- 年份
- 2024(5528)
- 2023(8017)
- 2022(7068)
- 2021(6482)
- 2020(5822)
- 2019(13368)
- 2018(13484)
- 2017(25859)
- 2016(14869)
- 2015(16776)
- 2014(17255)
- 2013(17101)
- 2012(16200)
- 2011(14582)
- 2010(14782)
- 2009(13859)
- 2008(13865)
- 2007(12825)
- 2006(10973)
- 2005(9889)
- 学科
- 济(59160)
- 经济(59091)
- 管理(38740)
- 业(36565)
- 企(29267)
- 企业(29267)
- 方法(28507)
- 数学(25356)
- 数学方法(25113)
- 财(16903)
- 农(16793)
- 中国(15408)
- 学(15384)
- 制(14010)
- 地方(12176)
- 业经(11174)
- 贸(11144)
- 贸易(11142)
- 体(10806)
- 易(10797)
- 农业(10472)
- 务(10468)
- 财务(10438)
- 财务管理(10407)
- 银(9965)
- 银行(9918)
- 企业财务(9876)
- 理论(9625)
- 融(9441)
- 行(9438)
- 机构
- 大学(215126)
- 学院(214607)
- 济(83695)
- 经济(81723)
- 研究(76173)
- 管理(75919)
- 理学(64980)
- 理学院(64163)
- 管理学(62726)
- 管理学院(62346)
- 中国(56679)
- 科学(50601)
- 农(47414)
- 京(46437)
- 所(41285)
- 财(39521)
- 农业(37984)
- 研究所(37793)
- 业大(37774)
- 中心(35034)
- 江(34048)
- 财经(31085)
- 北京(28929)
- 范(28166)
- 经(28076)
- 师范(27727)
- 院(26855)
- 州(26353)
- 经济学(25908)
- 技术(25557)
- 基金
- 项目(141926)
- 科学(108783)
- 基金(100378)
- 研究(99000)
- 家(89622)
- 国家(88907)
- 科学基金(73497)
- 社会(59682)
- 省(57442)
- 社会科(56419)
- 社会科学(56397)
- 基金项目(53014)
- 自然(48913)
- 划(48558)
- 自然科(47765)
- 自然科学(47747)
- 自然科学基金(46900)
- 教育(46620)
- 资助(42181)
- 编号(40649)
- 成果(34001)
- 重点(32831)
- 部(31155)
- 发(30758)
- 课题(29126)
- 创(28684)
- 计划(28392)
- 科研(27944)
- 创新(26995)
- 大学(25860)
共检索到318057条记录
发布时间倒序
- 发布时间倒序
- 相关度优先
文献计量分析
- 结果分析(前20)
- 结果分析(前50)
- 结果分析(前100)
- 结果分析(前200)
- 结果分析(前500)
[期刊] 华北农学报
[作者]
于天飞 谢鹏宇 孙婉姝 李静 尹海畅 黎明 于志丹
旨在探讨番鸭细小病毒(MDPV)非结构蛋白NS1与水禽真核翻译延伸因子1A1(eEF1A1)之间的互作关系。根据GenBank中已发表的北京鸭和浙东白鹅eEF1A1基因序列,经大肠杆菌偏爱密码子优化,人工合成的质粒分别命名为pUC57-DeEF1A1和pUC57-GeEF1A1;对含有MDPV YL08株NS1基因的重组质粒pUC57-NS1、pUC57-DeEF1A1和pUC57-GeEF1A1进行BamHⅠ和XhoⅠ双酶切,回收目的片段后分别插入到原核表达载体pGEX-6p-1和pET-32a中,构建了重组质粒pGEX-DeEF1A1、pET-GeEF1A1、pET-NS1和pGEX-NS1;重组质粒分别转化至大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导,获得了重组蛋白GST-DeEF1A1、TRX-GeEF1A1、TRX-NS1和GST-NS1的表达;采用HRP标记的GST单克隆抗体鉴定GST-DeEF1A1、HRP标记的His单克隆抗体鉴定TRX-GeEF1A1;采用HRP标记的His单克隆抗体鉴定TRX-NS1、HRP标记的GST单克隆抗体鉴定GST-NS1,采用MDPV感染番鸭血清鉴定TRX-NS1和GST-NS1的抗原性;采用GST pull-down试验验证GST-DeEF1A1与TRX-NS1、GST-NS1与TRX-GeEF1A1的互作。结果表明,获得的重组蛋白GST-DeEF1A1、TRX-GeEF1A1、TRX-NS1和GST-NS1的分子量分别为76.9,67.9,89.5,98.6 ku; GST-DeEF1A1和GST-NS1可与HRP标记的GST单克隆抗体特异性结合,TRX-GeEF1A1和TRX-NS1可与HRP标记的His单克隆抗体特异性结合;GST-NS1和TRX-NS1可与MDPV感染番鸭血清特异性结合,抗原性良好;GST pull-down试验中,GST-DeEF1A1可与TRX-NS1互作,GST-NS1不与TRX-GeEF1A1互作。本研究表明,MDPV NS1蛋白可以和北京鸭eEF1A1在体外相互作用而不能和浙东白鹅eEF1A1在体外相互作用,互作结果差异性可能与二者的102-106 aa, 108 aa的氨基酸残基有关。
[期刊] 华北农学报
[作者]
于天飞 谢鹏宇 孙婉姝 李静 尹海畅 黎明 于志丹
为了在大肠杆菌中表达抗鹅细小病毒(GPV) NS1蛋白单克隆抗体轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)基因,并测定其与NS1蛋白结合活性。对抗GPV NS1蛋白单克隆抗体VL、VH基因核苷酸序列依据大肠杆菌偏爱密码子进行优化,人工合成获得了含有可变区基因的重组质粒pUC57-VL和pUC57-VH。然后用Bam HⅠ/XhoⅠ双酶切pUC57-VL、pUC57-VH,回收340 bp的VL基因和370 bp的VH基因。目的基因通过Bam HⅠ/XhoⅠ多克隆位点分别插入至原核表达载体pET-32a,获得重组质粒pET-VL和pET-VH。重组质粒经Bam HⅠ单酶切和Bam HⅠ/XhoⅠ双酶切及测序鉴定。重组质粒分别转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导,获得了重组蛋白TRX-VL和TRX-VH的表达,分子量分别为30.3,31.4 ku。纯化后的重组蛋白能与His标签单克隆抗体发生特异性结合,鉴定结果表明,获得的纯化蛋白为目的蛋白。间接ELISA分析表明,0.4μg的TRX-VH可与25 ng的GST-NS1蛋白特异性结合而0.4μg的TRX-VL不能与各包被量的GST-NS1蛋白特异性结合,TRX-VH与GST-NS1蛋白的特异性结合可被1∶200稀释的GPV感染鹅血清完全阻断。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
廖健淇 谢芝勋 张民秀 张艳芳 罗思思 李孟 谢志勤 谢丽基 邓显文 范晴 曾婷婷 黄娇玲 王盛
【目的】原核表达鸡细小病毒（ChPV）的NS1和VP2蛋白，制备其多克隆抗体，为深入探究ChPV蛋白结构功能及建立血清学诊断方法提供物质基础。【方法】通过合成ChPV GX-Ch-PV-21毒株的NS1和VP2蛋白基因序列，构建原核重组表达载体pET-32a-NS1和pET-32a-VP2，将测序正确的重组质粒转化至大肠杆菌transsetta感受态细胞进行原核表达，优化表达条件，以十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳和免疫印迹（Western-blotting）方法鉴定NS1和VP2蛋白的表达情况。将表达产物免疫无特定病原体（SPF）鸡获得多克隆抗体，采用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法测定其效价，以Western-blotting和间接免疫荧光试验(IFA)对多克隆抗体进行鉴定。【结果】SDS-PAGE分析结果显示，NS1和VP2蛋白条带大小分别约为104.0和87.0 kD，与预期条带大小相符。对重组质粒pET-32a-VP2和pET-32a-NS1进行最佳诱导条件筛选，结果显示NS1蛋白表达的最佳诱导条件为异丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷（IPTG）终浓度1.0 mmol/mL，16 ℃诱导表达过夜；VP2蛋白表达的最佳诱导条件为IPTG终浓度0.8 mmol/mL，20 ℃诱导表达过夜。可溶性分析结果显示，NS1和VP2蛋白主要以包涵体形式存在；间接ELISA检测NS1和VP2蛋白的多克隆抗体效价均为1︰10240000；Western-blotting鉴定结果表明，His标签蛋白和相对应的鸡多克隆抗体均能与NS1和VP2蛋白特异性结合；IFA分析结果显示，VP2和NS1蛋白多克隆抗体均能与ChPV特异性结合。【结论】成功表达ChPV的NS1和VP2蛋白和制备的鸡多克隆抗体，可作为深入探究ChPV蛋白结构功能及建立ChPV血清学诊断方法的基础材料。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
田莉莉 李丽
【目的】建立一种快速检测猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)野毒抗体的方法。【方法】参照已发表的PPV基因组(AY502114.1)序列设计合成特异性引物,利用PCR扩增PPV NS1基因主要抗原区域,将目的片段定向克隆至表达载体pET30a(+),转化BL21(DE3)表达菌,用IPTG诱导表达重组蛋白。以该蛋白作为诊断抗原,经过对间接ELISA条件的优化,建立检测PPV抗体的NS1-ELISA诊断方法,对该方法的特异性、敏感性、重复性进行检测。用建立的PPV NS1-ELISA诊断方法和血凝抑制试验(HI)同时对临床送检的306份血清样品进行检测,比较二者的符合率。【...
[期刊] 华北农学报
[作者]
赵冬敏 黄欣梅 刘宇卓 张敬峰 韩凯凯 谢星星 周晓波 李银
根据鹅坦布苏病毒JS804株非结构蛋白NS1基因序列,设计1对特异性引物,利用PCR方法扩增得到完整的NS1基因,并将其克隆至原核表达载体pET28a和pET32a上,构建出重组表达质粒pET28a-NS1和pET32a-NS1,转化至BL21(DE3)中,经IPTG诱导得到NS1融合蛋白(His-NS1),其分子质量约分别为44,58 kDa,均在诱导后6 h达到表达量高峰。分析显示,2种融合蛋白均以包涵体形式存在,包涵体经过变性和复性后均可获得单一、高表达量的目的蛋白,为进一步开展关于鹅坦布苏病毒NS1蛋白的研究奠定了基础。
关键词：
鹅坦布苏病毒 NS1蛋白 原核表达
[期刊] 华中师范大学学报(自然科学版)
[作者]
章纳 王衡瑞 毛彦娜 张成林 秦斌 王志民
寨卡病毒(Zika Virus)属于黄病毒科中的黄病毒属,虽然很早就已经被人类所发现,但是一直到2015年在南美巴西的大规模爆发,才引起了广泛的关注.寨卡病毒对人类的感染往往引起包括小头畸形和格林-巴利综合征在内的多种症状.寨卡病毒的基因组为单链正链RNA,其基因组可以编码翻译并剪切加工出3个结构蛋白,分别为膜蛋白,囊膜蛋白和核衣壳蛋白,以及7个非结构蛋白(NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B, NS5).相关研究已经证明,NS1蛋白与同属黄病毒属的登革病毒的发病有紧密的联系,而且根据其蛋白结构推测其可能与寨卡病毒穿越血脑屏障有关.因此鉴别NS1与细胞内的相互作用蛋白对于发现寨卡病毒在细胞内的转运,转录,以及装配都有重大的意义.在此,该课题构建并在HEK293细胞中表达包含Flag和Strep两种标签的NS1融合蛋白,通过免疫沉淀的方法将与NS1结合的蛋白利用标签蛋白进行分离,利用高分辨生物质谱技术,对蛋白进行分析鉴定.通过分别带有Flag与Strep标签的相互作用蛋白分析,发现了16个两种标签共同的结合蛋白,其进一步的通路分析证明这些蛋白于与病毒转录、病毒复制和免疫反应多个通路有关,相关的研究结果为今后进一步研究寨卡病毒的复制机制以及开发抗病毒药物提供了重要的参考价值.
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
代广中 袁兆栋 苟洪兰 方庆 朱辉 张忠明
利用酵母双杂交技术,以百脉根离子通道蛋白Pollux胞内结构域为诱饵,从百脉根AD-cDNA文库中筛选到与Pollux相互作用的多个阳性克隆,经DNA序列测定及NCBI数据库BLAST分析,其中有6个阳性克隆编码翻译延伸因子EF1A。进一步在大肠杆菌中表达与纯化Pollux和EF1A融合蛋白,通过Pull-down及Western杂交证实Pollux胞内结构域与EF1A的C-末端相互作用。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
邱莹 胡传伟 朱晓林 谢之景 赵宏坤 姜世金 张兴晓 陈甜甜
根据GeneBank上发表的猪细小病毒(PPV)的基因组序列,分别设计扩增非结构蛋白NS1基因和结构蛋白VP2基因的特异性引物,采用PCR方法扩增PPV泰安株(PPV-TA)NS1基因和VP2基因。结果表明,PPV-TANS1基因长1989 bp,编码662个氨基酸,与参考PPVNS1基因核苷酸同源性在98.3%~99.9%之间。PPV-TA NS1蛋白有3个糖基化位点分别是356NIS、446NFS、513NLT,除PPV Tomau/1/02在356位缺失了一个糖基化位点之外,PPV-TA与其他PPV参考毒株一致;这表明不同毒株NS1蛋白调节功能可能有差异。PPV-TA NS1蛋白的潜在磷...
关键词：
猪细小病毒 NS1基因 VP2基因
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
潘俊慧 刘亚林 梁真洁 杨兴淼 谢盛达 曹瑞兵
[目的]本实验旨在探究日本脑炎病毒（Japanese Encephalitis Virus， JEV）NS1蛋白的生物学功能。[方法]将JEV NS1基因克隆到pFastbac1载体并将其转化至DH10Bac感受态得到重组杆粒，将重组杆粒转染sf9细胞产生重组杆状病毒，通过病毒感染High5细胞成功表达了JEV NS1。在人脑内皮细胞上清中添加外源NS1蛋白后，通过光学显微镜观察细胞形态，利用共聚焦检测显微镜观察JEV NS1蛋白对人脑内皮细胞表面的唾液酸修饰的影响，IFA检测细胞中组织蛋白酶L的表达；小鼠尾静脉注射JEV NS1及其N207糖基化位点突变体蛋白NS1 N207Q，在不同的时间段通过伊文思蓝染色（EB）来评估小鼠的血脑屏障（BBB）通透性。[结果]JEV NS1蛋白能通过下调人脑内皮细胞表面的唾液酸修饰和上调组织蛋白酶L表达导致内皮糖萼损伤；动物实验表明NS1蛋白能够破坏小鼠的血脑屏障；NS1 N207Q蛋白处理细胞对其表面唾液酸修饰的影响不显著，体内处理对小鼠的血脑屏障无明显损伤。[结论]JEV NS1蛋白具有损伤脑内皮的生物学功能，突变N207位点后导致其损伤功能大幅度减弱，可为JEV亚单位疫苗候选抗原的优化提供新思路。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
刘伟 程晓霞 陈少莺
应用交叉免疫印迹方法,分析比较了番鸭源小鹅瘟病毒(MDGPV)和番鸭细小病毒(MDPV)结构蛋白抗原性的差异.结果表明:MDGPV和MDPV纯化病毒在SDS-PAGE分析中均呈现3种结构蛋白,分子质量分别为81、65和55 ku;在免疫印迹试验中,MDGPV和MDPV的VP1、VP2和VP3三种结构蛋白均可被同源抗血清识别,而异源抗血清均不能识别VP1蛋白;免疫番鸭血清和感染耐过番鸭血清识别的条带无明显区别.可见,MDGPV和MDPV的抗原性差异主要体现在VP1蛋白上.
[期刊] 中国农业科学
[作者]
安秀红 厉恩茂 李敏 李壮 张修德 程存刚
【目的】克隆苹果茉莉酸信号途径阻遏因子基因ＭｄＪＡＺ１，并对其表达及蛋白互作进行分析，为进一步研究ＭｄＪＡＺ１的功能奠定基础。【方法】以ＴＩＦＹ及ＪＡｓ功能域为探针，在苹果基因组中进行比对，获得多个同源基因，对其中的一个基因设计引物进行克隆；利用ｄＮＡＭＡＮ软件对该基因编码蛋白的分子量、等电点进行预测；利用ｓＭＡＲＴ在线分析软件对该蛋白的功能域进行分析；利用ＭＥＧＡ５．０对该蛋白与拟南芥ＪＡＺ家族蛋白构建系统发育树；利用荧光定量ＰＣＲ分析该基因在苹果不同组织器官、茉莉酸甲酯及创伤处理下的表达情况；利用ＰｌＡＮＴ ＣＡＲＥ在线软件分析该基因启动子区域的顺式作用元件；利用酵母双杂交系统检测ＭｄＪＡ．．．
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
陈晓月 梁华 刘明春 王建民 于立辉 范宏发 赵玉军
根据GenBank登陆的鹅细小病毒B株全基因组的核苷酸序列,设计合成一对引物,用PCR方法对GPV LN-1/06株的主要结构蛋白基因进行克隆,并对克隆的片段进行序列测定,用生物信息学软件进行序列分析。结果表明:所扩增的GPV LN-1/06株的基因长度为1605bp,包括VP3完整的开放阅读框,共编码534个氨基酸。与登录的20株国内和国外的GPV的VP3基因序列进行同源性分析表明,GPV LN-1/06株与其他20株VP3基因的核苷酸同源性较高,从93%至99%,说明GPV的VP3基因较为保守。系统进化树分析表明GPV-LN01/06病毒株与HG5/82为一组,具有较近的亲缘关系。本试验首...
关键词：
鹅细小病毒 结构蛋白基因 克隆 序列分析
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
李华 杨汉春
利用反转录一套式聚合酶链式反应技术从北京地区禽传染性支气管炎病毒(IBV)分离株 BJ_1、BJ_2、BJ_3株中成功扩增出1054bp 纤突蛋白高变区。利用限制性内切酶 Sin Ⅰ和 Pst Ⅰ的酶切分析证实了RT-nested PCR 的特异性,结合计算机酶切位点分析图谱进行理论 RFLP 分析。将三段 S_1基因分别克隆到pUC19质粒中,获得重组质粒 pUC IBV S_1-BJ_1、pUC IBV S_1-BJ_2、pUC IBV S_1-BJ_3。利用双脱氧链终止法对三个重组质粒进行双向测序,获得三株分离株 S_1基因高变区的序列。将得到的三个序列与标准株 M_(41),Beaud...
[期刊] 华北农学报
[作者]
温立斌 何孔旺 杨汉春 刘梦雅
旨为制备兔抗类猪圆环病毒因子P1的特异性抗体,对其在病原学方面的应用进行研究。采用人工合成选定的表位肽,将其与载体蛋白KLH偶联后免疫新西兰大白兔制备抗P1多克隆抗体,通过免疫组化对该多抗与P1的反应性进行检测。获得了抗P1多克隆抗体;免疫组化结果显示抗体可与P1病毒蛋白出现特异性反应。偶联后的P1表位肽具有免疫原性,可用于制备相应的抗体;制备的抗体特异性良好,可用于P1病原学方面的研究。
关键词：
P1 合成肽 多克隆抗体
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
任珍珍 刘晶晶 柳晓磊 陈永 李珣 胡美英
【目的】探索重叠延伸PCR法在昆虫化学感受蛋白基因点突变上的应用,研究半胱氨酸(Cys32)对小菜蛾(Plutella xylostella)化学感受蛋白1(PlxyCSP1)结合特性的影响。【方法】用计算机软件模拟PlxyCSP1上Cys32突变前后的蛋白三级结构以及与配体化合物的结合情况,确定点突变位点。根据扩增得到的PlxyCSP1序列设计并合成重叠引物,利用重叠延伸PCR法,将PlxyCSP1上的Cys32突变成色氨酸(Trp32),获得突变体PlxyCSP1-M。将突变后的基因与载体pET-32a(+)连接,转化大肠杆菌BL21(DE3)。【结果】分子对接图显示,配体可以顺利进入Pl...
文献操作()
导出元数据
文献计量分析
导出文件格式：WXtxt
删除
