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[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
尹慧 陈莉 李晓艳 陈秋明 义鸣放
为筛选出适合百合叶片RNA提取方法,以铁炮百合‘白天堂’组培苗叶片为材料,比较了改进的CTAB、SDS及传统的Trizol、CTAB、SDS方法提取RNA的效果。结果表明:不论传统及改进的SDS法和Trizol法均不能有效去除百合叶片组织中的多糖、蛋白等杂质,传统CTAB法提取RNA存在DNA污染。针对百合叶片组织富含多糖多酚的特点,改进了CTAB法,采用醋酸钠及无水乙醇去除多糖,酚/氯仿反复抽提去除蛋白,DNaseⅠ去除DNA,LiCl有效沉淀RNA。采用此方法提取的RNA条带清晰,经紫外光谱分析D260/D280比值为2.0,D260/D230为2.1,电泳28S、18S条带清晰,比值约为...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张延龙 徐炎 王洁纯 杨志娟
对东方百合杂交系(Orientalhybrids)中西西(Sissi)品种的叶片、叶柄进行了离体培养研究。结果表明,诱导西西叶片、叶柄分化出小鳞茎的培养基为S4(MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L),诱导率分别为22.2%,11.1%。S4培养基诱导的小鳞茎粗壮,再分化能力强,诱导率相对较高,宜采用MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L培养基作为继代培养基;生根培养基为1/2MS+IBA0.3mg/L。
关键词：
东方百合 组织培养 叶片 叶柄 小鳞茎
[期刊] 华北农学报
[作者]
徐玲娜 汪阳东 陈益存 周冠 张小平
本研究测得油桐叶片和种仁总糖含量分别为75.20,32.80 mg/g,总酚含量分别为15.75,0.57 mg/g,在此基础上对TRIzol法、CTAB-LiCl法进行改良,分别提取出高质量的种仁、叶片总RNA,并与异硫氰酸胍法及NOGEN试剂盒法进行比较,结果表明:改良TRIzol法提取的油桐种仁总RNA OD260/OD280稳定在1.9～2.0,28S rRNA和18S rRNA条带清晰完整,RNA产率较高,改良CTAB-LiCl法得到的种仁总RNA有部分降解,异硫氰酸胍法则对小分子盐类去除不够充分,而试剂盒提取出的油桐种仁总RNA有少许降解且有DNA杂质污染。上述4种方法中只有改良C...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
陈美霞 陈富成 颜克伟 刘晓倩 徐建堂 陶爱芬 祁建民
红麻叶片中富含多糖、多酚和其他次生代谢物质,影响其RNA的产量和质量.本研究应用CTAB法、热硼酸法、SDS法、Trizol法和商品化试剂盒5种方法提取福红992幼嫩叶片总RNA,并对各方法提取效果进行比较.结果表明,热硼酸法效果最佳,其次是CTAB法和SDS法,而Trizol法、试剂盒提取效果不理想.采用热硼酸法提取的红麻叶片总RNA能够成功进行反转录和制备cDNA.
关键词：
红麻 叶片 总RNA提取
[期刊] 华北农学报
[作者]
齐建双 王彦玲 铁双贵 卢彩霞 岳润清 韩小花 燕树锋 孙若楠
为比较不同方法提取的玉米叶片蛋白质对双向电泳效果的影响。采用TCA-丙酮沉淀和TRIzol试剂盒2种方法,提取国审玉米品种郑单958叶片全基因组蛋白质,并对提取的蛋白质样品进行双向电泳。结果表明:TCA-丙酮方法提取的蛋白质一向水平聚焦电压上升缓慢且达不到程序设置的电压,而TRIzol试剂盒方法实时监测图与程序设置图相吻合;对电泳胶图分析后可知,TRIzol试剂盒法分离出的蛋白点多于900个,低丰度蛋白质得到充分显现,大多数蛋白点分子量为20~80 k Da,p H值为4~7,蛋白点的形状较规则;TCA-丙酮沉淀法分离出的蛋白点仅有350个,表明样品中蛋白质分离种类较少,高丰度蛋白质过度显现,...
关键词：
玉米叶片 蛋白质提取方法 双向电泳
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
荣健 周韬 王平 孙吉康 彭昕
蚬壳花椒种子中富含油脂、多糖和多酚类等成分复杂的次生代谢物质,影响其总RNA的提取,一般的提取方法无法获得总RNA或者总RNA降解严重。本实验采用改良CTAB法、TRNzol法、试剂盒法、传统CTAB法提取总RNA,通过琼脂糖凝胶电泳,核酸蛋白检测仪检测以及RT-PCR验证等对提取结果进行比较与分析。结果表明:TRNzol法、试剂盒法、传统CTAB法未能从蚬壳花椒种子中提取到总RNA,改良CTAB法能提取完整性较好、纯度较高的RNA,28S及18S条带清晰整齐,D260/D280值为2.07,提取的总RN
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
孟晓庆 侯智霞 张兰 朴蕾
【目的】探讨榛子总RNA提取的有效方法,为今后开展榛子的分子生物学等研究奠定基础。【方法】以榛子的成龄叶片、幼嫩叶片和雄花芽为试材,采用植物RNA提取试剂盒、Trizol法、改良的CTAB法Ⅰ、改良的CTAB法Ⅱ、CTAB法和改良的SDS法提取其总RNA,通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计和PCR检测所提取总RNA样品的品质。【结果】除了Trizol法,其他5种方法都能提取到总RNA,但是改良的CTAB法Ⅰ更适合榛子幼嫩叶片、成龄叶片和雄花芽总RNA的提取,此方法提得的总RNA较完整,条带清晰,品质较优,28SrRNA亮度约是18SrRNA的2倍,且无降解现象。经RT-PCR验证,以改良的CT...
关键词：
榛子 总RNA CTAB SDS
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
尹泽超 王玉婷 王耀杰 桑利群 罗秋香 孟凡娟
为了获取高质量的西藏巨柏叶片蛋白质,分别采用酚抽提法、TCA/丙酮法和改良的TCA丙酮法3种方法对西藏巨柏叶片进行总蛋白的提取,同时利用蛋白试剂盒(The 2-D Quant Kit)对蛋白质的浓度和纯度进行了分析测定,并通过蛋白质斑点数量及分布特征,最后确定了最佳蛋白提取方法。结果表明:对样品研磨的精细程度、丙酮清洗沉淀次数等操作细节均能影响提取结果,同时采用改良的TCA丙酮法提纯后的结果最佳。说明改良的TCA丙酮法可应用于西藏巨柏叶片后续的蛋白质组学研究。
关键词：
巨柏 叶片 蛋白 双向电泳
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李佳 沈斌章 韩继祥 甘莉
一种有效提取油菜叶片总ＤＮＡ的方法李佳，沈斌章，韩继祥，甘莉（华中农业大学中心实验室武汉４３００７０；华中农业大学农学系武汉４３００７０）关键词ＤＮＡ，提取方法，试剂，国产，油菜ＡＥＦＦＥＣＴＩＶＥＰＲＯＣＥＤＵＲＥＦＯＲＥＸＴＲＡＣＴＩＮＧＴＯＴＡ...
关键词：
DNA,提取方法,试剂,国产,油菜
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
孙思 陈洁玲 舒灿伟 王军 王新荣 周而勋
分别采用Trizol法、CTAB法、异硫氰酸胍法、SDS法和Omega试剂盒法从短枝木麻黄小枝中提取总RNA。结果表明:用Trizol法和异硫氰酸胍法没有提取到木麻黄总RNA;用CTAB法提取的RNA发生了降解;只有SDS法和Omega试剂盒法成功提取到木麻黄小枝RNA,但质量均没有达到试验要求。对提取效果相对较好的SDS法进行改进,主要是加入去除次生代谢物质的步骤。经检测,改进后的SDS法提取的木麻黄小枝总RNA纯度高、完整性好,能够满足RT-PCR分析等分子生物学研究的要求。
关键词：
木麻黄 小枝 总RNA 提取方法
[期刊] 西南农业学报
[作者]
赵洋 段承俐
从三七种子中提取高质量的RNA。采用CTAB法、天根试剂盒法、普通Trizol法、改良Trizol法对三七种子总RNA进行提取比较。结果表明,改良Trizol法提取的三七种子RNA纯度好、浓度高、无DNA污染,且成本低廉、操作简单,质量符合后续的基因克隆、cDNA文库构建、基因表达等分子生物学研究的要求。
关键词：
三七种子 总RNA 提取方法
[期刊] 华北农学报
[作者]
雷玲 王红霞 张志华 何富强 高仪 赵书岗 孙红川
以13个河北核桃优系(罗汉头、南安庄、艺核1号、C12、J16、M3、H12、C15、M10、MB、C13、M9、A7)的叶片为材料,比较了高盐低pH法(2%PVP40,3%PVP40)、SDS法(0.5%,1%,1.5%)和CTAB法(2%,3%)提取基因组DNA的效果,旨在筛选出适合河北核桃DNA提取的最佳方法,为进一步开展河北核桃的分子群体遗传研究奠定基础。通过紫外分光光度计法和琼脂糖凝胶电泳等方法对所提取的DNA样品进行检测,比较所得DNA的纯度和质量。结果表明,几种提取方法均能提取到核桃叶片的基因组DNA,其中含3%PVP40的高盐低pH法所提取的DNA浓度适中,蛋白质、RNA、多糖...
关键词：
河北核桃 叶片 基因组DNA 提取 方法
[期刊] 西南农业学报
[作者]
张宇 唐志鹏 秦荣耀 焦丁华 王长江
【目的】采用4种不同方法进行金柑叶片蛋白质提取的相关研究,摸索出一套适合金柑叶片蛋白质的提取方法,也为其他近缘植物高质量蛋白质的提取提供科学参考依据。【方法】选择‘桂金柑一号’为供试材料,分别采用Tris-HCl提取法、尿素提取法、DTT/丙酮提取法和TCA/丙酮提取法提取叶片组织蛋白质,分析比较获得的蛋白质产率、单向电泳图和双向电泳图。【结果】不同方法的提取效果各异,Tris-HCl提取法提取的蛋白质产率、单向电泳以及双向电泳结果较理想,单双向电泳图辨识度高,蛋白点数丰富,蛋白点整齐且少有纵横纹现象。【结论】Tris-HCl提取法能够兼顾产率和质量,在4种方法中综合提取效果最好,是适用于金柑叶片蛋白质提取的理想方法。
关键词：
金柑 蛋白质 Tris-HCl法
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
宗建伟 李晓倩 张创 赵小杰 杨雨华
为探明百合响应盐胁迫的生理特性和综合评价百合耐盐性，以OT杂交系百合‘红色宫殿’（Lilium‘Red palace’）种球为试材，设置不同浓度（0、50、100、150、200 mmol/L)NaCl处理，分析盐胁迫对其光合色素、光合参数、渗透调节物质及叶片解剖结构的影响，并对其指标进行相关性和主成分分析。结果显示，随着胁迫时间的延长，百合叶片叶绿素a(Chl a）和叶绿素b(Chl b）含量降幅明显，游离脯氨酸（Pro）、可溶性蛋白含量持续升高，而丙二醛含量在50～150 mmol/L NaCl处理条件下呈先升后降的趋势，在200 mmol/L NaCl处理条件下则呈现升高趋势；胁迫30 d时，随NaCl浓度增加，叶片净光合速率（P_n）、蒸腾速率（T_r）被抑制，气孔导度（G_s）减小，胞间CO_2浓度（C_i）呈先降低后升高趋势，而水分利用效率（WUE）呈先升高后降低趋势；盐浓度的持续升高，百合叶片与花蕾生长受抑制，叶片解剖结构指标除海绵组织厚度增大外，叶片厚度（LT）、上表皮厚度（UE）、下表皮厚度（LE）、栅栏组织厚度（PT）均呈减小趋势，组织结构疏松度（SR）增大，栅海比（P/S）则减小；主成分分析结果显示P_n与T_r、Chl b、LT呈显著正相关，与Pro呈显著负相关，说明100 mmol/L盐浓度为百合的耐盐阈值，P_n、T_r、G_s、Chl b、LT和Pro可作为评价百合耐盐能力的有效指标。以上结果表明，低盐胁迫下，百合主要通过降低T_r、G_s、C_i及累积渗透调节物质以缓解盐害；高盐胁迫下，百合生长受阻，叶片解剖结构抗逆性减弱，非气孔因素是限制P_n的主要因素。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
杨秀梅 瞿素萍 王丽花 崔光芬 彭绿春 王继华
以百合鳞片为材料,采用改良的CTAB法获得了高质量的基因组DNA。通过影响PCR反应各因子的优化,建立了适合百合的RGA-PCR反应体系:25μl体系中含30 ng模板DNA、2.5 mmol/L MgCl2、0.2 mmol/L dNTPs、0.6μmol/L引物及1.5 UTaq酶。扩增程序为:94℃预变性5 min,94℃变性1 min,44℃退火1 min,72℃延伸2 min,40个循环;最后72℃延伸7 min。利用该体系对35个百合品种进行RGA-PCR,表明该反应体系具有较好的稳定性和可靠性。
关键词：
百合 DNA提取 RGA-PCR
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