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[期刊] 中国农业科学
[作者]
吴旭 严美姣 刘丽平 傅星源 连森阳 李昂
【目的】寻找与番鸭就巢性状相关的表达基因,了解其就巢调控的分子机理。【方法】采用cDNA-AFLP(cDNA-amplified fragment length polymorphism)技术分析遗传背景相近的RF系白羽番鸭就巢个体和非就巢个体脑垂体基因表达差异。【结果】筛选到与就巢行为相关差异表达片段82条,选取其中15条进行测序。将测序结果在GenBank数据库进行BLAST比较和分析,发现8个片段(53.3%)与已知基因具有较高同源性,涉及与繁殖性能紧密相关的下丘脑-垂体-性腺轴(hypothalamic-pituitary-gonadal,HPG)上的功能基因,如GnRH基因、FSH基...
[期刊] 浙江林学院学报
[作者]
黄有军 周丽 陈芳芳 周秦 黄坚钦 黄敏仁 王明庥
为缩短山核桃Carya cathayensis童期,促进成花,探讨木本植物成花机制,以山核桃为材料,采取成花决定前、成花决定期和成花决定后共3个时段的雌花芽,利用互补脱氧核酸扩增片段长度多态性(cDNA-AFLP)技术克隆成花相关的特异基因片段(TDFs)。试验共获得278个TDFs,经测序和序列同源性分析,其中65个TDFs为未知基因序列,213个TDFs具有同源序列,其功能涉及激素合成、酶合成、细胞信号转导、叶绿体合成和光诱导等。
[期刊] 华北农学报
[作者]
赵继荣 雒淑珍 张增艳 刘红霞
cDNA-AFLP是一种新的mRNA指纹图谱技术,具有重现性高、准确、可靠的特点,可对生物体转录组进行全面分析,广泛应用于基因表达特性研究、植物遗传标记分析和分离植物基因等方面。近年来随着该技术的不断发展和应用,在研究中取得了很多成果。本研究就cDNA-AFLP技术的原理和特点,在植物基因表达研究中的应用现状和发展前景进行了综述。
关键词：
cDNA-AFLP mRNA 基因表达
[期刊] 华北农学报
[作者]
陈永胜 李国瑞 黄凤兰 王文跃
为筛选调控蓖麻株高、叶型及产量相关的优良基因,培育出节间较短、茎体粗壮而长度适中、高产的蓖麻矮化良种。采用cDNA-AFLP技术分析始花期矮秆蓖麻茎秆的cDNA表达差异片段,共回收128条差异片段,114条可在Balatx数据库中查询,39条序列被Blast2GO中的GO注释。这些基因几乎涵盖了与矮化相关的各类基因,涉及细胞生长、分化、信号转导、转录调控、物质与能量代谢及运输等,可能在蓖麻矮化机制中起重要或决定性作用,为揭示蓖麻矮化的分子机制找到新的突破口。
关键词：
蓖麻 矮杆 cDNA-AFLP 差异基因
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
郭秀林 张正斌 李景娟 李广敏
cDNA-AFLP技术是以mRNA反转录的cDNA为模板进行AFLP分析,在保留AFLP多态性丰富、稳定性高、无需了解序列信息等优点的同时,集中显示了基因组表达序列的多态性差异,可对生物体转录组进行全面、系统的分析,并已成功地用于基因差异显示、表达基因遗传连锁作图和基因克隆等方面。文章综述了cDNA-AFLP在植物抗逆性相关基因表达特性分析及基因分离方面的应用。
[期刊] 浙江林学院学报
[作者]
郑炳松 陈苗 褚怀亮 艾雪 黄有军 李雪芹 黄坚钦
利用cDNA-AFLP(互补脱氧核糖核酸-扩增片段长度多态性)技术,在山核桃Carya carthayensis嫁接过程中分离得到1个与山核桃嫁接相关的cDNA片段。与美国国家生物技术信息中心(NCBI)同源性比较分析表明,该cDNA片段与小麦生长素响应因子部分区段有81%的同源性,命名为CcARF。荧光定量实时聚合酶链式反应(RT-PCR)分析表明:该基因在山核桃嫁接前砧木和接穗中都有强烈表达,但在嫁接后3d急剧下降,在这之后砧木中的表达增强不大,而接穗中嫁接后7d表达开始增强,到嫁接后14d表达明显,比嫁接后3d增强了4.7倍。该CcARF片段可能对山核桃嫁接起到基因表达调控的作用。图3表...
[期刊] 华北农学报
[作者]
霍秀爱 杨炳艳 刘云婷 段会军
为了探讨乙烯利调控玉米生长的分子机理,以郑单958为材料,拔节期叶面喷施225 mL/hm2浓度的乙烯利,同体积清水为对照。在不同时间取茎端分生组织样品,采用cDNA-AFLP(RT-PCR)进行基因差异表达分析。结果表明,利用70条引物共扩增1 635条片段,其中上调表达的有600条,占总条带的36.7%;下调表达的有564条,占总条带的34.5%;无差异表达的有471条,占总条带数的28.8%。选择重复扩增稳定的30条差异片断进行回收测序,经过BlastX比对分析这些差异表达基因片段,按功能可分为信号转导相关基因(6.7%)、抗性相关基因(16.7%)、能量与代谢相关基因(20.0%)、转...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
钟文娟 张超 戢沛城 龚一耘 牟方生 蒲德强 袁灿 杜雄明
【目的】为了探究矮化突变体AS98发生变异的分子生物学机制,【方法】本研究利用正常陆地棉品种LHF10W99(简称LHF)与AS98杂交后代分离出的正常表现型植株和极端矮化表现型植株,在现蕾期提取2种株型的茎尖、茎和根的RNA,利用cDNA-AFLP技术分析2种植株茎尖的表达差异。【结果】筛选到差异表达的片段32条,对这32条片段进行克隆测序,利用生物信息学进行分析发现其中一条(HD61)与拟南芥的阿拉伯半乳聚糖蛋白的同源性较高。用棉花的阿拉伯半乳聚糖蛋白(Gh AGP)的序列设计引物,用RT-PCR方法
关键词：
棉花 矮化突变体 cDNA-AFLP
[期刊] 林业科学研究
[作者]
暴帅 孔雪 邢磊 张翠霞 官民晓 赵丽红 刘闯 刘雪梅
白桦雄花发育周期较长,从出现雄花序至花粉成熟经历近一年,其发育早期和中期是决定雄配子体发育的重要时期。采用cDNA-AFLP方法对白桦早期和中期发育雄花序进行了差异表达谱分析,共得到了62个TDFs,其中30个TDFs与Genbank中的基因具有较高的同源性,其它32个是未知序列。GO分析结果显示,这些已知基因主要参与代谢过程、细胞过程、刺激应答、生殖、信号传导和生物调控等生物学过程,其分子功能主要涉及催化活性、结合分子功能、酶调节活性和转运活性等;发现了参与生殖和雄花发育的两个重要TDFs,Bplbs658和Bplbs199。另外,选择11个TDFs进行不同组织的qRT-PCR转录表达分析,...
[期刊] 林业科学
[作者]
刘雪梅 刘瀛 宋福南 邢磊 戴超 杨传平
白桦是雌雄同株的单性花树种,已发现的天然的雄花序突变体,其结构和生殖发育均不同于正常雄花序,显示出明显的雄性不育特征。为揭示该雄花突变体的发育机制,采用cDNA-AFLP分子标记技术,分析白桦雄花突变体发育早期的差异基因表达谱,共获得81个ESTs,51个ESTs与GenBank中的基因相似性较低,视为新基因,30个ESTs与已知蛋白具有较高同源性。GO和KEGG对其功能的注释表明,这些蛋白参与催化活性、结合活性、生物调节信号转导、生物合成以及基因编码转录因子和花发育等过程。选择5个与白桦花发育有关的ESTs,分别为MAP激酶、泛素结合酶、纤维素合成酶、热激蛋白和细胞色素P450,应用Real...
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
李里 江涛 吴海 周安佩 王滨蔚 刘东玉 何承忠
为探讨滇杨分枝特性差异的分子机理,以采集于四川省和云南省的59个滇杨优树无性系3a苗木为研究对象,采用cDNA-AFLP技术,分析苗木侧芽萌动时表达基因的多样性。研究结果显示,筛选出的7对引物组合共扩增出了577条带,其中差异性条带数为318条,差异性条带比率为55.11%,Nei’s基因多样性指数为0.097 8,Shannon信息指数为0.172 1,基因分化系数为0.016 7,居群间的基因流为29.42,表明居群间的遗传分化程度较低。AMOVA分析显示,居群间的差异占2.13%,居群内差异占97.87%,且居群间和居群内均差异极显著。表明滇杨侧芽萌动时基因表达较复杂,使进一步开展分枝相...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李丽 缪中纬 辛清武 朱志明 章琳俐 庄晓东 郑嫩珠
【目的】研究半番鸭与番鸭精巢组织转录组差异表达基因,为进一步阐明半番鸭不育的遗传机制奠定理论基础。【方法】利用转录组测序方法对半番鸭和番鸭的精巢组织进行研究,筛选其差异表达基因,并对其功能进行注释和荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,QRT-PCR)验证。【结果】测序共获得43.84Gb Clean Data,组装后共获得193 535条Unigene。DESeq分析发现3 597个基因在两个鸭品种间差异表达,其中上调基因1 194个和下调基因2 403个,包括与生殖功能
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
吴旭 严美姣 刘丽平 连森阳 傅星源 王光瑛 李昂
以番鸭脑垂体为材料,用Trizol法提取总RNA,用Superscipt II-RT合成第一链cDNA,RNase H和DNA Polymerase合成第二链cDNA,最后用EcoRⅠ/MseⅠ分步酶切cDNA各2 h,经T4连接酶合成双链cDNA,预扩增反应后产物稀释40倍进行选择性扩增反应.经1%琼脂糖电泳及6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测的结果显示,番鸭脑垂体总RNA的提取及cDNA-AFLP预扩增和选择性扩增的效果良好.番鸭cDNA-AFLP反应体系的建立为番鸭就巢的分子机理研究奠定了基础.
关键词：
番鸭 cDNA-AFLP 体系建立
[期刊] 中国农业科学
[作者]
栾兆杰 曹远银 李天亚 陈思 陈秀梅 朱桂清 李伟华
【目的】分析中国重要辅助鉴别寄主明尼2761经小麦秆锈菌诱导后的基因表达谱,寻找与其抗病基因表达相关的片段。【方法】运用cDNA-AFLP技术研究明尼2761和感病对照Thatcher分别接种小麦秆锈菌后的基因表达差异,对与明尼2761抗病相关的特异表达片段进行分析。【结果】140对AFLP引物组合能够检测到约7 000多条差异表达转录衍生片段(TDF),平均每一对引物可以获得50条条带,其中有86对引物能够在明尼2761和Thatcher之间扩增出差异条带。对可能与抗病相关的35条特异TDF进行克隆测序,经BLASTx比对,30条TDF在数据库中能够找到同源序列,其中24条TDF功能已知,6...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
金四华 杨磊 童雨翠 范心凤 何婷婷 汪加发 李永胜 耿照玉
[目的]本试验旨在探讨AMP激活蛋白激酶α1和α2基因(PRKAA1、PRKAA2)在高、低饲料效率组肉鸭胸大肌、腿肌和肝脏中表达水平及其与剩余采食量(RFI)性状的相关性。[方法]选取体质量相近的H系肉公鸭1 000只,测定21~42日龄时的采食量和体增重,计算RFI。挑选高、低RFI组肉鸭各8只,采用定量PCR检测PRKAA1和PRKAA2在2组肉鸭胸大肌、腿肌和肝脏中表达水平。[结果]PRKAA1 mRNA在低RFI组肉鸭胸大肌中表达量极显著高于高RFI组(P<0.01),腿肌中表达量显著高于高RFI组(P<0.05),腿肌中相对表达量与日采食量和RFI显著负相关(P<0.05),腿肌中相对表达量与RFI呈显著负相关关系(P<0.05)。[结论]PRKAA1和PRKAA2基因在高、低RFI组肉鸭胸大肌和腿肌中表达量存在显著差异且与剩余采食量性状显著相关。
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