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[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
刘洋 何心尧 马红波 吴泳历 杨佑明
针对棉花组织总RNA难以提取、不同组织的提取方法难以统一的问题,借鉴Jaakola等的越橘果实总RNA提取方法(即CTAB-PVP法),对棉花组织总RNA的提取效果进行了分析。实验结果表明:得到的棉花纤维、胚珠、叶片、胚根、花瓣、下胚轴和花药各组织的RNA完整性好,其D260/D280比值为1.7~2.0,产率30~180μg/g(鲜质量);用开花后15 d纤维的RNA为材料进行反转录,再利用RT-PCR和3′RACE技术进行克隆,各获得1个大小为542和712 bp的cDNA克隆,经序列分析鉴定,这2个片段分别编码棉花微管结合蛋白和微丝结合蛋白。
关键词：
棉花 RNA提取 CTAB-PVP
[期刊] 华北农学报
[作者]
吴家和 陈志贤 李淑君 李燕娥 焦改丽
用４个国内转基因棉花品系（９５１，２５２７，９５６０，纯抗）和１个美国转基因棉花品种（ＤＨ３）进行抗虫性试验。结果表明，棉花不同组织器官的抗虫性不同，花瓣，苞叶和顶端叶抗虫性最强；国内转基因棉花的４个品系和美国ＤＨ３的抗虫性强弱没有显著差异；转基因棉花的蛋白毒性在棉铃虫体内具有一定的残效。
关键词：
棉铃虫,Bt基因,棉花,抗性
[期刊] 西南农业学报
[作者]
叶开玉 卢美英 于萍 陈殿余
针对龙眼组织富含多糖、单宁、色素及酚类物质的特点,采用改良的SDS法和CTAB法进行龙眼顶芽、叶片和茎皮3种组织总RNA的提取与纯化研究。结果表明,两种方法提取的总RNA均具有28、18、5S 3条清晰、完整的条带,且无降解现象;A260/A280均介于1.8~2.0之间,A260/A230均大于2.0。说明改良的SDS法和CTAB法提取的总RNA具有很高的纯度,可以满足后续分子生物学研究的要求。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
李大志 邓子牛 熊兴耀 谢丙炎
从RNA的完整性、纯度和产量等方面比较了TRIzol,RNAplant,TRIpure等3种RNA提取试剂对番茄不同组织部位总RNA的提取效果.结果表明,RNAplant能从成熟组织中获得较高质量和产量的总RNA,用该方法提取的番茄老化组织总RNA经RT-PCR能成功进行内参检测.
关键词：
番茄 总RNA RT-PCR
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
孟晓庆 侯智霞 张兰 朴蕾
【目的】探讨榛子总RNA提取的有效方法,为今后开展榛子的分子生物学等研究奠定基础。【方法】以榛子的成龄叶片、幼嫩叶片和雄花芽为试材,采用植物RNA提取试剂盒、Trizol法、改良的CTAB法Ⅰ、改良的CTAB法Ⅱ、CTAB法和改良的SDS法提取其总RNA,通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计和PCR检测所提取总RNA样品的品质。【结果】除了Trizol法,其他5种方法都能提取到总RNA,但是改良的CTAB法Ⅰ更适合榛子幼嫩叶片、成龄叶片和雄花芽总RNA的提取,此方法提得的总RNA较完整,条带清晰,品质较优,28SrRNA亮度约是18SrRNA的2倍,且无降解现象。经RT-PCR验证,以改良的CT...
关键词：
榛子 总RNA CTAB SDS
[期刊] 华北农学报
[作者]
段西飞 王静华 崔江慧 薛薇 李霄 常金华
介绍一种高粱总RNA的提取方法。该方法以CTAB为主要提取试剂,成功地提取出了高粱叶片的总RNA。获得的RNA条带清晰,A260/A280在1.8~2.0。这些结果表明提取的总RNA质量好,完整性好,可用于cDNA文库的构建、差异表达等工作。
关键词：
高粱 总RNA CTAB 提取
[期刊] 华北农学报
[作者]
王曼 刘连涛 孙红春 张永江 宋世佳 陈静 成国鹏 李存东
对棉花根系蛋白的双向电泳提取技术进行改良，以获得更好的分离效果，为棉花根系蛋白质组学研究奠定基础。以鲁棉研２８为材料，分别采用ＴＣＡ／丙酮法、改良ＴＣＡ／丙酮／ＳＤＳ法、饱和酚－甲醇醋酸铵法这３种根系蛋白质提取方法，提取棉花幼苗根系总蛋白，并进行双向电泳进行蛋白质分离。在蛋白质含量、蛋白纯度和电泳图谱等方面对３种方法进行比较。利用饱和酚－甲醇醋酸铵提取法提取的棉花根系蛋白，其蛋白样品纯度高，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳图谱清晰，蛋白点数量最多为６０１个点；ＴＣＡ／丙酮法提取得到的蛋白总量最高约为７．５３ ｍＧ／Ｇ，但样品纯度低，ＳＤＳＰＡＧＥ电泳图谱模糊，蛋白点数量最少为４１７个点。采用考马斯亮蓝染色．．．
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
夏颖 姜存仓 陈防 鲁剑巍 李小坤 郝艳淑
综述了近50年来我国棉花主产区钾肥的增产作用及其变化趋势、增产效应及施钾技术,阐述了钾对棉花的营养作用、抗性及品质方面的影响。钾肥对棉花的增产效应因不同的植棉区和不同的年代而不同。近年来,随着化学钾肥的推广与施用量的增加,某些棉区钾对棉花的增产作用在逐渐降低。因此,化学钾肥施用的必要性、施用期及施用量原则上应根据土壤钾素丰缺状况及棉花的需肥规律而定。
关键词：
钾营养 品质 抗性 增产效应 施钾技术
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
丁勇 范红波 张高磊 严宇庭 李瑞阳
采用RNAiso Plus法、RNApure Plant Kit法和改良CTAB法分别提取麻疯树种子总RNA,以期筛选适合于麻疯树种子高质量总RNA提取方法。用琼脂糖甲醛变性凝胶电泳检测总RNA的完整性,以紫外分光光度计检测总RNA的纯度和得率。结果表明:RNAiso Plus法提取麻疯树种子总RNA的A260/A280比值为2.030,28S和18S rRNA条带清晰,且前者的亮度约为后者的2倍,无可见的弥散现象,利用该方法提取的总RNA进行RT-PCR,成功克隆获得了麻疯树oleosin基因长603 bp的cDNA序列。证明RNAiso Plus法提取麻疯树种子总RNA可满足后续RT-PC...
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
杜希华 陆海 高述民 李凤兰
以文冠果花药为材料 ,利用TRIZOL试剂快速提取法、异硫氰酸胍法和CTAB法提取花药总RNA .通过RNA产率、纯度、电泳图谱和mRNA差异显示等分析来确立适于文冠果花药RNA分离的方法 .研究结果表明 ,CTAB法提取的RNA呈现出 2 8SrRNA、18SrRNA和 5SrRNA三条较清晰的条带 ,很少有降解 ,其A2 6 0 A2 80 值可达 1 94 4 ,A2 6 0 A2 30 值为2 16 5 ,具有很高的纯度 .另 2种方法获得的RNA纯度较低 ,降解严重 ,有较多小分子和盐存在 ;RNA无明显条带出现 ,而是以小分子RNA弥散状分布 .使用差异显示法分析发现 ,用C...
关键词：
文冠果 花药 RNA 分离提取
[期刊] 华北农学报
[作者]
张鑫 杜国强 师校欣
利用CTAB_异硫氰酸胍法、改良CTAB法和RNAplant试剂盒法,从富含多糖和酚类物质的苹果组培苗继代苗中提取总RNA。结果表明CTAB_异硫氰酸胍法对苹果组培苗总RNA的提取有较好的效果,所得RNA的A260/A230大于2.0,A260/A280为1.8~2.0,产率在16.95μg/g左右。改良CTAB法和RNAplant试剂盒法提取的RNA均有少量DNA污染,但RNAplant试剂盒法比CTAB法更快捷,简便。
关键词：
苹果 总RNA 提取方法 组培苗
[期刊] 西南农业学报
[作者]
张惠云 吴青松 孙伟生 昝逢刚 窦美安
采用改良CTAB法提取菠萝叶片叶基、叶尖和叶中部及幼根等部位的DNA,各个部位DNA的OD260/OD280比值为1.72~1.88;OD260/OD2301.45~2.11;提取产量为5.584~24.325μg/g(鲜重);各个部位DNA提取产量大小排序为:叶基、心叶>叶中部、叶尖>幼根。本方法提取的菠萝DNA质量较高,可用作于SRAP分析。
关键词：
菠萝 DNA提取 改良CTAB法
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
徐坤 李铎 张优优 李陇平 麻丽霞 张智英
【目的】尝试自制一种价格低廉的RNA分离试剂,并检验其应用效果。【方法】以商业化的TRizolReagent为对照,使用自制RNA分离试剂提取草鱼皮肤组织总RNA,采用分光光度计法、变性琼脂糖凝胶电泳法和RT-PCR检测其品质,并用提取的总RNA合成草鱼皮肤cDNA。同时使用自制RNA分离试剂提取斑马鱼总RNA,通过RT-PCR进行E2F5基因全长(1 092bp)的克隆,构建其真核和酵母表达载体并测序。【结果】使用自制RNA分离试剂提取草鱼皮肤组织总RNA的品质与用TRizol Reagent提取的总RNA品质相当,用之成功地合成了草鱼皮肤cDNA。使用自制RNA分离试剂提取得到了更高品质的...
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
方婷 徐倩 金爱武 邓莹 骆争荣 朱强根
【目的】探讨适合于毛竹不同组织尤其是毛竹根系以及种子等总RNA提取的最优方法,获得高质量RNA样品,为今后开展毛竹的分子生物学研究奠定理论基础。【方法】分别采用柱式Trizol法、Trizol法、SDS法、改良CTAB法提取毛竹的细根、气雾根、成熟叶、幼叶、枝、种子、笋等不同组织的RNA,通过NanoDrop2000微量分光光度计检测浓度、1.5%琼脂糖凝胶电泳检测样品完整度以及RT-PCR检测是否存在目标条带,采用Excel和SPSS软件对提取结果进行统计学分析。【结果】4种方法均能从毛竹不同组织中提取到总RNA,其中SDS法提取的RNA浓度较高,但提取时间过长且步骤繁琐,RNA容易发生降解,其质量不适合用于后续的分子生物学试验;柱式Trizol法和Trizol法用时短且提取方法简单便捷,除了对毛竹细根和种子的提取效果不佳外,其余组织的RNA纯度和质量都可以满足后续的试验开展;改良CTAB法适用于各组织,包括木质化程度较高的毛竹细根以及富含淀粉的毛竹种子,缺点是DNA残留明显。除SDS法所获得的浓度较高并与其他3种方法有显著性差异外,其余3种RNA抽提方法对样品总RNA浓度无统计学差异,且各组织RNA反转录为cDNA,以内参基因PhPP2A为目的基因进行RT-PCR扩增,均可在目标位置获得明亮单一条带,约为150 bp。【结论】改良CTAB法最适合毛竹细根以及种子的RNA提取,柱式Trizol法和Trizol法适合毛竹气雾根、叶、枝和笋总RNA的提取。
关键词：
毛竹 组织 RNA提取 RT-PCR
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
侯哲 陆秀君 张晓林 梅梅 魏俊 李昂
试验以天女木兰叶芽、幼叶、成熟叶、花芽、花瓣、种子为材料，分别采用Ｔｒｉｚｏｌ法、改良Ｔｒｉｚｏｌ法、ＣＴＡＢ－异丙醇法、ＣＴＡＢ－ＮＡ ＡＣ和无水乙醇法、ＣＴＡＢ－ｌｉ Ｃｌ法、天根试剂盒法对其各器官进行总ｒＮＡ的提取。总ｒＮＡ的完整性、纯度和浓度等提取效果分别通过琼脂糖凝胶电泳和酶标仪进行检测。结果表明：叶芽的总ｒＮＡ最适合用改良Ｔｒｉｚｏｌ法进行提取，花瓣和花芽的总ｒＮＡ最适合用改良的ＣＴＡＢ法提取，幼叶的总ｒＮＡ可选择试剂盒法，Ｔｒｉｚｏｌ可用于成龄叶片的提取，而天根试剂盒最适合天女木兰种子总ｒＮＡ的提取。通过不同提取方法获得的高质量总ｒＮＡ经ｒＴ－ＰＣｒ检测表明：可以直接用于后续分子．．．
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