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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李莲军 韦精卫 黎宗强 卢盛晟 卢克焕
体外培养雄性新生仔猪生殖细胞,并检测其碱性磷酸酶活性及O ct-4蛋白,探讨用雄性新生仔猪生殖细胞建立干细胞系的可行性及检测方法。结果表明,雄性新生仔猪生殖细胞在BRL细胞饲养层上培养2 d,大部分生殖细胞呈碱性磷酸酶阳性(AP+),而全部呈O ct-4蛋白阴性(O ct-4-);培养1周后,生殖细胞及细胞克隆均为AP-和O ct-4-。雄性新生仔猪生殖细胞体外培养时出现2类细胞克隆,一类体积较小,数量众多,形成1周后又开始分化,仅能传至第2代;另一类细胞克隆的形态与猪原生殖细胞来源的胚胎生殖细胞(EGC)克隆相似,细胞克隆与周围细胞分界明显,而克隆中细胞相互间界限不清,这类细胞克隆易于分化,...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
杜军慧 曹文广
诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS)是借助基因导入技术将某些转录因子导入人或动物的体细胞,使体细胞重编程而得到的多能性细胞。iPS细胞来源丰富,研究表明利用不同的载体诱导系统或不同的转录因子组合,多种体细胞都可被重编程为iPS细胞,如成纤维细胞、肝细胞、角质细胞及脐带血细胞等。作为干细胞中新的一员,iPS细胞在克隆形态、基因表达模式、表面标志物、拟胚体形成、畸胎瘤及嵌合体形成(小鼠)、分化能力等方面与胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)非常相似。与胚胎干细胞一样,在特定的诱导条件下,iPS细胞在体外可被诱导分化为多种细胞...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
谭高翼 郑姗姗 张敏红 冯京海 谢鹏 毕晋明
【目的】研究不同剂量吡啶甲酸铬(CrPic)对新生仔猪原代肝细胞氧化作用的影响。【方法】选用3日龄新生仔猪作为细胞供体,用剪切消化法分离肝细胞,分别用0、8、200、400μmol·L-1的吡啶甲酸铬处理细胞48h,研究吡啶甲酸铬对细胞内活性氧(ROS)水平、丙二醛(MDA)的含量、培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性以及对细胞DNA单链断裂(彗星试验)的影响。【结果】与对照组相比,各处理组ROS水平、LDH活力和彗星试验指标无显著差异(P>0.05),8μmol·L-1组MDA含量显著降低(P<0.05);与8μmol·L-1组相比,400μmol·L-1处理组ROS、MDA、LDH和DNA...
关键词：
吡啶甲酸铬 猪 氧化 肝细胞
[期刊] 华北农学报
[作者]
马红
为获得可用于体细胞核移植中需要的供核细胞,本试验研究了大白猪仔猪(约克夏)皮肤成纤维细胞分离、培养、传代的方法,及其体外生长特征。应用本研究方法,所培养细胞在体外的生长增殖过程呈典型的"S"型。在冷冻、复苏试验中,组织块或细胞经冷冻保存复苏后活率较冻存前有所下降,但大多数细胞仍能正常生长。通过本方法,可以获得能在体外正常传代培养的细胞系,为动物克隆研究提供了供核细胞来源。
关键词：
大白猪 成纤维细胞 冷冻保存 生物学特征
[期刊] 中国农业科学
[作者]
左其生 张蕾 连超 肖天荣 王颖洁 汤贝贝 王飞 纪艳芹 路镇宇 赵瑞峰 张文慧 张亚妮 李碧春
【目的】探索家鸡雄性生殖细胞分化过程中脂代谢相关基因以及信号通路的调控机制,以期为完善体外诱导体系提供依据。【方法】采用流式细胞分选法获得纯度较高的胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)、原始生殖细胞(primitive germ cells,PGC)和精原干细胞(spermatogonial stem cell,SSC),提取细胞总RNA。利用RNA-seq高通量分析方法对这三种细胞进行转录组水平测序,进行GO(Gene ontology)分析和KEGG通路富集,寻找脂代谢相关基因以及信号通路;并利用脂代谢--视黄醇代谢通路终产物视黄酸(retinoic acid,RA...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李东 汤贝贝 王颖洁 纪艳芹 王飞 路镇宇 王曼 张亚妮 李碧春
【目的】探究蛋白质代谢在鸡雄性生殖细胞分化过程中的作用机制，为完善鸡胚胎干细胞（ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ，ｅｓｃ）体外向雄性生殖细胞诱导分化体系研究提供依据。【方法】采用流式分选的方法获取高纯度的ｅｓｃ、原始生殖细胞（ｐｒｉｍｏｒｄｉａｌ ｇｅｒｍ ｃｅｌｌｓ，ｐｇｃｓ）和精原干细胞（ｓｐｅｒｍａｔｏｇｏｎｉａ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ，ｓｓｃｓ），分别提取细胞的总ｒｎａ，采用ｒｎａ－ｓｅｑ方法对３种细胞的转录本进行深度测序，然后进行Ｗｅｇｏ（Ｗｅｂ ｇｅｎｅ ｏｎｔｏｌｏｇｙ）和Ｋｅｇｇ（Ｋｙｏｔｏ ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ ｇｅｎｅｓ ａｎｄ ｇｅｎｏｍｅｓ）通路富集分析，筛．．．
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
潘少辉 胡玥 张姗姗 王静 李飞飞 高志敏 杨春荣 华进联
【目的】从成年昆明小鼠睾丸组织中分离具有多能性的雄性生殖干细胞(Male germline stem cells,mGSCs)。【方法】采用机械法和2步酶消化法分离出成年昆明小鼠的精原细胞,经差速贴壁后,培养在小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)饲养层上,2周后得到类胚胎干细胞(ESCs)样mGSCs。对得到的mGSCs进行碱性磷酸酶(AP)染色、免疫荧光染色、RT-PCR、体内分化等检测。【结果】mGSCs具有类似ESCs的形态和多能性,AP染色呈阳性,免疫荧光Oct4、Vasa染色呈阳性,RT-PCR检测其表达Oct4、Nanog、Sox2等多能性基因和Vasa、C-kit等生殖细胞的标记基因,在...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
丛义梅 马婧 孙瑞珍 王健宇 薛冰华 胡魁 尹智 刘忠华
【目的】探讨猪类胚胎生殖细胞向神经细胞分化的潜能。【方法】采用性腺-中肾区基质细胞与猪原始生殖细胞共培养的方法得到猪类胚胎生殖细胞,通过直接分化的方法进行神经细胞定向诱导。【结果】(1)与小鼠成纤维细胞作为饲养层相比,性腺-中肾区基质细胞作为饲养层同样能够支持猪类胚胎生殖细胞生长,二者对猪类胚胎生殖细胞的增殖能力不存在显著影响;(2)猪类胚胎生殖细胞有较强的碱性磷酸酶活性,Q-PCR结果显示多能性基因Oct4、Sox2及Nanog表达,增殖能力呈现"S"型,即生长的潜伏期、对数期及平台期,猪类胚胎生殖细胞经体外悬浮培养能够形成拟胚体;(3)经过诱导猪类胚胎生殖细胞能够分化形成表达神经干细胞、神...
关键词：
类胚胎生殖细胞 体外诱导 神经细胞 猪
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
冯若鹏 张慧茹 窦忠英
对新生仔兔胰腺干细胞的分离、培养方法进行了研究,并检测了其横向诱导分化为心肌、成骨、神经细胞的潜能。结果表明,分离到的新生仔兔胰腺干细胞为上皮样细胞,在传代过程中该细胞的生长特性未发生改变,并始终表达导管源胰腺干细胞的标志CK-19,PDX-1;新生仔兔胰腺干细胞经诱导可分化为心肌、神经和成骨细胞,经免疫组化染色鉴定显示,心肌样细胞表达-αactin、神经样细胞表达NF-200而不表达GFAP、成骨样细胞茜素红染色呈阳性。证明该细胞具有多潜能性,是一种亚全能干细胞。
关键词：
新生仔兔 胰腺干细胞 诱导分化
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
吕春荣 权国波 吴国权 洪琼花
【目的】研究云南半细毛羊毛囊干细胞(Hair follicle stem cells,HFSCs)的分离培养方法。【方法】用组织块法原代培养云南半细毛羊HFSCs,并进行细胞纯化和传代培养,培养液为无血清培养液DMEM/F12+40ng/mL bFGF+20ng/mL EGF+20μL/mL B27+100IU/mL青霉素+100IU/mL链霉素。对建立的细胞系进行免疫组化、RT-PCR和流式细胞术鉴定。【结果】HFSCs体积小,为贴壁生长细胞,呈典型的铺路石状,核质比高,在倒置显微镜下胞体透亮、折光性强
关键词：
云南半细毛羊 毛囊干细胞 细胞鉴定
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
徐悦 梁利群 孙博 常玉梅
为探究碱水环境中自然优势种瓦氏雅罗鱼(Leuciscus waleckii)的耐碱离子调节机制，采用胰蛋白酶消化法对其鳃细胞(Gill cells ofLeuciscuswaleckii，LWG)进行体外培养，确定该类原代和传代细胞培养的适宜条件并进行耐受实验，用以对瓦氏雅罗鱼在碱生境中的生长特性进行论证。结果表明：瓦氏雅罗鱼原代鳃细胞培养在15℃，含有10%胎牛血清(Fetal bovine serum，FBS)的DMEM培养基（Dulbecco's modified eagle medium）中可获得稳定、良好的培养效果；36 h～72 h即可传代，稳定传代后的细胞命名为：LWG细胞。传代培养过程中，36 h时LWG细胞生长代谢旺盛可用于后续实验。碱水生境中，为缓解碱离子对鱼体造成的损伤，鳃细胞将启动渗透压胁迫应答机制。本研究对LWG细胞进行碱胁迫实验并检测其细胞活性和功能后发现：LWG细胞在25～50 mmol/L NaHCO_(3)浓度下耐受3h时，增殖率约60%并初现细胞凋亡。由此推断，在25～50 mmol/L的碳酸盐碱度胁迫下，LWG细胞具有强渗透压的碱度耐受性并促使细胞发生凋亡现象。对LWG细胞原代培养条件的摸索，将为探索瓦氏雅罗鱼碱胁迫下渗透压应激响应机制和相关基因功能的验证提供相对稳定的实验材料。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
徐小明 华进联 冯秀亮 窦忠英
从4～15周龄的牛胎儿生殖嵴中分离得到牛原始生殖细胞,以STO(一种建系的小鼠胎儿成纤维细胞)及MEF(小鼠胎儿成纤维细胞)为饲养层抑制分化培养,其中1个细胞系传至4代。研究发现,STO较MEF更有利于牛类EG细胞的分离与培养,体长小于5cm的胎儿适合牛EG细胞分离与克隆。同时观察到这些细胞在体外进行自发性分化,可形成上皮样细胞、神经样细胞和成纤维样细胞。
[期刊] 水产学报
[作者]
叶欢 危起伟 徐冬冬 岳华梅 竹内裕 阮瑞 杜浩 李创举
生殖细胞移植是指将供体的生殖细胞移植到同种或异种受体体内,供体生殖细胞嵌合到受体性腺,经过增殖、分化并最终发育为功能性配子的过程。作为辅助生殖技术,它不仅为珍稀濒危动物的繁育和保护提供了新途径,同时也为生殖干细胞的功能研究提供了有效手段。鱼类生殖细胞移植研究首先在模式鱼类斑马鱼中开展,经过十多年的发展,取得了一系列突破性的进展:主要包括先后建立了以胚胎、仔鱼和成鱼为受体的生殖细胞移植体系,精原和卵原干细胞的发现拓宽了供体生殖细胞的选择,受体的选择与制备方法的完善。该技术在缩短鱼类性成熟周期、性控育种、珍稀濒危鱼类保护等方面具有巨大的应用前景,已成功在多种淡水和海水鱼类中开展了研究和应用。本文结合作者的研究实践和经验,系统地梳理和总结了鱼类生殖细胞移植的研究进展,指出了该技术实践应用的关键问题,并探讨了其应用前景。
关键词：
鱼类 生殖细胞移植 种质资源 冷冻保存
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
杨继建 葛秀国 窦忠英
选择受精后30～50d的关中奶山羊胎儿为材料,参照小鼠原始生殖细胞(PGCs)分离得到了山羊的PGCs,将其分别培养在STO饲养层上,或与同源山羊成纤维细胞(GEF)及山羊睾丸支持细胞(GSCs)共培养。结果表明,3种方法均能获得类EG细胞。分离得到的类EG细胞在STO饲养层上仅传4代;培养在GEF上的效果最差,传至第3代时丢失;而在GSCs上培养的效果最好,可传6代。
关键词：
山羊 原生殖细胞 胚胎干细胞
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
于海生 华进联 王洪锋 杨炜峰 刘胜 蒋会婷 窦忠英
为了探讨人原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)的体外分离培养条件及相关影响因素,以小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEF)作为饲养层,室温下用1．25 g／L胰蛋白酶+0．2 g／L EDTA消化人胚胎组织5～9 min,或用1 g／L胶原酶(IV型)消化20～40 min,分离得到PGCs,然后用不同培养液培养,从培养液角度较为系统的研究原代培养人原始生殖细胞的条件。结果表明,在KSR培养液(体积分数15％ Knockout serum replacement+高糖DMEM+10 ng／mL人重组白血病抑制因子(LI...
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