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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
孙伟 吴中勤 胡青海 李树香 李刚
利用地高辛标记的０８５ ｋｂ 的鸡传染性贫血病毒 （ Ｃ Ａ Ｖ） 核酸探针， 对江苏某地区疑为 Ｃ Ａ Ｖ 的１５～３０日龄病鸡的肝 Ｄ Ｎ Ａ 样品进行斑点杂交。结果在被检的２０份样品中有６份为阳性，阳性率为３０％ 。对相同样品根据已知引物（特异性扩增出 Ｃ Ａ Ｖ 的０５８ ｋｂ Ｄ Ｎ Ａ） 进行 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增， 所得结果与斑点杂交相同。对应的病鸡血清经间接免疫荧光试验 （ Ｉ Ｆ Ａ）， 有７份为 Ｃ Ａ Ｖ 抗体阳性， 与 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增结果的符合率为８３％ 。初步结果表明， 江苏某地区存在 Ｃ Ａ Ｖ 感染。
[期刊] 华北农学报
[作者]
杨兵 徐福洲 王金洛 陈小玲 孟彦妮
根据鸡传染性贫血病毒(CIAV)基因组序列,设计一对引物扩增基因组上nt358-nt1042之间684 bp DNA片段。在CIAV感染MDCC-MSB1细胞系中提取核酸为模板可扩增出相应DNA片段,且以感染细胞核酸为模板反应敏感性可达1 fg,而以其他病原核酸为模板扩增结果均为阴性。应用该PCR方法对实验感染鸡肝脏、脾脏、胸腺、肾脏、法氏囊、骨髓、白细胞、泄殖腔棉拭子等不同样品进行检测,均可扩增出相应DNA片段。证明我们建立的PCR方法敏感性特异性强,可用于临床感染不同组织CIAV的检测。
关键词：
鸡 传染性贫血病 病毒 聚合酶链式反应
[期刊] 中国水产科学
[作者]
杨冰 黄倢 宋晓玲 史成银 刘莉 刘庆慧
利用非放射性标记物地高辛(DIG),通过PCR方法制备了对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)DNA探针,探针长度705bp,标记产量为20ng/μL。通过核酸探针斑点杂交检测方法对此探针特异性及灵敏度进行验证,结果表明,该探针具有较高的灵敏度和较强的特异性,检测IHHNVDNA的检出灵敏度为24.8pg,可检出26.6ng患病对虾组织DNA中的IHHNV,与250.4ng健康虾组织DNA、202.5ng健康虾匀浆液,白斑综合症病毒(WSSV)DNA和肝胰腺细小病毒(HPV)DNA均不发生交叉反应。本方法可应用于健康亲虾、苗种的培育和无特定病原(SPF)对虾种群的选育及IHHNV流行病...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
马艳琴 郑俊梅 张映
为建立一种敏感、特异的检测疫苗中猪肺炎支原体污染的方法,设计了猪源支原体PCR通用外套引物和猪肺炎支原体种特异性内套引物及地高辛标记寡核苷酸探针,建立了PCR-斑点杂交技术,应用于猪瘟活疫苗中猪肺炎支原体污染的检测,并与套式PCR技术进行比较研究。结果显示,探针最低检出DNA量为23.4 pg,比套式PCR(最低检出量为62.5 pg)敏感性更高,且探针与鸡毒支原体和大肠杆菌DNA无交叉反应。对来自6个生产厂家共90批疫苗的检测结果显示,PCR-斑点杂交法比套式PCR法对疫苗猪肺炎支原体污染的检出率高10%。以上结果表明PCR-斑点杂交法具有更高的敏感性和特异性,在疫苗猪肺炎支原体污染的检测中...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
张洪英 F.Kraemer 沈永林 顾有方 沈涛 王丙云 毛鑫智 T.Schnieder
用斑点杂交试验检测苏、皖7县市肝片吸虫中间宿主小土窝螺(Galba pervia),共检测小土窝螺777个,阳性33个,阳性率为4.25%,其中江苏省小土窝螺的阳性率为4.46%,安徽省小土窝螺的阳性率是4.11%.结果表明本地水牛肝片吸虫感染率与小土窝螺阳性率呈正相关趋势,斑点杂交试验检测中间宿主小土窝螺可预测牛羊感染肝片吸虫的严重程度,是流行病学调查中值得采用的新技术.
关键词：
斑点杂文试验 小土窝螺 肝片吸虫
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
徐洪忠 危粹凡 吴位珩 肖芳萍
本研究应用山羊蠕形螨病灶中的虫卵、蚴虫、成虫及其代谢物制备出复合可溶性抗原,经紫外分光光度计测定,抗原蛋白含量为1.21 mg·mL~(-1)。以前未见报道,但还需进一步纯化分析其有效成份,测出抗原的有效保存期。经用株联法测定得出抗原的最佳工作浓度为0.1 μg·μL~(-1)。抗体的最佳工作浓度为1:200稀释度。这为进一步的研究和生产应用提供了依据。应用所制备的复合可溶性抗原与制备的阳性血清作
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王朝辉 周益军 范永坚 薛宝娣 吴淑华 程兆榜 张文荟
用RT PCR技术、PCR标记的探针点杂交和SDS PAGE检测了生产上严重危害玉米和水稻的水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)。由RT PCR扩增的RBSDV第 7片段第 92 1～ 14 11碱基作探针 ,用PCR法DIG标记后点杂交 ,可以从 10 0ng玉米病叶中检测到RBSDV ,灵敏度是RT PCR的 1/10 ;10 %SDS PAGE只能检测到从 1g玉米病叶中提取的病毒dsRNA ,但对江苏玉米田间分离的不同的RBSDV样品电泳发现 ,该病毒基因组dsRNA有差异 ,表明该技术是研究RBSDV基因组多样性的简单有效的方法
[期刊] 华北农学报
[作者]
苏霞 朱瑞豪 陈小玲 杨丽聪 周宏专 徐福洲 杨兵
基于多重ＰＣＲ技术，建立鸡传染性贫血病病毒（ＣＡＶ）、禽网状内皮增生症病毒（ＲＥＶ）、禽白血病病毒禽（ＡＬＶ）Ａ、Ｃ、Ｄ亚群的基因芯检测方法。根据ＮＣＢＩ收录的鸡传染性贫血病毒（ＣＩＡＶ）、禽网状内皮增生症病毒（ＲＥＶ）与禽白血病病毒（ＡＬＶ）Ａ、Ｃ、Ｄ亚群参考毒株的序列，设计合成特异性扩增引物及探针，将下游引物进行Ｃｙ３荧光标记，制备基因芯片；分别提取几种病毒的基因组ＤＮＡ，进行ＰＣＲ扩增后与探针进行杂交，荧光检测仪扫描并分析结果。结果表明：制备的芯片能够同时检测ＣＩＡＶ、ＲＥＶ与ＡＬＶ Ａ、Ｃ、Ｄ亚群，该方法对病毒的最低检测限为１０６ＣｏＰＩＥｓ／ｍ Ｌ，特异性试验结果表明，该方法与ＮＤＶ．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王晓钧 魏丽丽 相文华 张晓燕 吕晓玲 赵立平 朱远茂 邵一鸣 沈荣显
马传染性贫血病毒(equineinfectiousanemiavirus,EIAV)驴强毒株DV是一株经过驴体传代获得的而具有超强毒力的毒株,对马和驴均可100%致死。用PCR方法分段扩增了DV其前病毒基因,将包含全基因片段的3个基因克隆以限制性内切酶消化后顺次连接克隆到pLG338上,命名为pD70344。将此克隆体外转染驴胎皮肤细胞和驴白细胞,连续盲传3代并以反转录酶活性测定,RT-PCR鉴定其病毒活性,透射电镜观察发现细胞培养物中存在大量典型病毒粒子,证明获得了1株具有感染性的EIAV病毒粒子,命名为pD70344V。经序列测定确认了本试验首次构建了1株完全来源于EIAV强毒基因的感染性...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
董伟 唐琴 卓如意 孙志良 刘静
为建立一种快速、准确的仔猪大肠杆菌病诊断方法,从某猪场腹泻病死的小猪采取病料,经处理后取处理病料腹腔注射12只小白鼠,同时以灭菌生理盐水作对照.24 h内,注入病料的小白鼠全部死亡.采取死亡小白鼠的肝脏,充分研磨后加灭菌生理盐水作1∶5稀释,向稀释液中加入适量大肠杆菌兔血清抗体,混匀后分别于5,10,30 min时取病料涂片,用荧光标记的抗兔IgG抗体染色,荧光显微镜观察.结果显示:从死亡小白鼠病料涂片中能检测出大肠杆菌,其形态与标准大肠杆菌革兰氏染色形态一致.接种生理盐水小鼠未出现死亡,处死后取病料,以同样的方法进行检测,未检测出大肠杆菌.
关键词：
大肠杆菌病 免疫荧光技术 诊断
[期刊] 中国水产科学
[作者]
宋晓玲 史成银 黄倢 张立敬
于 1996～ 1998年采用DNA斑点杂交法 ,完成了共计 836份养殖对虾 ,2 13份对虾饵料和环境生物样品的检测。结果显示 ,对虾在每年的 4～ 10月都可检测出白斑综合症病毒 (WSSV) ,6月出现最高峰 ,阳性检出率达到 4 2 .6 % ;其次 ,为 7月和 5月 ,分别达 31.6 %和 2 4 .5 %。在对虾不同生长阶段 (包括亲虾、各期幼体、仔虾、幼虾及成虾 )均可检出WSSV ,其中以仔虾的带毒率最高 ,达 36 .4 % ,其次为糠虾幼体 ,达 34.6 %。体长范围 1.1～ 2 .0cm的仔虾阳性率最高 ,其次体长为 5 .1～ 6 .0cm的幼虾样品。检测的中...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
史秀杰 于力 王津津 何俊强 郑晓聪 贾鹏 兰文升 杨锦舜 刘荭
根据ISAV的基因保守序列,利用LAMP Designer软件设计了6条引物,采用新型的环介导等温扩增设备进行扩增和检测,优化了反应条件,分析了所建立方法的特异性和灵敏度,并与RT-PCR和实时荧光RT-PCR进行比较。研究表明,该方法最适反应温度为64℃,反应10 min就可以观察到明显的扩增。该方法灵敏度高,检测限为78.4 fg RNA,比常规RT-PCR灵敏度高100倍,与实时荧光定量RT-PCR灵敏度相当;特异性好,与传染性胰腺坏死病毒(IPNV)、鲤春病毒血症病毒(SVCV)、出血性败血症病毒(VHSV)、鱼类病毒性神经坏死病病毒(VNNV)、鱼腹水病毒(YAV)等14种主要鱼类病...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张舍郁 程安春 汪铭书 沈婵娟 李传峰
【目的】建立间接免疫荧光(IFA)检测石蜡切片中鸭肿头出血症病毒(DSHDV)的方法,为DSHDV感染的实验室诊断、DSHDV在感染鸭组织细胞中的亚细胞定位和动态研究提供有效的检测手段。【方法】用差速离心纯化DSHDV,将纯化DSHDV免疫家兔制备兔抗DSHDV高免血清,并以DEAE-SephadexA-50柱层析纯化出兔抗DSHDVIgG,建立IFA检测石蜡切片中DSHDV的方法;利用建立的IFA对28日龄鸭人工感染DSHDV死亡鸭不同组织器官以及临床样品进行检测。应用PAGE电泳分析DSHDV基因组特性。【结果】IFA最佳条件为:切片在0.01mol·L-1柠檬酸(pH6.0)缓冲液微波修...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
彭旺 唐小明 葛猛 杨涛涛 屈泰龙 余兴龙
以分离的猪萨佩罗病毒PSV Hu N1/2016株感染PK15细胞,制备抗原板,建立检测猪血清中PSV抗体的间接免疫荧光(IFA)方法。结果表明:一抗最佳稀释浓度为1∶300;FITC标记的羊抗猪荧光二抗最佳稀释浓度为1∶300。该方法特异性强,敏感度高,既能将PSV抗体与PRRSV、FMDV、PCV、CSFV抗体区分开,也可以检测到中和效价0.128的阳性血清。用该方法检测湖南省部分规模化猪场208份临床血清样品的总阳性率为68%,表明PSV在湖南省流行普遍,且其感染主要发生在保育阶段。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
胥婧 沈秀萍 邵秀玲 胡白石 许志刚
根据风信子黄腐病菌(Xanthom onas hyacinthi,XHA)的fimA基因,合成了1对特异性引物JAAN/JARA,目的片段为226 bp,用来检测样本中有无目标细菌。用XHA全菌体免疫家兔,获得抗血清,建立了检测风信子黄腐病菌的间接免疫荧光染色检测技术。用上述两种方法对风信子黄腐病菌和人工接种发病样品进行检测。结果表明,这两种方法可以准确、灵敏地检测风信子黄腐病菌及带菌样品,方法简单、快速、实用,可以在口岸检疫中推广使用,以减少风信子黄腐病菌进入中国的风险。
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