- 年份
- 2024(6024)
- 2023(8482)
- 2022(7127)
- 2021(6590)
- 2020(5543)
- 2019(12188)
- 2018(12146)
- 2017(22313)
- 2016(12677)
- 2015(14132)
- 2014(14162)
- 2013(13678)
- 2012(12851)
- 2011(11456)
- 2010(11716)
- 2009(10530)
- 2008(10484)
- 2007(9502)
- 2006(8233)
- 2005(7459)
- 学科
- 济(43343)
- 经济(43277)
- 管理(35281)
- 业(33065)
- 企(27215)
- 企业(27215)
- 方法(19085)
- 数学(16229)
- 数学方法(15975)
- 学(14640)
- 贸(14076)
- 贸易(14074)
- 易(13832)
- 财(13780)
- 农(12829)
- 中国(12530)
- 出(11452)
- 制(10784)
- 业经(9333)
- 银(8851)
- 银行(8803)
- 融(8668)
- 金融(8660)
- 体(8627)
- 理论(8583)
- 行(8489)
- 口(8087)
- 出口(8075)
- 出口贸易(8075)
- 地方(8033)
- 机构
- 大学(180664)
- 学院(180025)
- 研究(67539)
- 济(66736)
- 经济(65236)
- 管理(61055)
- 理学(52655)
- 理学院(51866)
- 管理学(50559)
- 管理学院(50240)
- 中国(48966)
- 科学(46336)
- 农(41853)
- 京(39389)
- 所(36877)
- 研究所(34056)
- 农业(33633)
- 财(32800)
- 业大(32667)
- 中心(29993)
- 江(28797)
- 财经(25772)
- 院(24489)
- 范(24254)
- 北京(23848)
- 师范(23804)
- 经(23437)
- 省(22611)
- 技术(22185)
- 州(22144)
- 基金
- 项目(126085)
- 科学(98127)
- 基金(92029)
- 研究(84864)
- 家(84195)
- 国家(83568)
- 科学基金(69261)
- 社会(52289)
- 省(50047)
- 社会科(49562)
- 社会科学(49548)
- 自然(47694)
- 基金项目(47478)
- 自然科(46654)
- 自然科学(46632)
- 自然科学基金(45825)
- 划(43163)
- 教育(39489)
- 资助(38114)
- 编号(32160)
- 重点(29432)
- 部(27243)
- 成果(27132)
- 发(26745)
- 计划(26401)
- 创(26052)
- 科研(25147)
- 创新(24612)
- 课题(24161)
- 科技(23157)
共检索到270398条记录
发布时间倒序
- 发布时间倒序
- 相关度优先
文献计量分析
- 结果分析(前20)
- 结果分析(前50)
- 结果分析(前100)
- 结果分析(前200)
- 结果分析(前500)
[期刊] 水产学报
[作者]
王宏华 侯竹美 张全启 于海洋 王志刚 齐洁 王旭波
为制备病毒性出血性败血症病毒（ＶＨＳＶ）单链抗体（Ｓｉｎｇｌｅ ｃＨａｉｎ Ｖａｒｉａｂｌｅ ｆｒａｇｍｅｎｔ ａｎｔｉｂｏｄｙ，ＳｃｆＶ）并鉴定其生物学功能，本研究提取抗ＶＨＳＶ单抗１ｇ５的杂交瘤细胞株总ｒｎａ并反转录获得ｃｄｎａ模板，通过Ｐｃｒ扩增ＶＨＳＶ抗体的轻链可变区（Ｖｌ）和重链可变区（ＶＨ）编码序列，将其拼接成单链抗体Ｓｃ ｆＶ基因后插入载体Ｐｅｔ２８ａ中，构建原核表达重组质粒并在大肠杆菌中诱导表达。结果表明，单链抗体主要以可溶性形式表达，分子量约２８ ｋｕ，能特异性识别ＶＨＳＶ病毒的ｇ蛋白并对ＶＨＳＶ病毒具有体外中和活性，其对ＶＨＳＶ病毒的ｇ蛋白亲和力（ｋｄ）达到１．４×１０～（．．．
关键词：
鱼 病毒性出血性败血症病毒 单链抗体
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
杜娟 兰文升 刘荭 郑晓聪 陈孝煊
通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)获得编码病毒性出血性败血症病毒(Viral hemorrhagic septicemia virus,VHSV)核蛋白基因,将其克隆至原核表达载体pET28a,并在E.coli BL21(DE3)中得到表达,用SDS-PAGE与Western-blot对表达产物进行鉴定。结果表明,通过RT-PCR扩增获得长度为1 221bp核蛋白基因片段,诱导表达重组质粒pET28a-N,经SDS-PAGE检测,IPTG终浓度为1mmol/L时,诱导5h蛋白表达量最高,获得的目的蛋白大小与N蛋白的预测分子质量一致,约为48ku。诱导后的菌液进行超声波破碎后,将沉淀和上清...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
朱若林 沈娇娇 蒋书东 杨彩桥 张晓华 鲍传和 彭开松
为了对鱼类病毒性出血性败血症病毒(viral hemorrhagic septicemia virus, VHSV)基质蛋白(matrix protein, M)进行功能研究,本实验通过PCR扩增了M基因全长序列,将其克隆至原核表达载体pET-32a(+),转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞后进行IPTG诱导表达,将纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,采用间接ELISA检测抗体效价,并运用Westernblot和间接免疫荧光检测抗体特异性。结果显示,M基因全长为606bp,IPTG诱导得到的融合蛋白主要以包涵体的形式存在,大小约为36 kD,比预计略小。间接ELISA检测抗体效价大于1:102400,Westernblot检测显示该抗体可以特异性识别纯化的融合蛋白和VHSV感染的鲤上皮瘤(epithelioma papulosum cyprini, EPC)细胞中的M蛋白。间接免疫荧光结果显示M蛋白多抗能识别感染VHSV的EPC细胞中的M蛋白,且M蛋白主要定位于细胞质和细胞膜。本研究中M蛋白多克隆抗体的制备将有助于开展M蛋白的功能研究及疾病的免疫学诊断。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王玢瑸 哲名家 刘光清 张淼涛
【目的】构建重组兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)VPg(Viral Protein Ge-nome-Linked,VPg)蛋白基因的原核表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达和纯化VPg蛋白,制备多克隆抗体,并检测抗体的基本特性。【方法】用PCR方法扩增RHDVVPg基因,将其克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,用IPTG诱导,使之重组表达VPg蛋白,并用镍柱亲和层析法纯化重组蛋白。PCR扩增获得了345bp的VPg基因,用纯化的重组VPg蛋白免疫试验兔,制备抗VPg的多克隆抗体,用Wes...
关键词：
VPg 原核表达 多克隆抗体
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张大鹏 吕宁 符容婕 郭蔼光
【目的】构建兔出血症病毒衣壳蛋白VP60基因的原核表达载体,进行原核表达并制备其蛋白抗体。【方法】以保存的VP60基因的质粒(pTeasy-VP60)为模版,用PCR方法获得VP60基因,并将其克隆到pET28a(+)载体上,构建重组表达载体pET28a(+)-VP60,酶切鉴定和测序验证后转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,优化诱导表达时间和IPTG浓度;利用镍离子螯合层析纯化重组蛋白,并制备了高效价的抗VP60多克隆抗体。【结果】成功构建了兔出血症病毒衣壳蛋白VP60的原核表达质粒pET28a(+)-VP60,其在大肠杆菌中以包涵体形式高效表达,重组蛋白分子质量为60ku,制备的...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
徐为燕
兔病毒性出血症是中国首先报道的一种毁灭性传染病。此病在各种病名下遍及欧洲大部分地区，但均无病原特征的描述。兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）是一种新发现的病毒，直径３２～３４ｎｍ，二十面体对称，无囊膜，存在于感染细胞的核和胞浆内。它对酸（ｐＨ３）、热（６０℃）、乙醚（２０％）和ＭｇＣｌ２（１ｍｏｌ／Ｌ）有坚强的抵抗力。在ＣｓＣｌ中的浮密度为１．３６～１．３８ｇ／ｃｍ２；在蔗糖梯度中的沉降系数为１６２Ｓ。它能凝集人红细胞，滴度可达１０×２１８以上。在细胞培养中很难适应。核酸为线状单股ＤＮＡ，末端有发夹结构。用体外合成的双股ＤＮＡ，取其酶切片段插入ＢＳ质粒后，转化ＤＨ大肠杆菌。从重组质粒提取的２个片段（ｐＹ...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
王玉娟 王秀华 曲宪成 朱岩松 黄倢
从暴发性死亡的革胡子鲶(Clarias gariepinus)中分离出可疑病原菌株2010111403(简称1403),分别采用细菌全细胞脂肪酸鉴定系统、Biolog微生物自动鉴定系统及细菌16 S rDNA序列分析三种方法对其鉴定,结果表明菌株1403为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)。分离菌株对健康革胡子鲶致病性测试表明其对革胡子鲶的半数致死剂量(LD50)为6.32×106菌落形成单位(CFU);实验感染革胡子鲶出现与自然发病相似症状,表明菌株1403是引起革胡子鲶发生暴发性死亡的主要致病病原。药敏试验表明,庆大霉素、四环素、阿奇霉素、氟哌酸、先锋霉素等9种抗生素...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
杨振慧 葛均青 刘荭 杨金先 郑晓聪 林天龙
根据鲤春病毒血症病毒(SVCV)基因组序列(GenBank:NC_002803),人工合成M基因开放阅读框序列,克隆至原核表达载体pET-32a(+),转化工程菌株BL21(DE3),在0.1 mmol.L-1 IPTG、37℃下诱导5 h,获得高效表达的M蛋白,但其主要以包涵体的形式存在,经超声破碎、包涵体纯化后,再经Ni亲和层析柱纯化,获得高纯度的M蛋白.以纯化的M蛋白为抗原免疫新西兰大白兔,制备了M蛋白的多克隆抗血清.ELISA检测显示抗血清的效价达1∶128000;western blot分析显示抗血清能够识别SVCV的M蛋白,表明其具有较好的灵敏性和特异性.
[期刊] 淡水渔业
[作者]
林婧楠 赵景壮 徐黎明 刘淼 任广明 卢彤岩
以鲤春病毒血症病毒(Spring Virernia of Carp Virus,SVCV)shlj1分离株基因组RNA为模板,利用RT-PCR扩增获得SVCV糖蛋白(Glycoprotein,G)部分基因序列(420 bp),克隆至pET-32a原核表达载体,构建重组质粒pET-32a-G;将重组质粒转入大肠杆菌Rosetta表达菌株,利用SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)对截短G蛋白的表达及纯化情况进行检测;将纯化的G蛋白免疫小鼠制备鼠抗血清,采用酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和细胞间接免疫荧光抗体试验(Indirect fluorescent antibody test,IFAT)对抗血清进行鉴定。SDS-PAGE结果显示该重组截短G蛋白与预期大小相符(约为35 kDa),以包涵体的形式表达;ELISA结果显示,制备的鼠抗截短G蛋白血清效价为1∶80 000;IFAT结果显示,抗血清能够识别不同地区的SVCV分离株(黑龙江省3株,辽宁省2株),在FITC标记的羊抗鼠IgG作用下,呈特异性绿色荧光。结果表明,制备的截短SVCV G蛋白具有良好的免疫原性,利用其所制备的抗体能够识别我国不同SVCV分离株病毒表面天然结构的糖蛋白。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李传山 任力刚 李维英 杨增岐 郭蔼光
为了在原核系统中高效表达兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白VP60,应用RT-PCR方法从兔出血症病毒(RHDV)西北分离株YL中克隆出了衣壳蛋白VP60基因并测序,结果显示,YL株VP60基因全长1740 bp,GC含量为55.3%,已在GenBank中注册(登录号为DQ530363),VP60基因与中国RHDV最早期分离株WX84的VP60基因核苷酸序列同源性为93.0%,氨基酸序列同源性为95.8%。构建成功YL株VP60基因原核表达载体VP60-pET32a,转化到大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中。1 mmol/L IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测结果显示,VP60融合蛋白分子...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
孔梓安 宋想胜 程如楠 甄思慧 吴竹青 吴清民 王真
为筛选牛病毒性腹泻-黏膜病病毒（Bovine viral diarrhea virus,BVDV）gP48蛋白的单链抗体，本研究利用噬菌体展示技术构建了gP48蛋白单链抗体克隆文库，通过微孔筛选法对抗体库进行3轮富集淘筛，利用ELISA技术测定单链抗体的亲和力，对亲和力较高的克隆进行基因测序分析和结合活性测定，旨在获得gP48蛋白的单链抗体。结果表明：1）成功构建了库容量为4.3×107的噬菌体单链抗体库，其重组率为83.3%，经三轮筛选对噬菌体抗体库进行富集，富集倍数为1.43×104;2）优化了间接ELISA方法，筛选到3株与BVDV gP48蛋白具有高亲和力的单链抗体以及其基因序列，通过IgBLAST分析显示，3株单链抗体均为鼠源IgG。综上，从gP48蛋白的单链抗体库中筛选获得3个具有高亲和力的单链抗体，可用于后续BVDV检测方法的建立。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
马鹏 李林杰 常秋燕 王悦萦 马晓霞 马忠仁
【目的】本研究旨在对来源于白牦牛的牛病毒性腹泻病毒(BVDV) GSTZ株的E0基因进行分析,并利用E0基因对GSTZ进行基因分型。【方法】通过提取牛病毒性腹泻病毒(BVDV) RNA,使用RT-PCR技术扩增BVDV E0基因,将其插入到pET-28a中,构建pET-28a-E0原核表达载体,转化BL21(DE3)感受态细胞,筛选阳性克隆,鉴定及测序。IPTG诱导后使用BVDV阳性血清作一抗,经western blot鉴定。根据E0基因的序列进行同源性分析以及构建E0基因系统发育进化树。利用DNAstar预测E0蛋白的抗原表位。【结果】本研究表达的E0蛋白大小与预期结果相符且该蛋白具有良好的抗原性。通过对E0基因序列的同源性分析以及构建E0基因系统发育进化树,说明牛病毒性腹泻病毒GSTZ株基因型可能属于牛病毒性腹泻病毒-1a亚型,也可能是其他基因亚型发生较大突变产生变异。通过预测E0蛋白B细胞的抗原表位主要位于:7-12、22-26、62-63、94-97、101-105、115-119、127-128、138-140、185-187、215-219位氨基酸残基; T细胞潜在优势抗原区域主要位于:10-14、19-31、36-43、52-58、77-86、96-98、137-140、148-150、167-191、209-211位氨基酸残基。【结论】E0蛋白具有良好的抗原性,通过对抗原表位预测以及对GSTZ进行基因分型,为后续基因工程疫苗和BVDV检测试剂盒的开发提供了理论依据。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
孟彦 肖汉兵 张林 李罗新 曾令兵
从患典型出血性败血症死亡的施氏鲟(Acipenser schrenckiiBrandt)脾脏组织分离到1株致病性病原菌。依Koch法则建立室内感染模型,一次感染试验和回归感染试验的试验组均可复制出与自然发病情况下相同的症状,根据Reed-Muench法计算病原菌半数致死浓度为1.17×107cfu/mL。对从自然发病和一次感染试验的病鱼体内分离的致病菌进行形态和VITEK全自动细菌生理生化表型鉴定以及16S rRNA基因部分序列进化树分析,结果表明导致施氏鲟出血性败血症的病原菌为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)。药物敏感试验结果显示,该病原菌对庆大霉素、环丙沙星、阿米卡...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
谢佳 韩春华 林健 段会娟 杨志远 赵际成 潘洁 刘月焕
【目的】阐明鸭出血性卵巢炎病毒(DHOV-HB株)感染鸭后的病毒血症,为深入了解鸭出血性卵巢炎的发病机理、诊断和疫苗研究提供依据。【方法】24只250日龄北京鸭芯片标记后分别经口感染100倍稀释的DHOV-HB株(3×104ELD50),并设空白对照组15只,同等条件下分别在隔离器内饲养,逐日观察10日,各组每日经翅静脉采集10只鸭血液(尽可能采集同一只鸭血液),用于病毒分离和抗体测定。将攻毒后1—10 d的血清样本经卵黄囊途径接种6日龄SPF鸡胚,每份血清以0.1 m L/胚的剂量接种5枚SPF鸡胚,鸡胚接种后置于37℃条件下继续孵化,每日定时照胚2次,及时收获并统计24—168 h之内死亡...
关键词：
鸭 鸭出血性卵巢炎 坦布苏病毒 病毒血症
文献操作()
导出元数据
文献计量分析
导出文件格式：WXtxt
删除
