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[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
蔡更元 熊远著 邓昌彦 蒋思文 吴桢方
用地高辛为标记物，以随机引物法标记猪ＰＧＤｃＤＮＡ和ＨＳＬｃＤＮＡ探针，经与半微量全血培养法制备的染色体进行原位杂交后，将猪ＰＧＤ和ＨＳＬ基因分别定位在猪６号染色体６ｑ２５和６ｃｅｎ－６ｑ２１区域。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王红星 雷治海 丁菲 谭湘陵
用体外转录方法合成了瘦素 (leptin)长形受体 (Ob Rb)反义和正义RNA探针 ,用原位杂交法研究了 5头 2～ 3月龄母猪下丘脑内瘦素长形受体mRNA的分布定位。结果表明 ,猪瘦素长形受体mRNA分布于下丘脑的弓状核、腹内侧核、背内侧核、室旁核、室周核和下丘脑外侧区
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张玉杰 赵燕 徐璐 张乾义 陈锴 孙永芳 邹兴启 朱元源 赵启祖 宁宜宝 王琴
【目的】为研究ＣＳＦＶ ＲＮＡ在体外感染细胞中的分布及定位，建立了一种准确、敏感的ＲＮＡ可视化原位杂交技术。【方法】本研究通过比对ＧｅＮ ＢＡＮｋ中公布的ＣＳＦＶ、ＢＶＤＶ和ＢＤＶ全序列，避开ＢＶＤＶ和ＢＤＶ的同源区，设计了ＣＳＦＶ ＲＮＡ及内参基因β－ＡＣｔｉＮ的特异探针。以ＣＳＦＶ中等致病力毒株（Ｈｅ ＢＨＨ１／９５）为参考毒株，在Ｐｋ１５细胞中培养病毒，加入ＲＮＡ可视化原位杂交的特异探针和相应试剂，采用荧光共聚焦显微镜进行成像观察。通过综合分析观测结果、荧光强度、重复性等因素，采用正交试验优化了对原位杂交过程中具有重要影响的蛋白酶ｋ浓度和甲醛固定时间，建立了ＣＳＦＶ ＲＮＡ可视化原位杂交．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
曹建萌 卢迈新 叶星 曾祖聪 高风英
为了研究尼罗罗非鱼胚胎发育和器官形成过程中基因功能和基因表达图式,本研究建立了尼罗罗非鱼的整胚原位杂交流程。尼罗罗非鱼的胚胎具有卵黄大、不透明、色素出现早等特点,因此现有鱼类整胚原位杂交方法不能完全适用于尼罗罗非鱼的胚胎,故本研究做了相应的调整和优化:通过提高H2O2的浓度和添加KOH,改良了尼罗罗非鱼胚胎的色素去除方法;使用冷丙酮代替蛋白酶K在提高胚胎通透性的同时保持胚胎完整;减少了探针回收和抗体回收后的洗涤次数,完善了结果的图像采集和胚胎保存方案。使用尼罗罗非鱼的重组激活基因Rag1作为探针基因,整胚原位杂交结果显示Rag1基因表达的位置与已报道的斑马鱼和日本青鳉的Rag1基因在胚胎中的表...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张云霞 娄群峰 李子昂 王筠竹 张振涛 李季 陈劲枫
【目的】利用基因组荧光原位杂交(genomic in situ hybridization,GISH)技术,对黄瓜(Cucumis sativus L.,2n=2x=14)种内两个变种(栽培黄瓜C.sativus var.sativus和野生黄瓜C.sativus var hardwickii)进行中期染色体分析,建立黄瓜变种染色体核型的快速分析方法,为黄瓜细胞分子遗传学研究提供基础。【方法】以栽培黄瓜‘9930’和野生黄瓜C.sativus var.hardwickii为材料,利用CTAB法提取栽培黄瓜‘9930’的基因组总DNA,采用缺刻平移法,将栽培黄瓜‘9930’基因组DNA和45S ...
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
何玉英 李健 刘萍 王清印
原位杂交技术是近年来快速发展起来的一门新技术。本文介绍了原位杂交技术的基本原理和几种常用的原位杂交技术,并概述了原位杂交技术在水产养殖中的应用现状,包括该技术在基因定位、性别鉴定和病毒检测等领域的应用。此外,还对该技术的应用前景进行了展望。
关键词：
原位杂交 水产养殖 染色体
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘艳阳 崔承齐 梅鸿献 武轲 郑永战
【目的】研究和确定芝麻ND-FISH最优试验条件,并对其在芝麻染色体识别中的可行性进行探索。【方法】以寡聚核苷酸(AC)8为探针,研究不同洗脱强度、酶解时间和杂交时间对ND-FISH的影响,确定芝麻ND-FISH最优试验方案。【结果】芝麻ND-FISH最优方案:制片在浓度100μg·mL-1RNase A酶解1h,探针浓度6μL(20 ng·μL-1),杂交4 h,4×SSC/0.2%Tween 20溶液洗脱10 min;18条染色体存在(AC)8杂交信号,其中,14条染色体上存在较强杂交信号,4条染色体上有较弱杂交信号,结合染色体长度及臂比,18条染色体可有效识别。【结论】利用ND-FISH...
[期刊] 华北农学报
[作者]
裴自友 袁文业 孙善澄 孙玉 富田因则 安室喜正
簇毛麦和中间偃麦草是小麦改良的重要抗源 ,为了对导入的外源染色体及片段进行有效鉴定 ,应用分带和双色荧光原位杂交 ,将 2 5S 5 8S 18SrRNA、 5SrRNA基因分别定于簇毛麦染色体 1V短臂和 5V短臂上。分别在中间偃麦草的 3对、 4对染色体上观察到 2 5S 5 8S 18SrRNA和 5SrRNA基因 ,其中有 2对染色体在其短臂上有两种核糖体RNA基因
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
王文奎 戴思兰
该文综述了近年来染色体原位杂交技术 (ISH)在植物亲缘关系研究中的应用 .文中介绍了 3种基于不同探针类型的ISH技术 ,以及该项技术在植物供体基因组的识别、不同供体基因组之间关系和物种形成过程中供体基因组的变化等方面的具体应用 ,文章还指出了ISH在该领域的应用前景和它存在的局限性 .
关键词：
植物染色体 原位杂交 亲缘关系
[期刊] 中国农业科学
[作者]
赵英 牛建新
【目的】搞清苹果茎痘病毒在梨树组织中的分布,为茎尖脱毒提供直接的理论依据和技术支撑。【方法】以库尔勒香梨茎尖、叶片为材料,利用非放射性标记物地高辛(DIG),通过RT-PCR反应体系,合成了苹果茎痘病毒的cDNA探针,利用核酸探针斑点杂交检测方法对该探针特异性及灵敏度进行验证。研究制作了适合原位PCR及原位杂交的石蜡切片,利用原位反转录酶聚合酶链式反应(IS-RT-PCR)技术检测石蜡切片组织中苹果茎痘病毒RNA的定位及分布,并对影响实验结果的重要因素进行优化。【结果】梨树中的苹果茎痘病毒RNA阳性信号主要位于叶片的叶肉细胞、茎尖的外围皮层组织及相应的初生维管束。蛋白酶K消化时间以20 min...
[期刊] 华北农学报
[作者]
石云素 李洪杰 郭北海 张艳敏 王子宁 温之雨 刘立安 贾旭
用黑麦总基因组ＤＮＡ做探针进行荧光原位杂交，检测小黑麦×普通小麦３个衍生系９３０５５３、９３０５６０和９３０６１２的黑麦染色质。荧光原位杂交显示这３个品系中都有１ＲＳ染色体臂与一小麦染色体臂发生易位，易位的断点在着丝点附近。在体细胞有丝分裂细胞周期的各时期中都可见到明显的杂交信号。１ＲＳ染色体臂在间期表现为线状杂交信号贯穿细胞核。Ｃ－分带表明３个受检易位系为１ＢＬ／１ＲＳ易位。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李虹颖 苏彦华
为了能准确、快捷地追踪目标基因在水稻中的表达,并提供在不同植物中基因表达的研究基础,优化了水稻RNA原位杂交体系。以卡诺固定液处理材料,原位杂交结果显示:细胞边界清楚,标本背景清晰,检测信号强。设置了0、15、25、35和45 min 5个消化时间梯度,消化时间是25 min的试验结果显示:杂交信号分布于整个受检表面,信号可检测性强,并在不同组织结构中信号强弱不同。以根尖为材料,杂交液A的检测信号符合分布规律,杂交液B验证反义探针检测信号较弱,杂交液C验证反义探针检测信号进一步减弱,并伴随着验证正义探针信号增强。以叶片为试验材料,杂交液A和B的原位杂交结果差异不大,而杂交液C验证反义探针信号减...
关键词：
原位杂交 水稻 固定液 消化时间 杂交液
[期刊] 西南农业学报
[作者]
田敏 蹇洪英 贾艳霞 张婷 王其刚 张颢 唐开学
以45S rDNA为探针对和平、粉和平、奇异玫瑰、红双喜、蜜糖等5个现代月季品种进行了荧光原位杂交研究。结果表明,5个品种的45S rDNA杂交位点数量均为3个,杂交位点的大小和荧光强度比较一致。在细胞分裂间期的核中,5个品种的45S rD-NA杂交位点都位于核仁内,均表现为较小且荧光较弱的杂交点,呈圆形,相互间在大小和荧光强度上比较接近。基于研究结果对现代月季品种45S rDNA的特点及演化过程进行了初步探讨。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
陈春丽 郭文武 邓秀新
染色体原位杂交技术近年发展较快,已广泛应用于植物遗传育种实践。在植物体细胞杂种遗传鉴定方面,染色体原位杂交技术也日益显示出其优势,可用于倍性变异的来源检测,非对称杂种的非对称程度确认,融合双亲的基因组互作、染色体行为分析,以及融合双亲染色体在体细胞杂种有性过程中的传递等。还探讨了染色体原位杂交技术在柑桔远缘体细胞杂种遗传鉴定中的应用前景。
[期刊] 水产学报
[作者]
周伟 陈萍 邱成功 周健凯 郭晓鸽 王丹丽 赵云龙
为研究doublesex(dsx)基因在不同生殖状态的蚤状溞的时空表达状况,提取不同生殖状态的蚤状溞RNA,采用RT-PCR和Quantitative real-time PCR检测了dsx在不同生殖状态溞体的表达差异,并通过体外转录制备DIG标记的Doublesex的RNA探针;采用整体原位杂交方法研究dsx基因在不同生殖状态的蚤状溞的时空表达状况。结果显示,RT-PCR检测发现dsx在雌雄溞体没有性别特异性的选择性拼接,只有一种相同的转录产物。Real-time PCR显示,dsx在雄溞中表达水平最高,是孤雌溞的2.6倍,两性雌溞的4.9倍,三者之间有显著性差异,表现出性别差异性表达。整体...
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