无CO_(2)的条件下进行培养，显微镜观察及吉姆萨染色结果显示，贴壁细胞具备巨噬细胞形态特征，使用巨噬细胞特异性基因标记mpeg1基因对细胞进行鉴定，结果显示，在分离得到的细胞中成功扩增出该基因。本研究建立了牙鲆巨噬细胞分离和培养技术，为体外研究巨噬细胞功能、深入了解硬骨鱼先天性免疫奠定了基础。
关键词：
牙鲆 巨噬细胞 原代培养 鉴定
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
李晓雪 吴楚楠 陈阿琴 吕为群
在硬骨鱼类中，促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）在内分泌、自主神经活动、免疫、渗透压和摄食活动中起着至关重要的作用，但有关CRH是否对斑马鱼卵细胞类固醇激素合成的研究较少。因此，本实验以体外培养斑马鱼卵细胞为实验材料，通过荧光定量PCR技术和放射性免疫方法，检测CRHα和CRHβ处理后卵细胞中CRH受体（CRHR1和CRHR2）及类固醇激素合成相关基因的表达变化，并检测培养液中雌二醇和孕酮的含量。结果显示，100 nmol/L CRHα和CRHβ处理后，卵细胞中CRHR1基因表达量显著上调，CRHR2基因表达无显著变化。CRHβ显著增加卵细胞中cyp19a1a 基因表达，CRHα和CRHβ对其他类固醇激素合成相关基因的表达无显著影响。添加CRHα和CRHβ后，培养液中雌二醇的含量显著降低，孕酮的含量无明显影响。上述研究提示，CRH可能通过斑马鱼卵细胞中CRHR1调节雌激素合成相关基因的表达抑制雌激素的合成。
[期刊] 水产学报
[作者]
张伟 王有基 李伟明 吕为群
为了确定大黄鱼运输的适宜条件,实验选取平均体质量为(0.12±0.03)g的大黄鱼幼鱼为实验对象,采取析因设计,设3个运输密度(2、4和8 g/L)和5个运输盐度(5、10、15、20和25),共计15个处理组研究了不同密度和盐度运输条件下,大黄鱼幼鱼皮质醇、糖元及乳酸含量的变化。经过水温16.5℃、10 h的运输,统计各组的死亡率,测定各组水中总氨氮含量。结果显示,在运输结束后,4和8 g/L密度组死亡率(1.33%、2.63%)显著高于2 g/L密度组(0.77%),盐度25组死亡率(0.44%)显著低于盐度10、15组(1.94%、1.67%),盐度10、15组死亡率显著低于盐度5组(2...
关键词：
大黄鱼 运输 胁迫 皮质醇 糖元 乳酸
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
张宇婷 杨建 耿龙武 王雨 姜海峰 徐伟
为阐明盐度胁迫对大鳞鲃(Luciobarbus capito)肝、肾和鳃组织抗氧化系统及血清皮质醇的影响，本研究设置4个NaCl盐度组(3、6、9和12 g/L)和1个淡水对照组，检测分析了不同盐度胁迫下曝露3、6、12、24、48、96 h和7 d大鳞鲃肝、肾和鳃组织中酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性和丙二醛(MDA)含量的变化，以及血清中皮质醇浓度的变化。结果显示，在相同盐度胁迫下，大鳞鲃的肝、肾和鳃组织中ACP、AKP、GSH-Px抗氧化酶的活力、MDA含量以及血清皮质醇含量随胁迫时间的延长均呈先升后降、随后趋于稳定的变化趋势，在胁迫开始24 h内各指标达到峰值，并在48 h开始逐渐趋于平稳；胁迫初期，相同曝露时间，大鳞鲃的肝、肾和鳃组织中3种抗氧化酶活力、MDA含量及血清皮质醇含量均与盐度呈显著正相关性。大鳞鲃在盐度胁迫过程中，ACP、AKP活力和MDA含量在肾组织的范围分别为1.42～2.15 U/g prot、1.01～1.87 U/g prot和13.05～57.27 nmol/mg prot；肝组织中分别为1.27～1.96 U/g prot、0.31～0.86 U/g prot和17.02～55.98 nmol/mg prot；鳃组织则为0.98～1.96 U/g prot、0.13～0.84 U/g prot和8.33～53.93 nmol/mg prot，肾组织中ACP、AKP和MDA含量均高于肝、鳃组织；而GSH-Px的活力在肝、肾和鳃组织的范围分别为44.41～114.77、16.52～67.59和9.07～48.00活力单位，肝组织中GSH-Px活力显著高于肾、鳃组织。此外，血清皮质醇在盐度胁迫过程中的含量变化范围为197.00～355.50 ng/L。综上所述，在12 g/L的高盐胁迫下大鳞鲃通过自身调节，各项指标仍可恢复正常，表明其对盐度环境有较强的适应能力。
关键词：
大鳞鲃 抗氧化酶 皮质醇 盐度胁迫
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