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[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
丁丁 吕长平 王继华 崔光芬 吴学尉 张艺萍
以百合品种元帅(Acapulco)、卡萨布兰卡(Casablanca)的愈伤组织为试验材料,附加不同浓度的枯萎病菌毒素粗提液,用于抗尖孢镰刀菌无性系的离体筛选。结果表明,以体积分数75%的毒素培养基上培养10 d作为百合抗尖孢镰刀菌无性系筛选的选择压比较适宜,抗镰刀菌无性系的再生苗生长正常,叶片中过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、超氧化物歧化酶(SOD)活性均比未经筛选的对照株高,经人工接种枯萎病菌鉴定,2个百合品种抗尖孢镰刀菌无性系的再生植株均表现中抗枯萎病。
关键词：
百合 尖孢镰刀菌 无性系 枯萎病
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
郭垂宝 刘双清 马文月 韩军花 曹海佳 张小艳 廖晓兰
采用平板分离法、平板对峙法从龙牙百合内生菌中筛选获得了具有抑制灰葡萄孢菌活性的98号菌，其抑菌率为74%；对98号菌进行生理生化测定及16SrDNA序列分析，鉴定为唐菖蒲伯克霍尔德菌(Burkholderia gladioli)。通过单因素和正交试验优化该菌株的发酵条件和最适发酵培养基配方，结果表明，pH值为7、培养温度为32℃、接种量为发酵液体积的6%、250 mL三角瓶装100 mL牛肉膏蛋白胨液体发酵培养基、180 r/min的摇床培养5 d，其抑菌活性最大；优化后的最适培养基配方为硫酸亚铁0.15 g、玉米粉20 g、牛肉膏15 g，水1 L。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
郭垂宝 刘双清 马文月 韩军花 曹海佳 张小艳 廖晓兰
采用平板分离法、平板对峙法从龙牙百合内生菌中筛选获得了具有抑制灰葡萄孢菌活性的98号菌，其抑菌率为74%；对98号菌进行生理生化测定及16SrDNA序列分析，鉴定为唐菖蒲伯克霍尔德菌(Burkholderia gladioli)。通过单因素和正交试验优化该菌株的发酵条件和最适发酵培养基配方，结果表明，pH值为7、培养温度为32℃、接种量为发酵液体积的6%、250 mL三角瓶装100 mL牛肉膏蛋白胨液体发酵培养基、180 r/min的摇床培养5 d，其抑菌活性最大；优化后的最适培养基配方为硫酸亚铁0.15 g、玉米粉20 g、牛肉膏15 g，水1 L。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
刘梅 卢志军 王文君 郑建秋 黄俊生 吴学宏
为研究甘蓝感病(北农早生)和抗病(珍奇)品种种传尖孢镰刀菌Fusarium-CG和Fusarium-HM的培养滤液和粗毒素对种子发芽的影响,采用乙酸乙酯和乙醚萃取法提取粗毒素中的镰刀菌酸并利用HPLC法进行定量分析,利用粗毒素浸渍甘蓝幼苗根部测定其对幼苗的致枯萎作用。结果表明:Fusarium-CG和Fusarium-HM的培养滤液和粗毒素对种子的发芽具有明显的抑制作用;粗毒素浸渍甘蓝幼苗根部能够引起幼苗枯萎;其粗毒素中镰刀菌酸质量浓度分别为552和105μg/mL,并且粗毒素对甘蓝的致害作用随着镰刀菌酸含量的升高和处理时间的延长而加重,当用镰刀菌酸质量浓度为25μg/mL的粗毒素处理甘蓝幼苗...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
石乐娟 史雪叶 唐玲涵 李飞 杨胜俊 杨跃虎 刘晓周
【目的】探明尖孢镰刀菌胁迫下非洲菊根系基因表达的变化，挖掘非洲菊根系抗病菌胁迫的相关基因及信号通路等分子机制，为非洲菊根腐病防治提供理论参考。【方法】以健康非洲菊根系和被尖孢镰刀菌侵染96 h感病的非洲菊根系为材料，采用转录组测序技术对其进行转录组测序，筛选差异表达基因（DEGs），并进行GO功能注释和KEGG代谢通路富集分析，再通过实时荧光定量PCR验证转录组测序结果的可靠性。【结果】从尖孢镰刀菌侵染非洲菊根系获得10 218个DEGs，其中上调基因7 273个，下调基因2 945个。有3 401个DEGs隶属于72个转录因子家族，其中，数量最多的转录因子为MYB和AP2/EFR家族，其次为C2H2、bHLH、NAC和C3H等家族。GO富集结果显示，DEGs共注释到53个功能组，其中氧化还原过程、胞质溶胶、细胞分裂位点、膜组成成分、金属离子结合等的DEGs较多。KEGG代谢通路富集结果表明，DEGs显著富集在碳水化合物代谢、能量代谢、脂质代谢、氨基酸代谢等生物合成途径。3条碳水化合物代谢途径多数DEGs上调。光合作用途径和光合作用-天线蛋白途径中多数DEGs表现下调。在α-亚麻酸代谢途径中，共有49个差异表达基因被富集，其中4个脂氧合酶（LOX2S）基因和2个氢过氧化物脱水酶（AOS）基因，均下调表达。【结论】MYB、AP2/EFR、C2H2、bHLH、NAC和C3H等转录因子家族成员以及调控光合作用、碳水化合物代谢、脂质代谢等相关差异表达基因，可能在参与响应非洲菊抗根腐病胁迫应答中发挥了重要作用。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
李颖 关国华 舒石 颜耀祖
在获得尖孢镰刀菌棉花萎蔫专化型异核体菌株及其 3个稳定的不同核型分离子的基础上 ,选择孢子萌发时期的幼嫩菌丝制备粗酶提取液 ,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法进行了 7种同工酶分析。结果表明 ,酯酶和乳酸脱氢酶电泳图谱在 4个样品中完全一致 ;没有致病能力的菌株在葡萄糖 - 6-磷酸脱氢酶和苹果酸脱氢酶的表达量高于致病力强的菌株 ;致病力强的菌株没有乙醇脱氢酶的表达。在 4个样品中都没有检测到苹果酸酶和过氧化氢酶
关键词：
尖孢镰刀菌 异核体 同工酶
[期刊] 华北农学报
[作者]
李欣 崔秀明 刘迪秋 孙恬 郭爱玲 陈军
为了建立一种准确、快速检测三七根腐病病原真菌尖孢镰刀菌的实时荧光定量PCR方法,基于尖孢镰刀菌脂肪酸ω-羟化酶基因设计了实时荧光定量PCR的特异性引物对Fo-QF和Fo-QR,制备了该基因的重组质粒标准品,建立了尖孢镰刀菌的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法。从三七种植区采集到14个具有根腐病、黑斑病典型症状的三七病株及三七种植土壤样品,并提取了这些样品的总DNA,运用本研究建立的荧光定量PCR方法进行了检测。结果显示,本研究建立的实时荧光定量PCR检测方法特异性强,脂肪酸ω-羟化酶基因只以尖孢镰刀菌DNA为模板扩增出特异的PCR产物。此外,该方法灵敏度高,检测模板浓度可低至0. 35 pg/μL。构建的荧光定量PCR标准曲线Ct值与模板浓度呈良好的线性关系,熔解曲线的吸收峰单一,扩增效率好。利用该定量检测体系,能从几种不同的三七病株中快速检测出携带尖孢镰刀菌的根腐病病株,从而达到准确诊断的目的。本方法不仅能明确三七种植土壤以及三七病株中尖孢镰刀菌数量的动态变化,并且可以为三七土壤处理、根腐病的早期诊断和动态监测以及带病三七种子、种苗的快速分子检测提供技术支持。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
蔺国强 廖玉才 宫安东 李和平
从土壤中分离获得1株具有较强拮抗作用的细菌菌株X-42,经形态特征、16S rDNA序列分析,将其鉴定为解淀粉芽孢杆菌。该菌可产生一系列具有抑菌功能的代谢物,抑制禾谷镰刀菌生长。从X-42菌株发酵液中分离纯化代谢物,经硫酸铵沉淀的脂肽类物质用于抑菌分析,结果表明,来自X-42的脂肽物,既能直接破坏禾谷镰刀菌菌丝结构,也能影响分生孢子萌发,导致菌丝及孢子局部膨大。小麦开花期的田间赤霉病防治研究表明,在接种禾谷镰刀菌前和接种后施用拮抗菌X-42代谢物,均可有效防治赤霉病,其防治效果高达79%～88%,与化学杀菌剂多菌灵相当。
[期刊] 草业科学
[作者]
杨晓蕾 李建宏 姚拓 赵桂琴 窦嘉宁 魏恺全
木贼镰刀菌(Fusarium equiseti)是北方地区重要的植物病原菌之一,筛选对其具有拮抗作用的生防菌资源具有重要的意义。本研究以燕麦(Avena sativa)植株为材料,利用选择性培养基从燕麦根际分离、筛选菌株,采用平板对峙法筛选对木贼镰刀菌具有拮抗作用的菌株,并研究抑菌、促生特性。采用16S rRNA分子生物学技术,确定分离的木贼镰刀菌拮抗菌株的分类学地位。结果表明,经筛选后得到了6株具有拮抗作用的菌株,抑菌率41.84%～91.16%,其中有固氮能力的菌株有5株,固氮酶活性51.82～210.81 nmol·(h·mL)~(-1) (C_2H_4)。具有溶无机磷能力的菌株有5株,溶磷量46.14～135.47μg·mL~(-1),其中菌株DRT-3、菌株DRT-11、菌株DRT-17具有解有机磷的能力,解磷量分别为21.64、31.65和28.64μg·mL~(-1),具有分泌吲哚乙酸(IAA)能力的菌株6株,分泌量41.74～157.28μg·mL~(-1)。经16S rRNA基因序列对优良生防菌株初步鉴定,菌株DRT-2、DRT-8为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),菌株DRT-3为蕈状芽孢杆菌(Bacillus mycoides),菌株DRT-11为不动杆菌(Acinetobacter sp.),菌株DRT-17和DRT-18为荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)。本研究筛选出对燕麦根腐病致病菌有生防作用的细菌,为后续对燕麦根腐病防治研究奠定了基础。
关键词：
木贼镰刀菌 生防菌 拮抗作用 促生特性
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
孙莉 宋松 邓旭辉 孙逸飞 文春燕 吕娜娜 李荣 沈其荣
[目的]碳酸氢铵在土壤中对尖孢镰刀菌生长具有显著的抑制作用,通过比较碳酸氢铵、亚硝酸钠和硝酸钠的抑菌作用,以期探明碳酸氢铵抑制尖孢镰刀菌的作用机制。[方法]采用土壤培养和平板培养相结合的试验方法,研究不同含量碳酸氢铵、亚硝酸钠和硝酸钠对枯萎病病原菌尖孢镰刀菌黄瓜专化型、西瓜专化型以及甜瓜专化型生长的影响,同时研究了硝化抑制剂双氰胺对碳酸氢铵杀菌作用的影响,最后采用平板培养法分析了培养基pH值的变化对碳酸氢铵抑菌作用的影响。[结果]碳酸氢铵和亚硝酸钠均可以有效抑制3种专化型尖孢镰刀菌在平板上的生长和土壤中的数量,且抑制作用随其含量的增加显著增加,但硝酸钠则无影响;培养基pH值在一定范围内的变化不...
关键词：
碳酸氢铵 亚硝酸 尖孢镰刀菌 硝化抑制剂
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
董文盼 杨纪潇 杨项明 吕明慧 朱彦泽 蒋春号
[目的]本文构建了西瓜枯萎病菌—尖孢镰刀菌西瓜专化型（Fusarium oxysporum f. sp. niveum，FON）的重组酶聚合酶扩增技术（recombinase polymerase amplification， RPA）的快速检测体系，以期为田间西瓜枯萎病的快速检测提供技术支持。[方法]从NCBI网站下载包括西瓜枯萎病菌在内的11种病原真菌的基因组序列，利用SeqHunter2软件进行生物信息学分析，经比对得到4个FON的特异性基因片段，并对其进行引物设计和筛选。利用聚合酶链式反应（PCR）验证引物的特异性和灵敏度，而后利用建立的RPA检测体系对引物的特异性和灵敏度进行验证，最后进行人工接种FON的西瓜植株的RPA检测与评价。[结果]本文首次报道了FON的RPA检测体系，并对DNA恒温快速扩增试剂盒的扩增体系进行最佳反应时间（40 min）和最适反应温度（30℃）的摸索，得到其最佳反应体系的检测下限为100 pg/μL。利用DNA恒温快速扩增试剂盒（胶体金试纸条型）进行扩增时，只需在38℃反应12 min，取50 μL稀释20倍的扩增产物用胶体金试纸条进行检测，5 min后即可进行结果的判断，检测下限为100 pg/μL。[结论]本文通过多种检测方法对RPA扩增结果进行检测，均得到一致的结果，且建立的RPA检测体系能够从温室接种FON之后未显症的西瓜植物组织基因组DNA中检测到FON，可为田间西瓜枯萎病早期的快速检测提供技术支持。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
孙玲 褚小静 郝宇 张洪滨 梁元存
【目的】黄瓜枯萎病是黄瓜生产中的重要病害,其病原菌为尖孢镰刀菌黄瓜专化型(Fusarium oxysporumf.sp.cucumerinum)。研究旨在明确尖孢镰刀菌黄瓜专化型编码磷脂酶C(phospholipase C,PLC)的FoPLC4在调控分生孢子形成和致病性等方面的功能。【方法】采用生物信息学方法,确定FoPLC4在染色体上的位置,分析FoPLC4结构。基于尖孢镰刀菌番茄专化型基因组数据库,采用特异性引物克隆黄瓜枯萎病菌FoPLC4。根据同源重组原理构建携带潮霉素磷酸转移酶(hygromycin phosphotransferase,HPH)基因的敲除载体,利用PEG(polye...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
贾正燕 王昌梅 张啸 赵兴玲 吴凯 尹芳 杨斌 梁承月 张无敌
为减少三七根腐病的发生，尝试采用8种中药(姜黄、茵陈、金银花、马齿苋、黄芩、紫花地丁、黄连、黄柏)水提液对三七根腐病原菌中尖孢镰刀菌进行抑制，采用二倍稀释法测定8种中药对尖孢镰刀菌的最小抑菌浓度，采用生长速率法测定中药水提液对尖孢镰刀菌的抑菌活性。结果表明：8种中药水提液对尖孢镰刀菌均有抑制效果，其中，金银花水提液对尖孢镰刀菌的抑菌效果最佳，最大抑菌率可达75%,EC50最小，为5.55 mg/mL；黄连、金银花、黄芩对尖孢镰刀菌的MIC≤1 mg/mL，说明其对尖孢镰刀菌的有效起始抑菌浓度较低。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘波 胡桂萍 肖荣凤
【目的】分析不同寄主尖孢镰刀菌脂肪酸生物标记的结构组成和分布特性,建立尖孢镰刀菌寄主专化型脂肪酸生物标记鉴别模型。【方法】通过脂肪酸鉴定系统(Sherlock MIS)对来自于西瓜、香蕉和花生寄主的22株尖孢镰刀菌进行脂肪酸生物标记检测,采用聚类分析方法分析尖孢镰刀菌脂肪酸的同质性,采用主成分分析提取尖孢镰刀菌寄主专化型特征脂肪酸,利用Bayes逐步判别方法,建立尖孢镰刀菌寄主专化型判别模型。【结果】从供试的22个菌株中检测到8种脂肪酸,其中常见脂肪酸有6条,相对含量60%以上的主要脂肪酸有16:0、18:0和18:2 CIS 9,12/18:0a。对常见脂肪酸进行聚类分析,结果表明脂肪酸与尖...
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