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[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
郑杰 于颖 贺卓熙 路明远 孙宇 尹天龙 王超
【目的】木质部细胞壁的组成及特性是决定材性的重要因素，研究木质部细胞壁形成的分子调控机制对于木材改良具有重要意义。本研究探究了白桦木质部原生质体初生壁再生过程的分子调控机制，并鉴定出重要调控基因，旨在为林木材性性状研究提供数据和材料。【方法】分别以培养0 h和2 h的白桦木质部原生质体为材料，通过荧光增白剂染色观察初生壁再生过程。利用转录组分析技术研究初生壁再生前后的差异表达基因及其参与的调控途径，将检测到的差异表达基因在GO、KEGG、PlantTFDB数据库中进行比对分析。【结果】荧光显微镜观察结果显示：原生质体分离后不具有细胞壁，培养2 h再生初生细胞壁。以|log2(FC)|≥1(FC为差异倍数)且q
关键词：
白桦 原生质体 初生细胞壁再生 转录组
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
郝勃 阎淳泰 陈华癸
在相差显微镜下详细地观察了２株黑曲霉在最适条件下形成原生质体及其再生的过程。结果表明，黑曲霉的原生质体均能从菌丝体的顶端及其它部位释放出来。释放的原生质体呈球形，大小不一。大多数原生质体内均能清晰地看见含有１个巨大的液泡。原生质体再生同时存在２种形式：一是先从原生质体产生１个突出物，随后突出物逐渐增大并延伸成１条旋绕的无隔菌丝，继续发展成有隔的正常菌丝；第二种方式是由酵母状细胞短链发育成正常菌丝。
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
江成 林二培 黄华宏 童再康
为了挖掘光皮桦材性相关基因,本研究以光皮桦木质部为材料,通过对RNA的提取、cDNA的反转录及纯化的对比分析,以及选扩体系优化等,建立了相应的cDNA-AFLP体系。结果表明:采用CTAB和RNAiso试剂相结合的方法得到的RNA质量较好,cDNA经纯化后选扩效果明显变好。选扩体系为:4.0μL预扩产物(稀释40倍)、1.6μL的引物(10.0μmol/L)、0.2μL的dNTP(2.5 mmol/L)、0.4μL的Mg2+(25.0 mmol/L),以及0.2μL的Taq DNA聚合酶(5 U/μL)。进一步以来自不同木质化茎段的cDNA为模板,筛选出31对扩增效果较好的引物组合,同时分离出...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
史永忠 万蜀渊 薛光荣
草莓花药愈伤组织经５次继代培养，生长旺盛，质地松软，可用于原生质体的分离。在含０．１％ＰｅｃｔｏｌｙａｓｅＹ－２３，０．５％纤维素酶（ＯｎｏｚｕｋａＲ－１０），０．５％离析酶（ＭａｃｅｒｏｚｙｍｅＲ－ｌ０）的混合酶液中酶解１３ｈ，原生质体的产量为１．４７×１０￣６／ｇＦＷ，活性６７．３５％。原生质体采用液体浅层和琼脂糖包埋培养，获得了肉眼可见的多细胞团。
关键词：
草莓,原生质体培养,再生细胞团
[期刊] 林业科学研究
[作者]
阙国宁 诸葛强
以牡竹属黄竹（ＤｅｎｄｒｏｃａｌａｍｕｓｍｅｍｂｒａｎｃｅｕｓＭｕｎｒｏ）的竹节及无菌苗根颈为外植体，培养于含有５ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ、０．２ｍｇ／ＬＫＴ和２００ｍｇ／ＬＬＨ的ＭＳ培养基上诱导愈伤组织，然后移至相同成份或不同浓度２，４－Ｄ的液体培养基中，进行悬浮培养，以建立分散性良好的悬浮细胞系。利用悬浮细胞和无菌苗叶片经酶解获大量原生质体，其产量分别约为每克鲜重２．５×１０５个和５×１０５个，活力均可达８０％。
关键词：
黄竹,细胞悬浮培养,原生质体分离
[期刊] 林业科学研究
[作者]
诸葛强 阙国宁
山杉木(Cunninghamia lanccolata Hook.)成熟种子胚在含有2.0mg/l 2,4-D、0.2mg/l KT的MS培养基上诱导愈伤组织,通过筛选继代培养,得到了生长旺盛、质地松散的愈伤组织细胞系。继代初期适当降低蔗糖浓度有助于减少愈伤组织的褐化。将5个月龄的愈伤组织转移至含1.5～2.0 mg/l 2,4-D、0.1～0.2mg/l KT、200 mg/l CH的MS液体培养基振荡培养,建立了增殖快、分散性良好的杉木悬浮细胞系。从4个月龄的悬浮细胞酶解(2％纤维素酶、0.25％果胶酶和13％甘露醇),游离得到大量的杉木原生质体,产量为9.3×10~5个/g FWW,活力...
关键词：
杉木 悬浮细胞系 原生质体的分离
[期刊] 林业科学研究
[作者]
张守英 阙国宁
Callus was induced by embryos from mature seeds of Pinus serotina with MS medium contained 0.2 mg?L -1 of KT and 2.5 mg?L -1 of 2,4 D.After successive subculture and selection,six month old callus were transferred to a liquid medium with 0.2 mg?L -1 of KT and 0 5.0 mg?L -...
关键词：
晚松 悬浮细胞系 原生质体分离
[期刊] 草业科学
[作者]
安杰 尤章 曹玉曼 任鹏辉 刘金隆 杨培志
为了获得紫花苜蓿(Medicago sativa)保卫细胞原生质体,并为后续的紫花苜蓿保卫细胞原生质体的相关研究奠定基础,本研究探索了适合紫花苜蓿保卫细胞的提取方法。利用研磨和匀浆机处理的方式获得表皮条,将获得的表皮条再通过两步酶解法去除残留的叶肉细胞和细胞壁,并经多次过滤和离心获得保卫细胞原生质体。最后统计原生质体数目并用FDA染色检测保卫细胞原生质体活性。结果表明,本研究成功分离并获得了高活性的紫花苜蓿保卫细胞原生质体。每5片成熟叶获得1 000个保卫细胞原生质体,经FDA染色后在荧光下显示活性保卫细
[期刊] 西南农业学报
[作者]
郝玉有 梁宗琦 刘爱英
本文报道几个影响粉被马利娅霉（ＭａｒｉａｎｎａｅａｐｒｕｉｎｏｓａＬｉａｎｇ）原生质体形成和再生的重要因子。在所试的几种酶中，以单用蜗牛酶（Ｓｎａｉｌａｓｅ）６～８ｍｇ／ｍｌ于２５℃处理３～４ｈ对原生质体的制备和再生效果都较好。原生质体的形成与再生对０．６ｍｏｌ／Ｌ的三种无机盐稳定剂无选择性，均为合适的渗透压稳定剂。巯基乙醇对于原生质体的形成不是关键因素。打散菌丝时的机械拉力强度也很大程度上影响原生质体的形成。
关键词：
粉被马利娅霉,原生质体,形成,再生
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
陈文辉 郭照辉 贺月林 刘冬华
为提高姬松茸原生质体的再生率,对姬松茸原生质体再生的条件进行了优化.结果表明,将培养5 d的姬松茸种子液点种在覆以玻璃纸的菌丝生长培养基上,26℃培养5 d,用2.0%的裂解酶以pH6.0,0.8 mol/L NaCl为稳定液,在30℃下酶解6 h,可制备得到菌落数为1.8×107 cfu/mL的原生质体液.将原生质体悬液经G2过滤器过滤除菌后在GM上再生,原生质体再生率可达8.53%,残片率2.43%.
关键词：
姬松茸 原生质体 再生
[期刊] 华北农学报
[作者]
杜晓敏 王均 安子玄 裴丹 王华忠
为建立一套稳定高效的小麦叶肉细胞原生质体制备技术流程，以小麦幼苗叶片为材料，采用正交和随机设计试验分析了影响小麦叶肉细胞原生质体产量的制备因素。结果发现，酶解条件相关因素对制备原生质体产量的影响由大到小依次为酶解液甘露醇浓度、纤维素酶浓度、酶解时间和离析酶浓度；甘露醇浓度和纤维素酶浓度对原生质体产量的增长表现相互促进模式，延长酶解时间情况下低纤维素酶浓度产出的原生质体较高纤维素酶浓度破碎情况少，峰值过后的产量下降慢。研究还发现取材幼苗苗龄、光照条件和取材叶位等因素对原生质体产量也有影响。综合以上结果确定了一套优化的参数组合：以黑暗培养条件下的１０ ｄ苗龄小麦幼苗第２片真叶为材料，酶解液中的纤维．．．
关键词：
小麦 原生质体 基因转化 瞬时表达
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘苍伟 苏明垒 王玉荣 赵荣军
木质素是木材细胞壁的第2大化学组分,对树木新陈代谢和生长发育具有重要作用,但木质素的存在阻碍了木材资源作为木质纤维材料的利用。文章分别详细阐述了木质素基因调控对木材细胞壁组分和组织细胞微观结构两方面影响的研究进展,以期为优质速生人工林的选育和培育提供科学理论依据,并在前人研究成果的基础上进行了展望。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
何向东 字向东 夏忆 陈莹
为探讨牦牛有腔卵泡发育过程中卵丘卵母细胞复合体（Cumulus-oocyte complexes,COCs）mRNA转录组变化，对牦牛小（2～3mm）、中（4～5mm）、大有腔卵泡（6～8mm）中的COCs进行Illumina平台测序，筛选差异表达基因（Differentially expressed genes,DEGs），并进行GO分析和KEGG分析。结果表明，1）牦牛小、中、大3个阶段的卵泡COCs中共有17 342个基因表达；2）小卵泡与中卵泡COCs之间有879个DEGs，其中，上调435个，下调444个；DEGs注释到106条GO条目，其中生物过程（BP）类别46条，细胞组成（CC）类别25条，分子功能（MF）类别35条，涉及254条KEGG通路。中卵泡与大卵泡COCs之间有1 560个DEGs，其中，上调590个，下调970个；3)DEGs注释到114条GO条目，其中BP 55条、CC 26条和MF 33条，涉及276条KEGG通路，DEGs主要富集在神经活性配体-受体相互作用、细胞因子-细胞因子受体相互作用、细胞粘附分子、钙离子信号通路和cAMP信号通路等重要通路。综上，牦牛卵泡在不同发育阶段的DEGs、GO条目和KEGG pathway存在明显差异，为揭示牦牛卵泡发育分子调控机制，改善牦牛卵母细胞体外成熟技术提供了理论依据。
[期刊] 林业科学
[作者]
谷战英 杨若楠 陈昊
【目的】探索油桐叶肉细胞原生质体分离的最适条件,建立油桐原生质体的遗传转化体系,使在油桐体内研究自身基因的功能成为可能。【方法】以油桐成熟叶片和组培苗幼叶为材料,通过酶解法成功分离得到油桐叶肉细胞的原生质体并确定最适分离条件。在此基础上,以获得的原生质体为受体系统,建立PEG介导的油桐原生质体基因转化方法。【结果】原生质体分离结果表明,酶解时间对原生质体产量和活性的影响最大,其次是纤维素酶浓度,而离析酶浓度和甘露醇浓度对原生质体产量和活性的影响较小。以成熟叶片为材料分离原生质体的最适条件为纤维素酶浓度1.
关键词：
油桐 原生质体制备 遗传转化 亚细胞定位
[期刊] 华北农学报
[作者]
吕复兵 张献龙 刘金兰
以陆地棉品种“珂字２０１”为材料，比较了ＩＡＡ＋ＫＴ和２，４－Ｄ＋ＫＴ在愈伤诱导和悬浮培养中的效应，结果表明，愈伤组织诱导中，ＩＡＡ和２，４－Ｄ表现为正效应，且２，４－Ｄ的效应强于ＩＡＡ；ＫＴ表现为负效应；胚性愈伤悬浮培养中，３种激素都表现出负效应。以胚性细胞悬浮系为材料进行了原生质体的分离和培养试验，分离原生质体的最佳酶组合为纤维素酶（ＯｎｏｚｕｋａＲ１０）３％＋果胶酶（Ｐｅｃｔｉｎａｓｅ）１．５％，原生质体培养的最佳激素组合为ＩＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．１ｍｇ／Ｌ，适当提高原生质体密度有利于原生质体培养。光照，温度等物理因素对原生质体培养也有明显影响。原生质体再生的愈伤组织直接在无激素的...
关键词：
陆地棉,原生质体培养,植株再生
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