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[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
周向珍 朱辉
以百脉根根瘤菌MAFF303099为材料,利用转座子Tn5-sacB转座技术得到了约10 000个MAFF303099的转座接合子,构建随机插入突变体库进行保藏;同时建立了一套能从突变体库中快速筛选突变菌株的方法,且鉴定到共同结瘤基因nodB的突变体。结果表明:组成突变体库的接合子基因组中均有Tn5-sacB插入,三亲本转化效率为3.75×10(-5);与野生型相比,MAFF303099 nodB的突变体在表型上不能使其宿主百脉根形成根瘤。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
谭秀明 陈雪风 林敏怡 刘琼光
采用转座子Tn5插入突变技术,共获得5 261个接合子。通过马铃薯软腐快速筛选和PCR检测验证,获得267个使马铃薯软腐能力丧失或下降的Tn5插入突变体,并测定其在水稻上的致病力和烟草上的过敏性坏死反应(HR)。结果表明:在267个突变体菌株中,对水稻无致病力的有71个,其中在烟草上无HR反应的有59个,产生HR反应的有12个;对水稻致病力下降的有68个,其余突变体菌株对水稻致病力与野生菌株差异不明显。另外,267个突变体菌株中有146个无HR反应,其中有90个对水稻无致病力或者致病力下降。致病力的分析结果表明,获得的突变体是由Tn5插入Dickeya zeae染色体上不同的致病相关基因位点导...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
卫亚红 段敏 向照举 曲东 王瑶
【目的】敲除布洛芬福斯质粒文库克隆菌株４Ｆ６中的邻苯二酚－２，３－双加氧酶基因（Ｃ２３Ｏ），构建其Ｔｎ５插入突变体，为布洛芬降解调节因子的深入研究奠定基础。【方法】以构建好的３Ｇ７Ｔｎ５突变体菌株为基础，借助ｐＫＤ４６质粒的λ－ｒｅＤ同源重组酶，将转座子Ｔｎ５从菌株３Ｇ７中电击转化至４Ｆ６，消除ｐＫＤ４６质粒，敲除４Ｆ６菌株中的Ｃ２３Ｏ基因，测定出发菌株３Ｇ７、４Ｆ６及Ｔｎ５插入突变体菌株３Ｇ７－Ｇ９、３Ｇ７－Ｈ５、４Ｆ６－Ｇ９和４Ｆ６－Ｈ５间位苯环的裂解活性。【结果】４２℃条件下消除了Ｔｎ５插入突变体受体菌４Ｆ６中的ｐＫＤ４６质粒，构建了４Ｆ６－Ｇ９和４Ｆ６－Ｈ５突变体。Ｔｎ５转座子插入突变．．．
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李碧璇 张晴 朱辉 张忠明
为研究ROP(Rho-related GTPase of plants,ROP)在豆科植物共生固氮过程中的功能和作用机制,从百脉根逆转录转座子LORE1插入突变体库(http://www.kazusa.or.jp/lotus)中搜索到6个ROP相关基因突变体,通过分离和鉴定,得到不同突变体的M1代和M2代纯合体种子,对M2代进行表型鉴定及统计分析。结果表明:在早期共生表型的鉴定中,突变体与野生型植株相比,rop-like1植株的根瘤原基数明显下降,rop-like4植株的侵入线数和侵入线密度也明显下降;但
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
马欣 刘俊 乔俊卿 伍辉军 高学文
为了鉴定枯草芽孢杆菌定殖和促进植物生长相关基因,用携带转座子TnYLB-1的穿梭载体pMarA转化枯草芽孢杆菌OKB105菌株。高温诱变条件下,筛选了2 000个转座子插入突变的单克隆,构建了OKB105菌株的突变体文库。对随机挑选的15个突变体采用PCR及Southern杂交验证,结果表明:转座子TnYLB-1以单拷贝、随机方式插入到OKB105菌株的染色体上。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
裴俊清 段柳剑 张忠明
根据Mesorhizobium loti基因组信息,克隆nodA、nodB、nodD等基因的启动子序列,分别与报告基因构建相应的转录融合子(nod-lacZ),并分别导入中慢生型百脉根根瘤菌MAFF303099和广谱根瘤菌NGR234(Rhizobium sp.)中,利用百脉根根的抽提物作为诱导物,检测结瘤基因的表达。结果表明:在MAFF303099菌株中,百脉根根抽提物不能诱导nodA的表达;能诱导nodB和nodD1的表达;nodD2呈组成型表达;供试的5种不同的类黄酮化合物都不能诱导nodA基因表达
[期刊] 中国农业科学
[作者]
郑雪芳 刘波 朱育菁 陈德局 陈小强
【目的】研究青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)Tn5转座子突变菌株的异质性,筛选出无致病力高效生防菌株。【方法】利用已构建的青枯雷尔氏菌致病力参考指标"弱化指数(attenuation index,AI)"和接种番茄植株的生物测定法对60株供试的青枯雷尔氏菌Tn5转座子突变菌株进行致病力测定;利用高效离子交换色谱法研究不同致病力突变菌株的色谱行为异质性;构建色谱效价指数(chromatography titer index,CTIi),CTIi=Si/(S1+S2+S3)×100
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
巫益鸣 阮丽芳 彭东海 刘国强 孙明
通过携带Mini-Tn10转座子的温度敏感性质粒载体pIC333构建了苏云金芽胞杆菌YBT-1518菌株的插入突变体库。从突变体库中筛选得到1株芽胞不能在萌发剂L-丙氨酸诱导下萌发的突变株(命名为MA1),进一步的试验表明该突变株菌株的芽胞在其他氨基酸L-苯丙氨酸、L-缬氨酸和L-亮氨酸以及糖类萌发剂葡萄糖、果糖和蔗糖的诱导下也都不能萌发,表明MA1很可能属于新型的芽胞萌发缺陷突变株。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
俞咪娜 胡建坤 黄磊 于俊杰 尹小乐 聂亚锋 陈志谊 刘永锋
【目的】研究稻曲病菌致病力增强的ATMT突变菌株5062,为稻曲病菌致病机制解析、致病相关基因克隆提供方法基础。【方法】测定和观察5062的菌落直径、菌落形态、产孢能力等生物学特性,进一步利用TAIL-PCR和RACE技术克隆5062基因组的T-DNA侧翼基因,并比对分析基因的信息,最后利用RT-PCR检测突变基因的表达量。【结果】与野生型菌株相比,突变菌株5062田间接种表现为致病力增强,在MM和水琼脂培养基上生长速率减慢,产生大量分生孢子,而在PSA和TB3培养基上,其菌落形态、色素等方面与野生型无明显差异。TAIL-PCR扩增得到的紧邻T-DNA两侧的侧翼序列在野生型中不相邻。TAIL-...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
魏艺聪 潘初沂 李宏宇 鲁国东 雷财林 王宗华
为揭示稻瘟菌致病分子机制,创建了该菌T-DNA插入突变体库．部分突变体经表型分析,获得3个生长发育及致病性同时发生变异,5个生长发育正常但致病性变异及2个生长发育变异但致病性正常的突变体；以TAIL-PCR方法获得了这些突变体T-DNA插入位点及其边界序列,并用生物信息方法对被T-DNA标签的基因进行了分析,为进一步研究这些基因的功能提供了重要信息．
关键词：
稻瘟菌 T-DNA插入变异 生物信息
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
李倩 李贵阳 李杰 莫照兰
鳗弧菌(Vibrio anguillarum)的运动能力、菌膜形成能力、胞外蛋白酶产生能力等表型特征的变化与细菌的致病性相关。为了寻找影响鳗弧菌表型变化的基因，本研究使用转座子mini-Tn10 (pLOF/Kana)构建了鳗弧菌M3突变株文库，筛选影响表型变化的菌株及相关基因，证明了这些表型变化的突变子与毒力存在一定的相关性。对M3突变文库的1152突变子进行筛选，获得泳动能力改变的突变子1个(编号为6G＿1)，酪蛋白酶活性发生改变的突变子3个(编号为5A＿11、7B＿12和7E＿12)，明胶酶活性发生改变的突变子1个(编号为7H＿1)，以及菌膜形成能力发生显著变化的突变子3个(编号为5E＿2、6A＿2和6E＿12)。对转座子插入位点进一步分析显示，一个磷酸二酯酶相关基因突变引起泳动能力增强(P<0.05)，leuD、rseB和thiQ突变引起酪蛋白酶活性显著减弱(P<0.05)，potD突变引起明胶蛋白酶活性显著减弱(P<0.05)，leuO、ilvH和grpB的突变引起菌膜形成能力明显减弱(P
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
黄定宣 胡杨 孙光超 高小宁 尹志远 黄丽丽
【目的】筛选苹果树腐烂病菌T-DNA插入表型或致病突变体,为研究该病菌的表型及致病相关基因提供起始材料。【方法】从建立的T-DNA插入突变体库中,随机挑选230株突变体菌株进行表型观察及致病性测定,并对部分致病突变体进行TAIL-PCR侧翼扩增。【结果】大部分的突变体与野生型菌株03-8在表型及致病性方面无明显差异,仅30.87%的突变体表现出了明显的变化;其中16株突变体(占突变体总数的6.95%)致病性发生了明显的增强,而表型与03-8相比无明显的变化;20株突变体(占突变体总数的8.69%)致病性与03-8无显著性差异,但是表型发生了明显的变化;16.1%的突变体则同时表现出表型及致病性...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
徐传瑞 章建国 周俊初
采用盆栽结瘤实验法对从 6省市采集的 18份土样中分离的 16 0株大豆根瘤菌进行了结瘤与共生固氮效率的比较测定 ,从中筛选出固氮效率较高的菌株ZX2 0和SMH12。通过测定 2株菌的竞争结瘤能力 ,确认其可以进入小区田间试验。
关键词：
根瘤菌 高效菌株 分离筛选
[期刊] 林业科学研究
[作者]
张希涛 康丽华 马海宾 江业根
对海南、福建、广州、清新分离的根瘤菌和实验室保存的部分根瘤菌进行了解磷能力的研究,从200多株根瘤菌中筛选出40株具有解磷能力的菌株,通过测定根瘤菌在固体培养基和液体培养基中溶解无机磷和有机磷的能力,筛选出2株解磷能力较强的菌株G7-3和菌株DH001。菌株G7-3在无机磷和有机磷培养基中的解磷量分别是4.142、9.944μg.mL-1,与其它菌株有明显的差异;在无机磷液体培养基中,菌株DH001微克菌体解磷量为0.0867μg,和其它菌株有显著差异。对筛选出的菌株进行了16SrDNA测序分析,确定筛选出的菌株除H1-1-1和H2-1-2外,其它菌株均为根瘤菌。
关键词：
根瘤菌 解磷能力 解磷量
[期刊] 水产学报
[作者]
覃映雪 徐晓津 鄢庆枇 苏永全 刘力铭 李学刚
采用转座子mini-Tn10/Km构建了致病性溶藻弧菌的突变库,采用半固体双层平板初筛到73株运动缺陷突变株,初筛的突变株纯化及重复筛选后获得运动性缺陷表型稳定的突变株ND-01MM,Southern鉴定确定其为单位点插入。野生型菌株ND-01和运动缺陷突变株ND-01MM对致病性溶藻弧菌的天然宿主大黄鱼粘液的趋化、粘附以及在大黄鱼吞噬细胞内存活能力等生理功能的比较研究发现,溶藻弧菌运动缺陷后趋化及粘附能力均极显著下降(P0.05)。采用腹腔注射和浸泡两种方式感染大黄鱼,结果发现运动缺陷对浸泡感染的影响较为明显,但对腹腔注射的...
关键词：
溶藻弧菌 运动缺陷 转座子 毒力
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