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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
刘智 马爱芝 张晓舟 张小华 李顺鹏
从甲基对硫磷降解菌DLL E4 (Pseudomonasputida)中提取水解酶 ,对其酶促反应进行研究 ,建立了反应体系 :4 74 μLNa2 HPO4 柠檬酸缓冲液 ,12 5 μL甲基对硫磷 ,1 5 μg粗蛋白 ,35℃水浴 5min。水解酶保持稳定的 pH值范围为 5 0～ 10 0 ,最适 pH为 7 0。该酶热不稳定 ,4 5℃ 30min处理 ,酶活下降 5 0 % ;10 0℃ 10min处理可完全灭活。测定了 11种金属离子、TWEEN 80、TritonX 10 0及EDTA对水解酶的作用 ,发现 2 0mmol·L-1CoCl2 对酶活有明显的抑制作用 ,而 ...
关键词：
甲基对硫磷水解酶 酶促反应体系 特性
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李亚楠 张彦博 胡美英 陈少华 胡振 易欣 林惠花
甲基对硫磷水解酶(MPH)能高效降解甲基对硫磷,并能够降解杀螟松、乙基对硫磷和毒死蜱,但降解效率依次降低。为提高MPH对毒死蜱的降解活性,采用易错PCR的方法对MPH进行随机突变,筛选到2株突变体A291V和K173R,并对其进行原核表达,结果表明K173R对毒死蜱的降解活性比MPH提高了41.55%。通过同源建模及与毒死蜱的分子对接对酶的结构和功能进行初步分析,结果发现氨基酸残基R72在酶与毒死蜱的结合中起着重要作用。结合口袋和关键氨基酸的变化可最终导致K173R酶活性的提高。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张金 吕良忠 陈立伟 蔡天明 胡江 蔡舒
从被聚乙二醇(PEG)长期污染的土壤中分离得到1株能够水解PEG但不能以PEG为唯一碳源生长的菌株PG-3,结合生理生化特征及16S rDNA基因序列同源性分析,将该菌株初步鉴定为Achromobacter sp.。LC-MS分析发现该菌株的代谢产物中出现了聚合度下降的聚乙二醇,表明其可能以水解的方式直接断裂PEG 1000中的醚键。菌株PG-3分泌的聚乙二醇水解酶(PEG-HD)为诱导酶,PEG 600～2000都能诱导其产生,其中PEG 1000诱导效果最佳;该酶最适反应温度为40℃,最适作用pH值为8.0,Cu2+、Zn2+对酶有抑制作用。PEG-HD的米氏常数(Km)为3.97 mmo...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
陶宏亮 关燕萍 苏晓峰 柳训才 韦明元 李胜清 陈浩
采用乙腈提取,ENVI-18固相萃取,丙酮洗脱,C18高效液相色谱分离柱,甲醇-水(体积比85∶15)流动相,紫外检测波长275 nm,建立了同时测定蔬菜中甲基对硫磷和对硫磷残留量的固相萃取-高效液相色谱法。结果表明:测定甲基对硫磷和对硫磷农药残留量的线性范围为0.05~5.00 mg/L,相关系数0.999 8~0.999 9,检出限0.025~0.031 mg/L,加标回收率81.60%~93.60%,相对标准偏差5.3%~2.9%。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
徐达 吴小卡 荆雅玮 左佳坤 米荣升 黄燕 陈兆国 王成明 韩先干
[目的]细菌的sah H基因编码S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(Sah H),该酶参与细菌的甲硫氨酸循环(AMC),调控细菌的多种生理功能。[方法]通过构建重组表达质粒p ET28a-Bru-sah H和p ET28a-Pse-sah H,分别表达布鲁菌(Brucella abortus)S2308株和铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)PAO1株的Sah H重组蛋白Bru-Sah H和Pse-Sah H。将纯化后的Bru-Sah H、Pse-Sah H以及我们前期表达纯化的禽致病性大
[期刊] 水产学报
[作者]
高瑞昌 袁丽 于刚 冯慧 薛勇 李兆杰 薛长湖
采用离子色谱方法检测添加的焦磷酸四钠(TSPP)在新鲜碎鳙鱼肉中所发生的水解过程,并研究了焦磷酸盐水解酶(PPase)粗酶的特性。研究结果表明,添加到新鲜碎鳙鱼肉中的TSPP能被水解为单磷酸(Pi);鳙鱼肉中存在PPase,并且是水溶性蛋白。PPase粗酶水解TSPP的最适温度为50℃,最适pH为8.0。Mg2+、Mn2+和Co2+均可以激活PPase,但是Mg2+激活酶能力最强。Mg2+浓度为1mol.L-1时,PPase活性达到了0.023μmol.min-1.mg-1,显著高于其他两种金属离子的激活作用。葡萄糖-6-磷酸(G-6-P)能够强烈抑制PPase活性;EDTA-Na2在浓度小于...
关键词：
鳙 焦磷酸盐水解 焦磷酸盐水解酶
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
施利利 郭玉华 张欣 蔡宝立 孙宗修 王松文
成功构建了阿特拉津氯水解酶基因植物表达载体p1301-atzA。构建方法为:第一步将用EcoRI和HindⅢ双酶切得到的atzA基因与也经过这两个酶双酶切的pBluescriptⅡSK(+/-)载体连接,构建成pSK-atzA,用EcoRI和HindⅢ双酶切鉴定插入片段大小为1.5kb;第二步将pSK-atzA用SalI和SacI双酶切,同也经过这两个酶双酶切的pCAMBIA301载体连接,用SalI-SacI双酶切鉴定插入片段大小为1.5kb,从而构建成p1301-atzA,并用冻融法将重组子导入根癌农杆菌EHA105中,并用酶切和PCR方法进行了鉴定。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
宁鹏 费英 徐幸莲 周光宏 彭增起
以酶反应速率受温度影响为理论基础,研究用于监测环境温度的时间-温度指示卡(time-temperature indicator,TTI)。试验选择了适合碱性脂肪酶的反应体系,最终确定了碱性脂肪酶型TTI反应体系中的参数:1 g.L-1碱性脂肪酶0.1 mL,三乙酸甘油酯0.5 mL为反应底物,20 g.L-1聚乙烯醇(polyvinyl alcohol,PVA)9.5 mL作为乳化剂,pH10.6的0.05 mol.L-1Gly-NaOH缓冲液39 mL,1 mol.L-1氯化钙溶液0.7 mL,酚红-酚酞-百里酚酞混合指示剂0.2 mL。通过测定反应体系在不同温度条件下的反应速率,最终确定反...
[期刊] 上海水产大学学报
[作者]
李晓晖 俞勇 李会荣 张琳 任大明
对北极海冰获得的14株低温微生物进行培养条件和胞外水解酶活力的研究,结果表明:(1)菌株最适生长温度均为15℃和20℃左右,最适pH在8.0左右,在酸性条件下几乎不生长。生长需要一定浓度的盐,在3%NaC l的培养基中能很好的生长,而在没有NaC l的培养基中不生长。(2)14株菌株能不同程度的分泌胞外水解酶。(3)菌株i429,i539在低温下产纤维素酶的活力最高,具有低温酶的特性。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
周洁 郑祥梓 兰斓 林成增 林雄杰 鲁国东 王宗华
【目的】了解糖基水解酶62家族细胞壁降解酶系在稻瘟病菌致病中的作用。【方法】通过生物信息学方法对稻瘟病菌基因组中假定的糖基水解酶62家族成员进行基因结构、蛋白分泌特性及系统发育分析,并对其中一个成员MGG_01403.6进行过量表达、基因敲除分析。【结果】该家族共有8个成员,均具有细胞壁降解酶(糖基水解酶62家族)保守结构域,且均为胞外分泌蛋白;系统发育分析可以将这些成员分别聚类在两个进化分支中;成员间在不同侵染阶段表达模式有差异;MGG_01403.6过量表达和基因敲除均不影响稻瘟病菌的致病性。【结论】糖基水解酶62家族可能存在功能冗余作用,进一步的双突变或多突变可能是明确这类多基因家族基因...
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
樊甄姣 刘志鸿 杨爱国 戴继勋 任建峰 董迎辉
研究了注射不同剂量Vc对栉孔扇贝(Chlamysfarreri)体内5种参与免疫防御反应的水解酶和抗氧化酶活性的影响。结果表明,当Vc注射剂量为20μg/g和40μg/g时,在注射后12、24和48h,两实验组栉孔扇贝体内溶菌酶(LSZ)、酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(ALP)活性都明显升高,而超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性均明显降低。同时本实验发现,Vc对40μg/g实验组中各种酶的活性刺激与20μg/g实验组相比需要更长的时间。本研究表明,Vc可有效增强栉孔扇贝的免疫活性,且因剂量不同而有差异。
关键词：
Vc 栉孔扇贝 水解酶 抗氧化酶
[期刊] 中国农业科学
[作者]
屈明博 刘田 陈磊 陈琦 杨青
糖基水解酶20家族β-N-乙酰己糖胺酶是N-乙酰己糖胺代谢过程中一个重要的酶,其可将位于非还原端以β糖苷键连接的N-乙酰己糖胺从寡糖及糖复合物中水解下来。昆虫糖基水解酶20家族β-N-乙酰已糖胺酶参与昆虫多个生理过程,包括表皮几丁质水解、蛋白质N糖基化修饰、糖复合物水解及精卵识别,因此可能成为生态农药设计的潜在靶标,受到国内外学者的普遍关注。根据昆虫20家族β-N-乙酰己糖胺酶的进化关系和生理功能,可以将其分为4个亚家族,分别为Hex1、Hex2、Hex3和Hex4。Hex1主要在昆虫蜕皮时期的表皮中表达,RNA干扰该基因能够导致昆虫在发育过程中不能正常蜕皮而死亡。通过酶学性质研究发现,Hex...
[期刊] 上海水产大学学报
[作者]
王宏伟 杨丽坤 赵建华 姜玉梅 李玲 张兰军
研究了在对硫磷胁迫下饲料中添加不同硒源对中华米虾(Caridina denticulata sinensis)超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性的影响。结果表明,饲料中添加等量无机硒和有机硒,有机硒组米虾的SOD和CAT活性均高于无机硒组(P<0.0...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
张红星 李茜茜 叶婷 李维琳 李林
利用丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)冰核基因的N-末端(inpn)作为锚定单元(anchoring mo-tif),通过与来自黄杆菌属(Flavobacteriumsp.)的有机磷水解酶基因opd构建融合基因inpn-opd,并连接于假单胞菌表达载体pYMBP,然后导入恶臭假单胞菌(P.putida)野生型菌株AB92019,获得了能在其细胞表面展示有机磷水解酶并具有全细胞酶催化活性的重组工程菌MMBL-opd。SDS-PAGE结果表明,融合基因能表达产生80 ku的蛋白质。重组菌MMBL-opd在无抗性LB固体培养基上能稳定生长,所携带的外源质粒的稳定性达到100%;...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张存政 刘贤进 余向阳 王冬兰 高亮
将对硫磷代谢类似物进行了改造 ,以重氮化方法使之分别与牛血清蛋白 (BSA)、卵清蛋白 (OVA)载体蛋白连接 ,并分别作为免疫原与包被原进行抗血清制备及ELISA试验 ,结果产生了特异性抗体。在对硫磷的标准抑制曲线中 ,当pH 7 4时 ,I50 为 5 2ng·mL-1,检测限可低于 0 1ng·mL-1。交叉试验表明 :产生的特异性抗体与对硫磷反应明显 ,与其代谢的初级产物有交叉反应 ,与结构类似物 4硝基苯酚及其他类似物交叉反应不明显 ,与甲基对硫磷的交叉反应亦不明显
关键词：
对硫磷 半抗原 免疫分析 免疫优化
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