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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王菊花 解倩倩 范彩云 方富贵 周杰 曹鸿国 章孝荣
【目的】通过对6周龄昆明小鼠腹腔内单次注射不同剂量的白消安来制作精原干细胞移植受体模型。【方法】将104只昆明小鼠随机分成4组,分别注射0(对照组,注射等量的白消安溶解液二甲基亚砜(DMSO)),10,20和30mg/kg白消安,于注射白消安后5,7,9,11和13周记录小鼠的死亡数、小鼠睾丸外观体积、小鼠睾丸质量和小鼠体质量,计算睾丸指数;通过组织学观察注射不同剂量白消安后小鼠曲细精管精子的恢复情况,并检测受体小鼠血液中红细胞和白细胞数量的变化。【结果】注射0(对照组),10,20和30mg/kg白消安13周后,小鼠死亡率分别为0(0/22),11.54%(3/26),17.86%(5/28...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
潘少辉 胡玥 张姗姗 王静 李飞飞 高志敏 杨春荣 华进联
【目的】从成年昆明小鼠睾丸组织中分离具有多能性的雄性生殖干细胞(Male germline stem cells,mGSCs)。【方法】采用机械法和2步酶消化法分离出成年昆明小鼠的精原细胞,经差速贴壁后,培养在小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)饲养层上,2周后得到类胚胎干细胞(ESCs)样mGSCs。对得到的mGSCs进行碱性磷酸酶(AP)染色、免疫荧光染色、RT-PCR、体内分化等检测。【结果】mGSCs具有类似ESCs的形态和多能性,AP染色呈阳性,免疫荧光Oct4、Vasa染色呈阳性,RT-PCR检测其表达Oct4、Nanog、Sox2等多能性基因和Vasa、C-kit等生殖细胞的标记基因,在...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
辛颖 张涛 张优优 张智英
【目的】用慢病毒在体内感染精原干细胞,建立转基因动物生产技术平台。【方法】用三质粒慢病毒载体系统转染293T细胞包装慢病毒,转染后裂解细胞,收集携带绿色荧光蛋白(EGFP)基因的慢病毒。将慢病毒液注射到小鼠曲细精管,获得F0代小鼠,制备小鼠睾丸组织切片,进行免疫双荧光检测。将F0代小鼠与野生型母鼠交配,获得F1代小鼠,PCR检测F1代是否为转基因小鼠。【结果】通过裂解细胞的方法成功制得慢病毒,将其注射到小鼠曲细精管,获得了10只F0代小鼠,经免疫双荧光检测,发现慢病毒可在活体上感染精原干细胞。8只F0代小鼠与野生型母鼠交配后共获得了41只F1代小鼠,经PCR检测,21只携带慢病毒基因片段,转基...
关键词：
慢病毒 活体 精原干细胞 转基因小鼠
[期刊] 中国农业科学
[作者]
杜卫华 李世杰 郑敏 戴蕴平 李宁
【目的】本研究旨在探索一种崭新的、化学试剂诱导去核卵母细胞为核受体的、无透明带的、手工体细胞核移植方法。【方法】将第一次减数分裂期小鼠卵母细胞进行诱导去核并去除透明带,去核卵胞质与胎儿成纤维细胞粘合、电融合和SrCl2激活后,体外培养重构胚。【结果】重构胚融合率和激活率分别为84.8%和93.6%;胚胎2-细胞发育率为24.7%,4-细胞率为6.74%;2-细胞期克隆胚移植假孕受体后,没有获得怀孕受体;分别以"血清饥饿"胎儿成纤维细胞、新鲜细胞和冷冻保存细胞为供体作核移植,结果表明,冷冻保存细胞的融合率(69.3%)与其余两组(80.6%和84.8%)呈显著差异(P<0.05);激活率、2-细...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
索丽娟 胡建宏 王鹏 洪洁赟 王春伟 李青旺 史怀平
【目的】探讨胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和白血病抑制因子(LIF)对小鼠精原干细胞(SSCs)体外增殖的影响,为后续SSCs的诱导分化、转基因动物生产、基因治疗等研究奠定基础。【方法】收集6～8日龄小鼠睾丸,采用机械法和2步酶消化法获得细胞悬液。通过多次差异贴壁法分离纯化SSCs和支持细胞,采用碱性磷酸酶(AP)染色和RT-PCR检测Ngn3和Oct4基因2种方法对SSCs进行鉴定。采用单独添加GDNF(添加量为0,10,20,40ng/mL)或LIF(添加量为0,500,1 000,1 500U/mL)的无血清DMEM/F12培养基培养SSCs,于培养第3,5,7天取样,同时用添加G...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
史洪才 玛依拉 黄俊成 刘明军 李建华 郭志勤
研究了移植方法和培养液对显微注射法生产转基因小鼠的影响。结果表明 ,小鼠受精卵显微注射外源基因后 ,进行单、双侧输卵管移植 ,受体的妊娠率分别为 34.4 %和 37.5 % (P>0 .0 5 ) ,差异不显著 ;但仔鼠成活率分别为 83.6 %和 97.2 % (P
关键词：
显微注射 转基因小鼠 受精卵移植
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
孟楠 刘月学 孙立茹 杜安楠 李贺 张志宏
利用农杆菌注射法对草莓果实细胞进行了转化研究。以草莓(Fragaria×ananassa)品种丰香和红脸颊为试材,研究了农杆菌菌株的种类及其浓度、不同注射部位、果实发育时期和草莓基因型对转化效率的影响。结果表明:选用菌液OD600值为2.4的EHA105菌株,取花后19d大小的果实,从果蒂部位进行注射时转化效果最好,GUS染色率可达95%。本研究初步建立了能使外源基因在草莓果实细胞中高效表达的注射法转化体系,是草莓果实发育特性相关基因功能鉴定的可行方法。
关键词：
草莓果实 GUS表达 农杆菌注射 转化
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘俊平 曹鸿国 郑月茂 赵慧英 温叶飞 张涌
采用大鼠心肌条件培养基对昆明白小鼠胚胎干细胞进行分离、消化传代、培养鉴定等,研究大鼠心肌条件培养基在昆明白小鼠胚胎干细胞分离培养中的作用效果。结果显示,SD大鼠心肌条件培养基在昆明白小鼠3.5d囊胚胚胎干细胞集落分离中,所分离的昆明白小鼠胚胎干细胞集落具有岛屿状生长,隆起于饲养层上;碱性磷酸酶染色为强阳性;体外分化可形成类胚体状结构,贴壁的类胚体周边会出现许多分化的上皮样细胞或单个散在的细胞;经过常规冻存传代的胚胎干细胞集落具有较为一致的生长形态,并呈现胚胎干细胞集落所特有的岛屿状生长形态;对传至第5代的小鼠胚胎干细胞集落进行核型分析,小鼠胚胎干细胞核型正常率大于75%。试验证实,SD大鼠心...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
袁安文 许道军 王乃东 周卫国 薛立群
将1日龄小鼠卵巢移植入成年雄鼠肾囊下,分别于移植后21,28和35 d回收移植卵巢,对移植体的大小形态、回收率、回收卵母细胞数及其大小进行评价.结果表明:三时间段回收的移植体均生长增大,有腔卵泡明显,回收率达87.5%～92.9%,差异不显著;35 d移植体平均直径达(2 574.7±785.9)μm,显著大于21 d(2 075.3±329.8)μm和28 d(2 088.9±297.7)μm移植体(P
关键词：
小鼠 卵巢移植 卵母细胞 移植时间 雄性
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
张爽 邵琪琪 耿海洋 苏松坤
探讨蜂王浆对尾静脉注射4T1细胞小鼠的抗氧化和免疫力的影响.将4T1细胞或其与蜂王浆的混合物通过尾静脉注射入小鼠体内,ELISA法检测蜂王浆对小鼠血清、肝脏和肾脏中与抗氧化能力相关的指标及血清中和免疫力相关细胞因子水平的影响.结果表明,和模型对照组相比,蜂王浆(50、100 mg·mL(-1))可以显著提高小鼠血清内T-AOC、IFN-α(P<0.05)水平,降低IL-4的水平(P<0.05).可见,蜂王浆可以改善尾静脉注射4T1细胞小鼠的抗氧化能力和免疫力.
关键词：
蜂王浆 4T1细胞 免疫力 抗氧化
[期刊] 华北农学报
[作者]
郭战军 马毅 李三华 韩瑞发 李胜芝 孙光 乔宝民 马腾骧 陈永福
为探讨超急排斥反应(Hyperacute rejection,HAR)及延迟性异种排斥反应(Delayed xenograft rejection,DXR)的分子调控机制,采用优化的精子介导法(Sperm-mediated gene transfer,SMGT)对建立hHT/hDAF双基因转移小鼠模型进行了研究。结果表明,应用树枝状聚合物(Dendrimers)优化SMGT后,2细胞胚GFP+RFP的阳性率达到4.51%,同对照组相比差异极显著(P
[期刊] 华北农学报
[作者]
苗现伟 席俊 刘玺 张改平 邓瑞广 李清州 张利娜 游雷鸣 刘运超
为建立小鼠IgGFc受体(moFcγRⅡ)稳定表达的哺乳动物细胞系,PCR克隆小鼠moFcγRⅡ片段,构建真核表达载体pcDNAmoFcγRⅡ。转染COS-7细胞后通过G418抗性筛选和连续克隆,获得了在COS-7细胞表面稳定表达FcγRⅡ的真核细胞系。玫瑰花环试验结果显示其阳性率在90%以上。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
陈勇 夏国良 王海滨 苏友强 傅国栋
本实验应用组织切片法探讨了体内正常生理条件下昆明白小鼠卵巢内卵丘扩展与卵母细胞成熟的关系。初情期前小鼠注射孕马血清促性腺激素 (PMSG) ,4 8h后注射人绒毛膜促性腺激素 (HCG) ,于注射HCG后不同时间取出卵巢进行组织切片。注射 HCG后 1h,卵丘细胞开始扩展 ,此时卵母细胞核膜完整 ,即未发生生发泡破裂 (GVBD) ;注射 HCG后 3h,大部分 (>70 % )大有腔卵泡中卵母细胞发生 GVBD,此时卵丘处于 2级扩展状态。卵丘完全扩展发生在注射 HCG后 9h,而 PB1的排出是从 12 h开始的。结果表明 :在小鼠体内 ,卵丘开始扩展先于卵母细胞成熟 ,但卵母细胞成熟并不...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
袁安文 邓治邦 王乃东 许道军 薛立群
【目的】探索外源促性腺激素对卵巢在雄性受体内生长、卵泡发育和卵母细胞成熟与发育能力的影响。【方法】将1日龄小鼠卵巢移植到7～12周龄雄性小鼠肾囊下,回收前用促性腺激素对受体进行处理或不处理,同龄雌性小鼠用促性腺激素进行处理后作为对照。移植21d后回收移植卵巢,观测移植体的回收率及生长和卵泡发育;对卵母细胞进行体外成熟、体外受精,观察2-细胞胚和囊胚发育率。【结果】移植21d后,未处理组移植体回收率为85.4%,与处理组(90.7%)差异不显著(P>0.05)。未处理组移植体卵泡发育至成熟阶段,回收卵母细胞均处在GV期,平均每枚移植体回收卵母细胞数为(41.4±25.8)枚,2-细胞胚胎发育率为...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
孙秀柱 朱艳娇 杜丽娟 王立强 康孟阳 王淑辉
为探索提高精原干细胞分离和体外培养效率的技术方法,以建立长期稳定的动物精原干细胞培养体系,对动物精原干细胞的分离纯化和体外培养的研究进展进行综述。以"Spermatogonial stem cell,Isolation,Culture,Enrichment,in vitro"和"精原干细胞、分离、培养和体外扩增"为检索词,查阅精原干细胞相关文献,并进行归纳整理。精原干细胞分离主要有机械分离法和酶消化法,纯化精原干细胞的方法有差速贴壁法、密度梯度离心法、免疫磁珠法、流式细胞法等,目前大动物精原干细胞的富集常
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