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[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘雪兰 余为一 李槿年
本研究建立鼠红细胞膜吸附法纯化中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)血清凝集素的方法,并与硫酸铵盐析、凝胶过滤层析和离子交换层析等其他提取方法进行比较。实验结果表明,中华绒螯蟹血清经鼠红细胞膜吸附后,再由EDTA把结合的凝集素从膜上解离,可以获得纯化的高活性凝集素。该纯化物在PAGE中出现2个清晰的区带,一个是大分子的b带,另一个则是由3种大小相近的小分子组成的c区带;在SDS-PAGE中,则显示出3个分子量接近、约为100 000的条带。经50％饱和硫酸铵盐析或用Sephadex G200凝胶过滤层析法可浓缩但不能纯化中华绒螯蟹血清凝集素。经DEAE-Sephadex A50离子...
关键词：
中华绒螯蟹 凝集素 鼠红细胞膜吸附 纯化
[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘雪兰 余为一 李槿年
将中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)血清凝集素与动物(鳖、鲫鱼、鸡、鸽、兔、鼠、人A、B、O型)红细胞和细菌(八叠球菌、嗜水气单胞菌、短小芽孢杆菌、大肠杆菌、葡萄球菌、假单胞菌和拟态弧菌)进行凝集反应。结果表明,中华绒螯蟹血清凝集素有明显的选择性,与小白鼠红细胞和八叠球菌的凝集活性最高(P0.05)。10 mmol/L的CaCl2和300 mmol/L的NaCl不影响凝集素与小鼠红细胞和细菌的凝集活性,600 mmol/L的NaCl可降低其活性。pH 5~9不影响蟹凝集素活性,但400 mmol/L的ED...
关键词：
中华绒螯蟹 血清凝集素 凝集价
[期刊] 淡水渔业
[作者]
周春花 黎敏 吴小平 曾志恒
从军山湖中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)获得血清,用人A、B、AB、O型红细胞、鸡红细胞及部分细菌菌体检测了血清的凝集活力,同时进行了糖抑制、热稳定性及pH影响试验。结果显示血清能凝集人四种血型红细胞和鸡红细胞,其中对人A型红细胞凝集活力最高;能够和大肠杆菌发生凝集反应,但不能和枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌发生凝集反应;凝集条件为pH5.0~5.8、温度4~37℃;1.0%的D-葡萄糖、D-果糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖均能不同程度地抑制血清与人A型红细胞的凝集作用。
[期刊] 水产学报
[作者]
杨先乐 贺路 艾晓辉 周建光 柯福恩
建立了间接红细胞凝集反应检测中华鳖血清抗体的方法。试验证明，致敏抗原菌体浓度为３×１０８ｃｆｕ／ｍＬ、ＢＳＡ浓度为２．０ｍｇ／ｍＬ，致敏红细胞浓度２．５％时（无论是人还是绵羊红细胞），本方法能获得最敏感的结果。加入稳定剂后的致敏红细胞，在８０ｄ内检测结果没有显著的差异。本试验测得该方法的灵敏度为１３．４±４．２，而且证明本方法具有较高的特异性、灵敏度、准确性和重复性。
关键词：
中华鳖,抗体,间接红细胞凝集反应,检测
[期刊] 水产学报
[作者]
李丹彤 宋亮 钟莉 常亚青
为探寻刺参药用价值,探索其抑制肿瘤细胞增殖,促进淋巴细胞转化等生物功能。将刺参(Apotichopusjaponicus)经磷酸盐缓冲溶液抽提,20%~75%硫酸铵分级沉淀,Sephadex G-200分子筛层析,得到刺参凝集素(AJL)。用Sephadex G-200分子筛层析测得其分子量为85 652Da。AJL的含糖量为20.9%。该凝集素可以凝集人的A、B、AB、O型红细胞,且对A型红细胞凝集作用最强,在对兔、鼠、鲤鱼、鸡和人的A、B、AB、O红细胞的凝集作用中,对鸡的凝集作用最强。该凝集素凝集兔红细胞的作用不被D-果糖、D-甘露糖、γ-球蛋白、葡萄糖、蔗糖、甘露聚糖所抑制,而被牛甲状...
关键词：
刺参 凝集素 纯化 性质
[期刊] 中国水产科学
[作者]
李丹彤 崔铁军 马国庆 汤霞 李熙宜
角叉菜（ Ｃｈｏｎｄｒｕｓ ｏｃｅｌｌａｔｕｓ）经磷酸盐缓冲液抽提， ２０％～ ７５％硫酸锭分级沉淀，牛甲状腺球蛋白一Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ亲和层析，可以从红藻角叉菜中纯化出角叉菜凝集素（ＣＯＬ），在 ＰＡＧＥ上显示单一蛋白染色带，在等电聚焦电泳上显示单一蛋白染色带，其ＰＩ为８．３０。纯化后的ＣＯＬ的最大紫外吸收峰在２８５ ｎｍ，用ＳｅＰｈａｄｅｘＧ－２００分子筛层析测得其分子量为 ４ ２５２。该凝集素可以凝集人的Ａ、Ｂ、ＡＢ、Ｏ型红细胞，且凝集活性相同，在对人、兔、鲤、鲫的红细胞的凝集作用中，对兔红细胞的凝集作用最强，且不被己测试的Ｄ－半乳糖、Ｄ－果糖、Ｄ－甘露糖、葡萄糖、蔗糖、甘露聚糖、...
关键词：
角叉菜 凝集素 纯化 理化性质
[期刊] 水产学报
[作者]
李丹彤 张泽虎 赵元凤 钟莉 张泽宇 王冬梅 李伟
将海洋红藻-绒线藻(Dasya villosa)经磷酸盐缓冲液抽提,20%~75%硫酸铵分级沉淀,Sephadex G-200分子筛层析,得到绒线藻凝集素(DVL)。用Sephadex G-200分子筛层析测得其分子量为547ku。该凝集素凝集兔红细胞的作用不被D-果糖、D-半乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露聚糖、γ-球蛋白所抑制,仅被牛甲状腺球蛋白所抑制,最小抑制浓度为96.88mg.L-1。2价金属离子Ca2+、Mg2+及EDTA对该凝集素凝集活性没有影响。其凝集活性在25~80℃保持不变为28,90~100℃加热30min,活力为27,仍保留50%的活性,说明其具有较强的耐热性。经t-检验,注射...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
宋玉娟 崔铁军 李丹彤 刘扬
海萝(Gloiopeltisfurcata)经PBS缓冲液抽提、硫酸铵分级、DEAE 52纤维素离子交换层析和SephadexG 200分子筛层析,从中纯化出海萝凝集素(GFL),在PAGE和等电聚焦电泳上各显示单一蛋白染色带,其等电点为9 0。用SephadexG 200分子筛层析测得其相对分子质量为8318。海萝凝集素除对人血型红细胞无凝集活性外,对单胞藻及兔、鲤、鲫的红细胞均表现出一定程度的凝集活性,对兔红细胞的凝集活性最强,且不被已测试的D-果糖、D-半乳糖、葡萄糖、蔗糖、乳糖所抑制,而被D-甘露糖、牛甲状腺球蛋白、鸡卵白蛋白、γ-球蛋抑制。该凝集素在pH4 0～10 2均有活性,而在...
关键词：
海萝 凝集素 纯化 理化性质
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
肖美南 徐佳念 蔡生力 刘红
将中华绒螯蟹促雄性腺的蛋白提取物经凝胶过滤后所得到的各个组分分别进行促雄性腺素(AGH)生物活性的初步检测,以输精管和精巢的蛋白提取物作为阴性对照,保幼激素(JHⅢ)作为阳性对照,结果发现其中7个组分对卵巢组织的氨基酸吸收具有明显的抑制作用,且与磷酸缓冲液(PBS)存在显著差异,初步判断该7个组分可能存在AGH生物活性;阴性对照组对卵巢组织的氨基酸吸收没有抑制作用,JHⅢ阳性对照与PBS差异极为显著。再将上述可能具有AGH活性的7个组分分别注射到中华绒螯蟹雌性幼蟹体内,观察是否真正具有AGH活性,结果其中2个样品注射后雌性幼蟹产生了性别逆转现象,证明该2个样品组分中确实存在中华绒螯蟹促雄性腺素...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
姚东瑞 盘赛昆 周鸣谦 葛荣荣
采用DEAE-SepharoseFF离子交换层析和Superdex20010/300GL凝胶过滤层析技术,从泥鳅血清中分离出两种天然凝集素MSL-I和MSL-Ⅱ。SDS-PAGE检测表明,MSL-I及MSL-Ⅱ均显示两条蛋白质着色带。采用凝胶过滤法测得MSL-I相对分子质量为25000,MSL-Ⅱ相对分子质量为82000。根据凝胶过滤测定及SDS-PAGE检测结果可知,MSL-Ⅱ由相对分子质量分别为29000和13600两种亚基组成,MSL-I的亚基组成有待进一步研究。MSL-Ⅱ能结合多种糖,其中对乳糖的亲和力最强。MSL-Ⅱ具有较强的热稳定性,在pH4～11范围内具有凝集活性,最适pH为6～...
关键词：
泥鳅 血清 凝集素 分离纯化
[期刊] 淡水渔业
[作者]
张黎 袁媛 王娟 顾继锐 吴江 谢显连 徐恒
从南方鲇(Silurusmeridionalis)血清分离到一种天然的凝集素分子,能够凝集多种不同的抗原物质,其组成成分为糖蛋白,具有耐热和耐酸碱性,对β-巯基乙醇敏感。凝集反应受温度、离子强度以及时间等因素的影响。经糖的专一性抑制实验显示,蔗糖和半乳糖对凝集反应有抑制作用,说明这2种糖分子是凝集素在识别和凝集过程中起一定作用的糖分子。
[期刊] 水产学报
[作者]
王雪惠 孙金生 杨卫军
采用反相高效液相色谱技术(RP-HPLC),首次分离、纯化了中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)眼柄神经多肽激素,获得了高血糖激素(crustacean hyperglycemic hormone,CHH)纯品。初步的生理活性鉴定结果表明,该激素有显著的升血糖作用,能使中华绒螯蟹血糖水平在30min内升到最高值,为(56.14±10.58)mg.100mL-1(n=4),比正常水平增加了(2.87±0.73)倍,被确定为甲壳动物高血糖激素(CHH)。CHH在窦腺(sinus gland,SG)中的含量最丰富,占SG粗提物蛋白总量的(12.26±2.57)%,占SG激素总量的(52...
[期刊] 水产学报
[作者]
李丹彤 谢广成 丁文勇 王秀利 刘洋 徐文琦 张永攀
为进一步研究刺参甘露糖结合凝集素(AJ-MBL)的功能及提高刺参自身免疫力,对AJ-MBL基因的CDS区进行原核表达、纯化并初步鉴定其生物学活性。采用RT-PCR法扩增AJ-MBL基因编码区,经酶切鉴定、序列分析后,将其CDS区498 bp片段克隆至原核表达载体pET28a中,得到重组质粒pET-AJ-MBL。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞并经IPTG诱导表达出分子量约17 ku的融合蛋白。该蛋白以包涵体形式存在,用Ni2+离子亲和柱纯化。结果显示,获得高表达量的重组纯化蛋白。纯化的17 ku AJ-MBL进行红细胞凝集试验检测其生物学活性。凝集试验结果显示,AJ-MBL凝集...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
郝珂 钱冬 刘问 潘清清
对锯缘青蟹(Scylla serrate)血清凝集素的凝集特性进行了研究。结果显示:锯缘青蟹血清凝集素对人、兔、鼠、鸽子、中华鳖、鲫红细胞均有凝集作用,其中对小鼠红细胞凝集活性最强,血凝活性可达29;凝集素活性最适pH 6.0~7.4;盐度对凝集活力有较大影响,NaC l浓度在0.4~0.5 mol/L时基本失活;未纯化血清凝集素对Ca2+、Mg2+未表现出依赖性;凝集素活性能被N-乙酰葡萄糖胺特异性抑制。对青蟹血清凝集素进行硫酸铵分级沉淀分离后,发现凝集素活性主要分布在25%饱和度硫酸铵沉淀区,该组分凝集比活比血清高27.44倍,SDS-PAGE结果表明主要蛋白带型为79 ku、75 ku、...
[期刊] 华北农学报
[作者]
赵欢
为了克隆掌叶半夏凝集素基因(Pinellia pedatisecta agglutinin,PPA),并对其进行生物信息学分析和亚细胞定位。采用PCR技术扩增掌叶半夏凝集素基因的ORF序列,构建pCAMBIA1300-35S-PPA-e GFP重组载体,导入农杆菌GV3101并在烟草中进行瞬时表达,采用激光扫描共聚焦显微镜观察其亚细胞定位。克隆获得的PPA基因全长由777个核苷酸组成,编码258个氨基酸,含有3个甘露糖结合位点和2个保守的B-lectin结构域,Gen Bank登录号为KF154981,氨
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