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[期刊] 林业科学研究
[作者]
亓倩 于淑惠 孙涛 王雪庆 刘博文 杨璞 陈晓鸣
［目的］本研究欲利用Ｂａｃ－ｔｏ－Ｂａｃ表达系统，在Ｓｆ９细胞中表达ＷＳ。［方法］将ＷＳ编码序列克隆到质粒ｐ ｆａＳｔＢａｃ～（ｔＭ）Ｈｔ Ｂ后，转化大肠杆菌ＤＨ１０Ｂａｃ～（ｔＭ），经抗性和蓝白斑筛选，获得重组杆粒ｒ ＢａｃＭｉＤ／ＥｐＥｌ ＷＳ。将ｒ ＢａｃＭｉＤ／ＥｐＥｌＷＳ转染Ｓｆ９细胞。［结果］免疫荧光标记检测表明：ＷＳ在受感染细胞的细胞质中表达。［结论］本研究成功表达了白蜡虫ＷＳ，为白蜡虫ＷＳ的生化特性研究奠定了基础。
[期刊] 中国林业科学研究院
[作者]
孙涛
白蜡虫(Ericerus pela Chavannes)是我国具有重要经济价值的资源昆虫,其2龄雄幼虫所分泌的白蜡是一种天然高分子化合物,被广泛应用于机械、医疗、食品、化妆品等诸多领域。研究表明,不同生物体内存在保守的蜡酯合成途径,在不同生物中,蜡酯最终都是在蜡酯合酶(wax synthase,WS)的催化下由长链脂肪酸和长链脂肪醇通过酯化反应形成的,因此,WS是催化蜡酯合成最关键的酶。本研究在前期鉴定到白蜡虫ws基因的基础上,围绕基因表达动态、基因体内功能和体外活性,采用实时荧光定量PCR技术(Real
[期刊] 林业科学研究
[作者]
刘博文 王雪庆 孙涛 亓倩 于淑惠 杨璞 陈晓鸣
白蜡虫（ＥｒｉｃＥｒｕｓ ｐＥｌａ）是我国特有的资源昆虫，泌蜡是白蜡虫二龄雄虫最为特化的性状［１］。白蜡虫分泌的白蜡在食品、医药、纺织等行业具有重要的经济价值［２］。白蜡的主要成分是２６酸２６酯［３］，已有研究表明，蜡酯的生物合成在动植物中存在保守途径［４］。蜡酯生物合成的第一步由脂酰辅酶ａ还原酶催化脂酰辅酶ａ转化为脂肪醇，第二步由蜡酯合酶（Ｗｓ）催化脂肪醇和脂肪酸的酯化反应［５］。Ｗｓ
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
林董 何柳 谢荔岩 吴祖建 林奇英 谢联辉
应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)获得水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)的4个基因NS2、NS3、CP和SP,并将它们克隆至pMD-18-T载体上.得到的重组质粒pMD-18-T-NS2、pMD-18-T-NS3、pMD-18-T-CP和pMD-18-T-SP经XbaⅠ/HindⅢ双酶切,分别与经相同方法酶切的苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa california nuclear polyhedrosis virus,AcM-NPV)转移载体pFastBacHTb相连接,构建重组转移质粒pFastBacHTb-X(pFastBacHTb-NS2、p...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘田田 蒋向 许晓东
【目的】研究苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)晚期表达因子lef-10在宿主细胞Sf9中的时空表达及定位,为进一步研究lef-10的功能提供理论基础。【方法】利用不同的特异引物,通过PCR方法扩增lef-10及innateP-lef-10目的片段,将目的片段分别克隆到载体pTriEx-SP-GFP上,得到重组质粒pTriEx-lef10-GFP和pTriEx-innateP-lef10-GFP,经过双酶切检测构建载体。将重组质粒分别与Bacmid共转染Sf9细胞,用得到的重组病毒分别于4,8,16,24,36h再次感染宿主细胞;用激光共聚焦显微镜观察lef-10的表达及亚细胞定位情况。...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
欧艳梅 许晓东
【目的】构建包含Ｓｆ－ｃａＳｐａＳｅ－１反向重复序列的重组杆状病毒ｖａｃＭＮｐｖ－ｄＳｃａＳｐ，并在草地贪夜蛾（Ｓｆ９）细胞中表达Ｓｆ－ｃａＳｐａＳｅ－１双链ＲＮａ，用以抑制Ｓｆ９细胞的凋亡，为未来优化杆状病毒表达系统提供试验依据。【方法】将Ｓｆ－ｃａＳｐａＳｅ－１反向重复序列构建到ｐＢａｃ５上，与ａｃＭＮｐｖ ＢａｃＭｉｄ共转染Ｓｆ９细胞产生重组杆状病毒，用ＲＴ－ｐｃＲ和ｐｉ活细胞染色方法，分别检测Ｓｆ－ｃａＳｐａＳｅ－１ＭＲＮａ含量及Ｓｆ９细胞的凋亡情况。【结果】ｐｃＲ和双酶切检测结果表明，成功构建了重组质粒ｐＢａｃ５－ｄＳｃａＳｐ，并得到重组杆状病毒ｖａｃＭＮｐｖ－ｄＳｃａＳｐ。ｐｉ染色．．．
[期刊] 华北农学报
[作者]
赵洁 梁爱华 付月君
为了研究Bm K IT提高Ac MNPV抗虫活性的作用机制,将Bm K IT基因插入到Ac MNPV中形成重组病毒。采用重组单价病毒Ac MNPV-Bm K IT(IE1)、Ac MNPV-Bm K IT(P10)、Ac MNPV-Bm K IT(PH)和一种重组双价病毒Ac MNPV-Bm K IT(P10)-vcath(PH),通过四唑盐比色法(MTT)和蛋白质印迹法(Western Blot)分析了Bm K IT在Ac MNPV的3个启动子调控下对Sf9细胞增殖和细胞凋亡的影响,结果显示,感染病毒36,48 h Bm K IT在不同启动子调控下表达量从高到低依次为PH、P10、IE1。同...
[期刊] 华北农学报
[作者]
赵洁 梁爱华 付月君
为了研究Ｂｍ Ｋ ＩＴ提高Ａｃ ｍＮＰＶ抗虫活性的作用机制，将Ｂｍ Ｋ ＩＴ基因插入到Ａｃ ｍＮＰＶ中形成重组病毒。采用重组单价病毒Ａｃ ｍＮＰＶ－Ｂｍ Ｋ ＩＴ（ＩＥ１）、Ａｃ ｍＮＰＶ－Ｂｍ Ｋ ＩＴ（Ｐ１０）、Ａｃ ｍＮＰＶ－Ｂｍ Ｋ ＩＴ（ＰＨ）和一种重组双价病毒Ａｃ ｍＮＰＶ－Ｂｍ Ｋ ＩＴ（Ｐ１０）－ＶｃＡＴＨ（ＰＨ），通过四唑盐比色法（ｍＴＴ）和蛋白质印迹法（ＷＥｓＴＥｒＮ ＢｌｏＴ）分析了Ｂｍ Ｋ ＩＴ在Ａｃ ｍＮＰＶ的３个启动子调控下对ｓｆ９细胞增殖和细胞凋亡的影响，结果显示，感染病毒３６，４８ Ｈ Ｂｍ Ｋ ＩＴ在不同启动子调控下表达量从高到低依次为ＰＨ、Ｐ１０、ＩＥ１。同．．．
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
朱善元 王安平 吴双 王永娟 左伟勇 洪伟鸣
根据禽腺联病毒Rep基因序列设计2对引物,分别扩增出Rep78和Rep52基因,将其克隆至杆状病毒双表达载体pFastBacDual,获得重组穿梭质粒pFastBacDual-Rep,将其转化到E.coli DH10Bac感受态细胞中,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组病毒表达质粒rBacmid-Rep。在脂质体的介导下转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒rBac-Rep。SDS-PAGE结果分析表明,Rep78、Rep52均获得了表达,Western blot结果显示表达的重组蛋白能够与Rep52多抗反应,具有良好的反应原性。结论:禽腺联病毒的非结构蛋白Rep78、Rep52基因在昆虫细胞中获得了...
关键词：
禽腺联病毒 Rep基因 昆虫细胞 表达
[期刊] 华北农学报
[作者]
王芳 胡波 任雪枫 范志宇 张则斌 徐为中 何孔旺
用RT-PCR方法对ConA刺激后的新西兰白兔外周血淋巴细胞(PBMC)扩增家兔γ-干扰素(IFN-γ)基因并进行测序,测序结果显示,与GenBank公布的序列核苷酸同源性达到99.4%～99.6%,氨基酸同源性为98.8%～99.4%;然后通过克隆、转化将家兔γ-干扰素基因转入转移载体pFastBacTM1,得到重组转移载体pFastBacTM1-IFN-γ,用pFastBacTM1-IFN-γ转化含有穿梭载体Bacmid的大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,经筛选得到重组穿梭载体Bacmid-IFN-γ,用此质粒转染Sf9昆虫细胞,得到重组病毒rAcV-Bac-IFN-γ,经RT-PCR鉴定...
关键词：
家兔 γ-干扰素 克隆 重组杆状病毒
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
孟姣 于欢 周斌 王敦
【目的】在昆虫草地贪夜蛾细胞（Ｓｆ９）中表达一种能专一阻断昆虫钠、钾离子通道的神经毒素基因ＲｊＡＡ１７ｆ。【方法】运用杆状病毒真核表达系统表达ＲｊＡＡ１７ｆ毒蛋白，并用蛋白质印迹对其进行检测；测定ＲｊＡＡ１７ｆ毒蛋白引起健康棉铃虫中肠膜电位的变化，并对其毒力进行测定。【结果】通过重组杆状病毒质粒的转染和ＷｅＳｔｅＲｎ ｂｌｏｔ检测验证，神经毒素基因ＲｊＡＡ１７ｆ的重组ｂＡｃｍｉｄ已经成功转染到Ｓｆ９细胞中，且在Ｓｆ９中表达出与预测大小一致的ＲｊＡＡ１７ｆ目的蛋白；此毒蛋白作用于棉铃虫中肠３～１２ｈ后，中肠膜电位与ｃＫ相比差异显著，且随着作用时间的延长，棉铃虫中肠膜电位呈逐步升高的趋势，作用９ｈ．．．
[期刊] 林业科学
[作者]
陈晓鸣 王自力 陈勇 赵杰军 叶寿德 王绍云
白蜡是一种由白蜡虫2龄雄若虫分泌的天然化工原料。传统白蜡生产采用"高山产虫、低山产蜡"的异地生产模式。本研究在白蜡虫生物学、生态学特征基础上构建白蜡虫同地产虫产蜡生产新模式。白蜡虫具有雌虫先孵化,雄虫后孵化特征,卵从10℃以上开始孵化。在15～20℃条件下,若虫16～20天孵化完毕,雌虫孵化高峰期在第9～11天,雄虫孵化高峰期在第14～15天;在25℃条件下,若虫约12天孵化完毕,雌虫孵化高峰期在第4～5天,雄虫孵化高峰期在第10～11天;在30℃条件下,若虫约10天孵化完毕,雌虫孵化高峰期在第3～5天,雄虫孵化高峰期在第6～8天。根据不同温度下白蜡虫孵化速率,建立雌虫孵化的回归方程为:D=1...
[期刊] 林业科学研究
[作者]
陈晓鸣 陈勇 周朝鸿 王自力 叶寿德 王绍云
本文对云南昆明、昭通和四川金口河三个不同地理种源白蜡虫的泌蜡状况进行了研究。结果表明，昆明虫泌蜡历时最长，泌蜡量最高，昭通虫泌蜡历时和泌蜡量次之，金口河虫泌蜡历时短，泌蜡量低。在泌蜡周期中，白蜡虫泌蜡有高峰期，昆明虫泌蜡高峰期在泌蜡后５０ｄ，昭通虫在泌蜡后３０ｄ，金口河虫在泌蜡后２０ｄ。酯酶同工酶和过氧化物酶同工酶测定结果表明，三个不同地理种源的白蜡虫种群已产生了分化，昆明种虫与昭通种虫分化较小，昆明种虫和昭通种虫与金口河种虫的分化较大。
关键词：
白蜡虫,地理种源,泌蜡,同工酶
[期刊] 水产学报
[作者]
黄锋涛 熊海林 曹胜波 熊传喜 王敏 王卫民 吴兵 刘玉林 刘学芹
为构建基于杆状病毒表达系统的CCV新型亚单位疫苗,将CCV的囊膜蛋白基因ORF6克隆至杆状病毒转座载体pFastBacTM 1质粒中,并将阳性重组转座质粒转化进含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,获得重组子rBacmid-ORF6。在脂质体介导下将该重组子转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒AC-ORF6。AC-ORF6感染的sf9昆虫细胞,经超薄切片电镜观察,可见重组杆状病毒呈多粒包埋,经间接免疫荧光、Western-blotting检测,CCV的ORF6蛋白可以在感染了AC-ORF6的sf9细胞中表达。研究表明,获得了插入ORF6基因的重组杆状病毒,并且该基因可以在重组杆状...
[期刊] 华北农学报
[作者]
王凤芝 温立斌 何孔旺 姚火春 王小敏
为了鉴定类猪圆环病毒P1 VP1蛋白能否在体外自组装成病毒样颗粒(VLPs),首先PCR扩增P1 ORF1基因,利用p Fast BacTM1载体构建重组质粒,通过脂质体转染在Sf9细胞中表达P1 ORF1基因。然后通过RT-PCR技术及Western Blot分别从转录和蛋白质水平上鉴定该基因的表达,应用透射电镜观察该蛋白质是否形成了VLPs。结果显示,转染Sf9细胞后,第5天开始出现细胞病变;从接毒细胞中提取总RNA,经Recombinant DNaseⅠ处理除去基因组DNA后,RT-PCR能够扩增出362 bp的目的片段;收获接毒后72 h的细胞,Western Blot分析显示,P1 ...
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