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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
周艺琳 王正磊 许媛媛 韩先干 PHOUTHAPANE Vanhnaseng 苗晋锋
[目的]本试验旨在探讨白藜芦醇对乳房链球菌感染引起乳腺细胞氧化应激的影响及机制。[方法]先用15 μmol·L~(-1)白藜芦醇（resveratrol）处理小鼠乳腺上皮细胞（EpH_(4)-Ev）4 h，再加入乳房链球菌（MOI = 10）共孵育3 h，收集样品；通过生化试剂盒（硝酸还原酶法、比色法、微量法等）、流式细胞术、显微镜观察、Western blot、RT-qPCR等方法检测相关指标的变化。[结果] S.uberis感染可显著提高EpH_(4)-Ev细胞活性氧（ROS）水平和一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）含量、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、乳酸脱氢酶（LDH）、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAGase）、超氧化物歧化酶（SOD）活性，降低总抗氧化能力（T-AOC）水平。白藜芦醇预处理后可显著降低ROS水平、NO含量、iNOS、LDH、NAGase活性，显著提高T-AOC水平，进一步提升SOD活性。在分子水平上，S.uberis感染显著提高EpH_(4)-Ev细胞血红素加氧酶1（HO-1）、NAD(P)H：醌氧化还原酶1（NQO1）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽S-转移酶（GST）mRNA与核因子E2相关因子2（Nrf2）蛋白的表达水平，而白藜芦醇预处理对其有进一步提升作用。显微镜观察发现白藜芦醇预处理可以明显改善由S.uberis感染引起的小鼠乳腺上皮细胞发生皱缩。[结论]白藜芦醇可以有效缓解乳房链球菌感染引起乳腺细胞的氧化应激，这可能与白藜芦醇激活Nrf2蛋白并促进其下游抗氧化基因表达相关。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
扶绍东 王子菁 王正磊 黄代钏 石皖荣 苗晋锋 张明智
[目的]本试验旨在探讨Streptochlorin对金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus，S.aureus）感染引起小鼠乳腺上皮细胞氧化应激的影响及机制。[方法]采用Streptochlorin预处理小鼠乳腺上皮细胞（EpH4-Ev）2h，适时加入S.aureus（MOI=10）共孵育4h，收集样品；通过CCK-8、倒置荧光显微镜观察、生化试剂盒、Westernblot、RT-PCR等方法检测相关指标，辅以计算机分子对接技术。[结果]发现20μmol/LStreptochlorin预处理能够明显改善S.aureus侵袭导致的乳腺上皮细胞排列紊乱、皱缩等形态改变，降低细胞上清损伤标志物乳酸脱氢酶（LDH）、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAGase）的分泌以及肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）和白细胞介素6（IL-6）等经典炎性细胞因子的基因的表达（P<0.05），此外，Streptochlorin预处理后显著降低乳腺上皮细胞胞内活性氧（ROS）水平、提高细胞总抗氧化能力（T-AOC）能力、降低丙二醛（MDA）蓄积（P<0.05）。Westernblot检测以及分子对接结果初步证明，Streptochlorin可能通过keap1-Nrf2信号通路，促进下游分子血红素加氧酶1（HO-1）、NAD(P)H:醌氧化还原酶1（NQO1）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽S-转移酶（GST）的基因表达发挥抗氧化作用（P
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王振云 周璇 李惠侠 廖旭东 崔群维 李莲 王根林
用过氧化氢(H2O2)建立体外奶牛乳腺上皮细胞的氧化应激损伤模型,研究不同质量浓度茶多酚对氧化应激所致奶牛乳腺上皮细胞损伤的影响。MTT法检测细胞存活率,比色法检测细胞培养液中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和乳酸脱氢酶(LDH)活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,分光光度法检测天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的活性。结果显示:与H2O2损伤模型组相比,20～100μg.mL-1茶多酚处理组的奶牛乳腺上皮细胞存活率、SOD活性显著升高,而MDA含量、LDH与Caspase-3相对活性与细胞凋亡率均下降,其中以100μg.mL-1茶多酚处理组效果最显著,说明一定质...
[期刊] 水产学报
[作者]
祝璟琳 李大宇 邹芝英 肖炜 韩珏 杨弘
为探究高水温对尼罗罗非鱼无乳链球菌病暴发的影响，以体质量为（６２．０±３．３３）ｇ的尼罗罗非鱼为研究对象，设置生长最适宜组（２９°Ｃ）和高温应激组（３３°Ｃ）２个处理水平，暂养７ ｄ后分别进行人工感染实验统计累计死亡率，并于攻毒后０、１２、２４、４８、９６和１２０ ｈ采集血液和组织样本，开展高温应激下无乳链球菌感染对尼罗罗非鱼血清生化指标和组织病理影响的研究。结果显示，水温３３°Ｃ高温应激组尼罗罗非鱼累计死亡率显著高于２９°Ｃ组；谷丙转氨酶（ＡＬＴ）活性在感染９６ ｈ之后３３°Ｃ组的值显著高于２９°Ｃ组；谷草转氨酶（ＡＳＴ）活性在感染４８ ｈ之后３３°Ｃ组的值显著高于２９°Ｃ组；钾（Ｋ＋）和钠．．．
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
董兰芳 张彩群 刘家辉 郑晓利 童潼 张琴 王秀华 杨慧赞
本实验旨在研究饲料中添加酵母水解物对吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)生长性能、免疫力以及抗病力的影响。在基础饲料中添加0% (对照组)、0.5%、1.0%、1.5%和2.0%的酵母水解物制成5种实验饲料，对5组初始体重为(25.80±0.45) g的吉富罗非鱼进行为期8周的养殖实验，每组3个重复，每个重复30尾鱼。实验结束后，每个重复选择12尾鱼进行无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)攻毒实验，每个重复选择12尾鱼进行攻毒，每尾鱼腹腔注射0.2 mL浓度为8.3×10~(5) CFU/mL的菌液，连续观察14 d，统计累积死亡率。结果显示，随着酵母水解物添加量的增加，吉富罗非鱼终末体质量(FBW)和特定生长率(SGR)均呈先显著上升(P<0.05)后下降的趋势。回归分析表明，当SGR达到最大值时，对应的酵母水解物添加量为1.29%。罗非鱼血清一氧化氮合酶、酚氧化酶、酸性磷酸酶、过氧化氢酶和超氧化物歧化酶活性均随饲料中酵母水解物添加量的提高呈现上升后下降的趋势(P<0.05)，添加量1.5%时达最大值。饲料添加酵母水解物对吉富罗非鱼无乳链球菌的抵抗力有显著影响(P<0.05)，除添加量0.5%实验组死亡率与对照组差异不显著外，其他实验组罗非鱼的死亡率均显著低于对照组(P<0.05)。本研究中，饲料添加酵母水解物可有效提高吉富罗非鱼的生长性能、免疫力及抗病力，且在添加量为1.5%时，效果最显著。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
海珍珍 范永鑫 马小霞 马海娟 张东涛 周学章
[目的]研究产PV-杀白细胞素(Panton-Valentine leukocidin,PVL)金黄色葡萄球菌ATCC49775(产PVL标准菌株)、ΔPVL 49775(PVL基因缺失株)以及体外重组PVL(rPVL)对奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMECs)内质网应激和自噬的影响,为系统阐述金黄色葡萄球菌及PVL对BMECs损伤的分子机制奠定基础。[方法]用感染复数(MOI)为30的金黄色葡萄球菌菌株ATCC49775和ΔPVL 49775感染BMECs,于感染后3和6 h取样;用100 ng/mL rPVL处理BMECs,于处理后1,3和6 h取样;以未处理的BMECs为对照(CK)。用免疫荧光法检测样品BMECs细胞的自噬体荧光强度;提取样品细胞的总蛋白,以GADPH为内参蛋白,采用Western blot法检测各处理组内质网应激相关蛋白(CHOP和GRP78)和自噬相关蛋白(LC3-Ⅱ、ATG5、Beclin1和p62)的相对表达量。[结果]ATCC49775、ΔPVL 49775感染后不同时间,BMECs自噬体荧光强度均极显著(P<0.01)高于CK,内质网应激相关蛋白(CHOP和GRP78)和自噬相关蛋白(LC3-Ⅱ、ATG5、Beclin1和p62)的表达水平也大多显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)高于CK;同一处理时间下,ATCC49775感染组自噬体荧光强度和相关蛋白表达水平均显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)高于CK,内质网应激和自噬相关蛋白的表达水平大多极显著(P
[期刊] 中国水产科学
[作者]
余泽辉 张佳 耿毅 邓梦玲 汪开毓 黄小丽 陈德芳 王均
2012–2013年四川齐口裂腹鱼(Schizothorax prenanti)养殖场流行一种临床特征为突眼、体表出血和神经症状的传染病,在肝、肾涂片检查中发现链状G+球菌。从自然发病齐口裂腹鱼分离到2株形态与涂片检查一致的G+球菌(DML120817,YZH130830),其在脑心浸液培养基(BHI)平板上28℃培养48 h,形成白色圆形、表面光滑、边缘整齐的针尖大小菌落。经人工感染实验证实分离菌株为该病的病原菌。根据分离菌株的形态学和生理生化检测结果初步判定其为无乳链球菌(Streptococcus agalactiae);16S r RNA基因序列分析表明,2分离株(Gen Bank登录...
[期刊] 水产学报
[作者]
崔静雯 汪开毓 贺扬 陈德芳 黄小丽 王均 龙波 张丽杰 蒋洁
针对尼罗罗非鱼无乳链球菌病的致病机制，本实验建立了无乳链球菌感染尼罗罗非鱼致脑膜炎的模型，并制定相应的临床症状及组织病理学评分系统对其进行了研究。将４３尾健康尼罗罗非鱼随机分为４组：对照组（ｎ＝１０）和３个实验组（ｎ＝３３）。３个实验组根据不同感染剂量分为１．０×１０～６ｃｆｕ组（ｎ＝１１）、１．０×１０～７ｃｆｕ组（ｎ＝１１）和１．０×１０～８ｃｆｕ组（ｎ＝１１）。实验组分别将１．０×１０～６、１．０×１０～７和１．０×１０～８ｃｆｕ的无乳链球菌菌液腹腔注射尼罗罗非鱼复制脑膜炎模型。对感染尼罗罗非鱼的临床症状、剖检病变、脑组织（端脑、中脑、小脑、延脑）病理学进行判定，并结合细菌学检测，按照拟．．．
关键词：
尼罗罗非鱼 无乳链球菌 脑膜炎 模型
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
卢金霞 何芳 冯峰 管翠萍 刘军红 周学章
【目的】探究苦参碱对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞（BMECs）增殖、凋亡及抗氧化能力的影响。【方法】利用含0（A组），25（B组），50（C组），75（D组）和100 μg/mL（E组）苦参碱的培养基培养奶牛乳腺上皮细胞。通过四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测BMECs活性，采用流式细胞仪（AnnexinV/PI双染法）检测苦参碱对BMECs凋亡的影响，并检测苦参碱对BMECs抗氧化酶活性及丙二醛（MDA）含量的影响，采用real-time PCR对BMECs中Caspase-3、p53、STAT1和SOCS3
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
郭亮 杜娟 狄和双 李忠浩 王根林
用细胞流式、台盼蓝染色、免疫组织化学等方法研究单一高温(40℃1 h)或连续高温(40℃1 h.d-1)3~7 d对乳腺上皮细胞细胞周期、凋亡及热休克蛋白(HSP70)表达的影响。结果表明:40℃1 h单一高温处理乳腺上皮细胞后24 h,G2比例极显著高于对照组(37℃)(P<0.05)。结果提示:高温诱...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王丽芳 张兴夫
【目的】通过奶牛乳腺上皮细胞体外培养试验,研究黄花蒿乙醇提取物对乳腺上皮细胞中与共轭亚油酸(CLA)合成相关酶的基因SCD表达的影响,探讨其对乳脂肪合成相关酶ACACA和FASN基因以及与脂肪转运相关酶LPL基因表达的影响,旨在从乳腺层次探明黄花蒿乙醇提取物对乳中CLA合成的部分作用机制。【方法】将采自于健康泌乳中期荷斯坦奶牛的乳腺组织用保温盒带回实验室,在无菌条件选取腺泡较多的深层组织,采用胶原酶消化法获得乳腺上皮细胞,放于37℃,CO2浓度为5%的培养箱中进行原代培养。试验所用的细胞是经过复苏的第二代细胞,待细胞复苏后,以3×104个/mL的密度接种细胞到24孔板中,分别置于37℃的5%CO2培养箱中培养,采用台盼蓝计数法每天进行一次计数,设3个重复,连续7 d,未计数组每2天换液一次,绘制细胞生长曲线。另外,待细胞生长至对数增殖期,更换新鲜培养液,随机分为4组,即培养液中黄花蒿提取物的浓度为0、3.0、6.0、12.0 mg·L-1,提取物作用时间均为48 h,检测不同浓度黄花蒿提取物对与脂肪酸合成相关酶SCD、ACC、FAS、LPL基因表达量的影响。每个处理3个重复。【结果】使用倒置显微镜观察,乳腺上皮细胞形态呈铺路石样;在3×104个/mL的接种密度下,细胞生长曲线呈S型,在1—2d乳腺上皮细胞为潜伏期,3—6d为指数增长期,之后进入平台期,符合一般细胞生长曲线规律,说明培养的乳腺上皮细胞具有正常的增殖能力,可以用于后续的研究;与对照组相比,添加黄花蒿乙醇提取物有增加SCD酶基因表达量的趋势,其中3mg·L-1组显著增加了SCD酶的基因表达量(P0.05);添加黄花蒿乙醇提取物有增加乳腺上皮细胞中ACACA基因表达量的趋势,但与对照组相比差异不显著(P>0.05),且随着添加剂量的增加,有下降趋势;添加黄花蒿乙醇提取物可以增加乳腺上皮细胞中FASN基因表达量,呈剂量依赖型增加,且12mg·L-1组可以显著增加乳腺上皮细胞中FASN基因表达量(P<0.05)。【结论】黄花蒿乙醇提取物可以增加奶牛乳腺上皮细胞中SCD、ACACA和FASN酶基因的表达,有利于调控CLA和乳脂肪的生成。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张成 王驰 王孝成 赵菲 耿照玉
[目的]本试验旨在研究白藜芦醇对热应激肉鸡肝脏抗氧化功能和核因子E2相关因子2(Nrf2)通路相关基因表达的影响。[方法]300羽1日龄爱拔益加(AA)公鸡饲养至21日龄时选取其中54羽体重相近的肉鸡,随机分为3组,每组3个重复,每个重复6羽。对照组[(22±1)℃,24 h)]和热应激组[(33±1)℃,10 h;(22±1)℃,14 h)]饲喂基础饲粮,热应激+白藜芦醇组饲喂在基础饲粮中添加400 mg·kg~(-1)白藜芦醇的试验饲粮。试验期21 d。[结果]与对照组相比,热应激组肉鸡终末体重、平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)、肝脏指数、脾脏指数、胸腺指数、血清中葡萄糖(GLU)含量和总蛋白(TP)含量,肝脏中核因子E2相关因子(Nrf2)、亚铁血红素加氧酶(HO-1)、超氧化物歧化酶1(SOD1)mRNA表达量及过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)、谷胱甘肽疏基转移酶(GSH-ST)、SOD活性均显著降低(P<0.05)。[结论]白藜芦醇对热应激肉鸡生长性能、免疫器官发育、血清生化指标及抗氧化功能具有促进作用,其改善抗氧化功能的机制可能与其激活Nrf2信号通路有关。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
魏思宇 甘振丁 韦文耀 吴嘉敏 夏振海 陈璟玥 王恬 钟翔
[目的]本试验旨在研究白藜芦醇和姜黄素对断奶仔猪内源消化酶活性和胰腺抗氧化功能的影响。[方法]180头断奶日龄为28±2 d的杜长大仔猪（公母各半，体质量为7.8±0.6 kg），随机分成6组（每个组三个重复，每个重复10只）：分别饲喂基础日粮（CON）或含有添加剂的日粮：300 mg·kg~(-1)抗生素（ANT组）；白藜芦醇和姜黄素各300 mg·kg~(-1)（HRC组）；白藜芦醇和姜黄素各100 mg·kg~(-1)（LRC组）；300 mg·kg~(-1)白藜芦醇（RES组）；300 mg·kg~(-1)姜黄素（CUR组）的试验饲粮，试验期为28 d。[结果]与CON组相比，各添加剂组胰腺中淀粉酶、胰蛋白酶、脂肪酶活性均无显著变化（P>0.05)，仅RES组胰腺糜蛋白酶活性表现为差异显著（P<0.05），HRC、LRC、RES、CUR组空肠中淀粉酶、糜蛋白酶的活性均显著上升（P<0.05)，回肠中HRC、LRC、RES组糜蛋白酶活性显著上升（P<0.05）；HRC、LRC、RES、CUR组胰腺丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶1（SOD1）含量显著下降（P<0.05)，还原性谷胱甘肽（GSH）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的含量显著上升（P<0.05)；HRC和LRC组胰腺过氧化氢酶（CAT）、GSH-Px的mRNA表达水平显著升高（P<0.05），HRC组胰腺血红素氧合酶1（HO-1）、超氧化物歧化酶1（SOD1）基因表达水平显著提高（P<0.05）。[结论]由此可见，饲粮中联合添加白藜芦醇和姜黄素可以提高断奶仔猪小肠消化酶活性，同时能够提高胰腺的抗氧化能力，从而缓解由断奶应激带来的损伤。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
杨敏 杨彩霞 李亚南 雷智琦 王根林 李莲
[目的]本试验旨在揭示胆碱对热应激诱导的奶牛乳腺上皮细胞凋亡的抑制作用。[方法]奶牛乳腺上皮细胞系(MAC-T细胞)于含10%胎牛血清的DMEM培养基中进行体外培养,将细胞分为对照组、胆碱组(100μmol·L~(-1))、热应激组(42℃,2 h)、热应激+胆碱组。采用CCK-8法分析添加胆碱对MAC-T细胞的药物毒性及细胞增殖活性的影响,采用Western blot分析蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)磷酸化水平及激活转录因子4(ATF-4)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)和Bcl-2关联X(Bax)蛋白表达水平,RT-qPCR检测GRP78、CHOP、ATF-4、Bax、Bcl-2、Caspase-3(胱氨酸蛋白3基因)mRNA水平。[结果]与对照组相比,热应激组MAC-T细胞的相对存活率极显著降低(P<0.01),p-PERK、ATF-4、CHOP、GRP78和Bax蛋白表达量极显著升高(P<0.01),Bcl-2表达量极显著下降(P<0.05),p-PERK、ATF-4、CHOP、GRP78和Bax蛋白表达量均极显著下降(P<0.01),Bcl-2蛋白表达量升高(P
[期刊] 华北农学报
[作者]
马小军 王加冕 李世瑛 颜丽娇 麻强生 张小丽
为研究绵羊大肠杆菌性乳腺炎中乳腺成纤维细胞的损伤情况及TLR4的作用机制，通过体外培养获得原代绵羊乳腺成纤维细胞，大肠杆菌人工感染细胞建立大肠杆菌性乳腺炎细胞模型，分析大肠杆菌对细胞损伤的影响及TLR4在大肠杆菌性乳腺炎中的作用。采用酶消化法结合差速消化法获得原代绵羊乳腺成纤维细胞；MTT法检测细胞活力及TLR4阻断剂CLI-095的细胞毒性作用；乳酸脱氢酶法检测大肠杆菌对绵羊乳腺成纤维细胞的损伤情况并筛选最适MOI比值；qRT-PCR法检测caspase-3、TLR4的mRNA相对表达量及CLI-095的阻断效果；比色法检测细胞焦亡蛋白caspase-4,5的酶活性；WB检测TLR4蛋白的相对表达量；平板活菌计数法检测CLI-095对大肠杆菌黏附绵羊乳腺成纤维细胞的影响。分离获得绵羊乳腺成纤维细胞，MTT测定结果显示，细胞活力良好；大肠杆菌以最适MOI=4∶1感染绵羊乳腺成纤维细胞后，各时间段LDH释放量均显著升高；caspase-3 mRNA的相对表达量在感染1～3 h内显著上升，3 h后表达量显著下降；caspase-4,5酶活性在感染1～3 h内升高，3 h后降低。TLR4的mRNA及蛋白表达量均显著上调，CLI-095可抑制大肠杆菌对细胞的黏附作用。大肠杆菌感染成纤维细胞后LDH释放量增加、caspase-3基因表达上调、caspase-4,5酶活性升高，促进了绵羊乳腺成纤维细胞的损伤、凋亡及焦亡；大肠杆菌感染促进绵羊乳腺成纤维细胞内TLR4 mRNA及蛋白的表达；TLR4阻断剂CLI-095可能通过抑制TLR4的表达抑制E.coli对细胞的黏附作用。
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