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[期刊] 水产学报
[作者]
余来宁 左文功 方耀林 郑卫东
选择对草鱼出血病病毒（ＦＲＶ）不敏感的草鱼肝组织进行细胞培养，建立了草鱼肝细胞株，命名为ＧＬＡ．对ＧＬＡ进行攻毒，发现其对ＦＲＶ有抗性。采用电融合结合继代移核的方法，将ＧＬＡ细胞（核），移植于草鱼未受精卵内，获得开口前的幼鱼８尾和存活仔鱼１尾，说明此方法能提高细胞的发育能力。通过比较体细胞工程鱼与供体、受体亲本草鱼的形态特征，发现体细胞工程鱼可数性状与供体草鱼的基本一致，初步推断体细胞工程鱼的遗传信息，是由供体细胞核提供的。
关键词：
草鱼,电融合,继代移核,细胞工程鱼
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
罗晓春 李正秋 王金虎 张奇亚
以草鱼出血病病毒和牛血清白蛋白 (BSA)为抗原接种草鱼 ,比较了草鱼对两种抗原的体液免疫应答情况。结果显示 ,在接种了BSA的草鱼中 ,14d后检测到抗体 ,其效价在 2 8d达到峰值 ;而接种了出血病病毒的草鱼 ,在 2 1d后检测到抗体 ,抗体效价在 35d达到峰值。用FITC BSA检测免疫BSA草鱼的抗体产生细胞 ,探讨了抗体产生效价与抗体细胞数量的关系。
关键词：
草鱼 体液免疫应答 抗体产生细胞
[期刊] 淡水渔业
[作者]
武焕阳 丁诗华 唐毅 李云 伍莎 张薪
以草鱼(Ctenopharyngodon idellus)为受试动物,研究了硫丹对草鱼红细胞微核及核异常的影响。结果显示:草鱼红细胞微核率、核异常率及总核异常率随硫丹暴露浓度的增加而逐渐上升,呈现较明显的剂量—效应关系。在一定的时间范围内(=96 h),各暴露组草鱼红细胞微核率、核异常率及总核异常率均呈现时间—效应关系,但96 h后较高浓度组(0.36μg/L、0.71μg/L)红细胞微核率、核异常率及总核异常率随暴露时间的延长并未进一步提高。结果表明,杀虫剂硫丹对草鱼具有潜在的遗传毒性,且毒性效应在特定条件下随暴露浓度的增加或胁迫时间的延长而增强。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
叶星 白俊杰 劳海华 简清 罗建仁
用DNAExtractionKit提取草鱼(Ctenopharyngodonidella)肝脏的总DNA,合成特异引物,进行PCR扩增。扩增产物经琼脂糖电泳检测、纯化后克隆到pGEM Teasyvectorsystem的T载体上,筛选转化子,提取质粒,酶切鉴定。重组质粒序列测定的结果显示克隆了草鱼线粒体细胞色素b(cytb)基因1140个碱基及两侧部分序列共1254bp。用DNA分析软件VectorNTI6.0比较草鱼与GenBank中18种鱼类cytb的序列,显示草鱼与它们的cytb基因具有较高的同源性;根据草鱼与这18种鱼的cytb基因序列同源性所建立的进化树,与传统的分类地位基本吻合。
关键词：
草鱼 线粒体 细胞色素b 核酸序列
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
刘莉 刘鹏 金佳丽 吴海丽 王改改 江晨 采克俊
Mx蛋白是一类由I型干扰素(IFN)诱导表达的抗病毒蛋白。以PolyI∶C诱导的草鱼(Ctenopharyngodon indellus)肾细胞(CIK cells)为材料,抽提细胞总RNA,通过RT-PCR的方法扩增出Mx基因cDNA全序列,连接至pMD20-T载体上,构建重组质粒pMD20-T-Mx,并测序进行序列分析。用限制性内切酶从克隆的重组质粒pMD20-T-Mx上切下Mx基因,插入到质粒pEGFP-C1中,构建真核表达载体pEGFP-C1-Mx。结果显示,该基因cDNA全序列为1 921 bp,阅读框共编码627个氨基酸,分子量约为71.1 ku,理论等电点pI为8.33,其编码的...
关键词：
草鱼 Mx基因 克隆 序列分析 载体构建
[期刊] 淡水渔业
[作者]
刘品 李超 黄吉芹 吉红
获得高质量的RNA是逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、Northern blot以及转录组测序(RNA-Seq)等分子生物学研究的基础,由于草鱼脂肪细胞中油脂含量较高,从中提取高质量RNA存在困难。本研究以草鱼(Ctenopharyngodon idellus)成熟脂肪细胞为材料,通过增加离心和抽提次数等方式对传统总RNA提取方法进行优化,采用琼脂糖凝胶电泳、核酸定量分析及基因扩增等方法验证所得RNA的完整性、纯度及质量。结果表明,经此方法提取的草鱼成熟脂肪细胞总RNA的A260 nm/A280 nm比值在1.95到2.00之间,28S和18S条带完整,草鱼LPL和β-actin基因扩增条...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
尹晓燕 田兴 李大鹏 汤蓉
为探究亚硝态氮对于草鱼离体肝细胞抗氧化系统的影响,将分离得到的离体草鱼肝细胞在含0(空白),1,10和100 mg/L(浓度以氮计)的亚硝酸钠的M199生长培养基中,分别培养6、12、24、48和96 h后,检测肝细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)和谷胱甘肽转移酶(GST)的活性,谷胱甘肽(GSH)水平以及总抗氧化能力(TAC)。结果显示:高浓度的亚硝酸钠会引起肝细胞内的SOD、CAT、GST、γ-GCS活性显著升高;除100 mg/L实验组外,各实验组的GSH水平均显著高于对照组,而TAC则随着亚硝酸钠浓度的升高,表现为先升高后下降的...
[期刊] 华北农学报
[作者]
刘海军 刘灵 刘玉堂 李平 池炳杰
以波尔山羊体细胞作为核供体进行核移植,比较受体卵母细胞来源以及不同供体细胞类型对核移植重构胚融合率的影响。结果:以体内成熟和FSH处理卵巢、屠宰场卵巢来源的体外成熟卵母细胞做核移植受体卵母细胞,重组卵的融合率分别为71.9%,78.4%,73.1%,三者之间差异不显著;以卵丘细胞和皮肤成纤维细胞做核供体,重组卵的融合率分别为77.1%,68.3%,二者之间差异显著。
关键词：
山羊 核移植 供体细胞 卵母细胞 电融合
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
赵浩斌 陈乃清 魏庆信
以湖北白猪为试验动物 ,研究了不同处理对猪 2 细胞胚胎电融合的影响 ,结果表明 :融合液的离子强度、电场强度、脉冲时程和交流电处理等均影响电融合的效率 ,以非电解质的甘露醇溶液为融合液 ,融合前交流脉冲处理 ,直流电场强度为 150 0～ 2 0 0 0V/cm和脉冲时程为 4 0～ 60 μs时可获得较高的融合效率。
关键词：
猪 2-细胞胚胎 电融合
[期刊] 水产学报
[作者]
胡亚芹 薛长湖 谢江碧 姜凤英 林洪
在草鱼红、白色肉分离出的微粒体中，同时存在脂肪的酶氧化和非酶氧化两种体系。酶氧化体系需要ＡＴＰ或ＡＤＰ和Ｆｅ３＋、Ｆｅ２＋等因子的参与。高浓度的ＡＤＰ对脂质氧化有抑制作用。Ｆｅ２＋比Ｆｅ３＋的催化作用强。红、白色肉细胞微粒体脂肪氧化最适ｐＨ值在６．０～７．０之间。高铁血红蛋白和肌红蛋白被过氧化氢激活后，能催化非酶氧化。在过氧化氢与血红素摩尔比为１∶１时，催化效果最佳。
[期刊] 水产学报
[作者]
叶星 白俊杰 劳海华 简清 李英华 罗建仁
采用PCR方法改造已克隆到的草鱼胰岛素样生长因子 Ⅰ (IGF Ⅰ )cDNA ,使其成为成熟肽cDNA并亚克隆到pGEX 4T 1载体中 ,构建草鱼IGF I融合蛋白表达质粒pGEX IGF。质粒转化大肠杆菌BL2 1菌株。该菌株经IPTG诱导可表达分子量约 34kD的特异蛋白。在不同的温度条件下分别产生以可溶性的和包涵体形式为主的特异蛋白。经 30℃诱导的菌体经溶菌酶消化、超声破碎及高速离心后 ,裂解液上清经glutathionesepharose亲和层析纯化获得高纯度的GST IGF。以此纯化的融合蛋白为抗原制备兔抗草鱼IGF I的抗血清。凝胶双扩散试验显示抗血清效价为 1∶6 4 ,...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
罗晓春 李正秋 王金虎 张奇亚
用白细胞分离介质Histoque 10 77将草鱼外周血液中淋巴细胞分离后 ,依据它们对尼龙毛的粘附特性分为粘附性细胞和非粘附性细胞两个类群。分别检测分离前、后的淋巴细胞的细胞表面超微结构、α 醋酸萘酯酶活性及膜表面球蛋白。结果表明 :表面粗糙细胞、α 醋酸萘酯酶阳性细胞和膜表面球蛋白阳性 (SIg+ )细胞在外周血液总淋巴细胞中的比例分别为 47.8%、15 .2 %和 5 3.8% ,在粘附性淋巴细胞中的比例分别为 82 .3%、0 .1%和 76 .2 % ,在非粘附性淋巴细胞中的比例为 18.3%、2 4.2 %和 2 5 .5 %。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
常藕琴 霍礼霞 罗满林 石存斌 张德峰 潘厚军 任燕
分离纯化草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肾中性粒细胞、鉴定和检测其活性,目的在于为研究中性粒细胞的功能和免疫防御机制提供细胞材料。本研究使用鱼类脏器组织中性粒细胞分离试剂盒和差异贴壁法分离获得草鱼肾中性粒细胞;应用迪夫氏染色、碘化钾-吡啰红G (KI-Py G)染色、电镜技术鉴定细胞形态,使用多功能酶标仪检测经MPA刺激的细胞活性,台盼蓝染色法和CCK-8检测细胞存活率。结果显示,获得的细胞大小均一,细胞核圆形或肾形,胞质有A、B型颗粒,表面有皱褶,具有中性粒细胞的形态特征;细胞纯度达(99.3±0.53)%,细胞活力达(97.70±0.76)%,在体外培养24h内细胞存活率可保持在(89.91±3.56)%;在PMA刺激下检测到细胞表达MPO、ROS、NO和NETs的量显著提高(P<0.05),与刺激时间呈正相关。结果证实,分离的细胞具有很好的活力,具有中性粒细胞的功能特征。本研究成功建立草鱼中性粒细胞的分离方法,细胞具有很好的活力,可为深入研究鱼类中性粒细胞的功能和免疫机制提供基础。
关键词：
草鱼 中性粒细胞 分离 鉴定 活性检测
[期刊] 淡水渔业
[作者]
曾令兵 高梦雪 蒋勇华
本文对草鱼细胞和病毒的两种大规模培养方式进行了研究和比较。静置培养条件下，细胞生长速度快，２—３天内可形成单层，单层均匀而稳定；旋转培养条件下，细胞７天左右长成单层，细胞单层面积大，病毒培养产量高。这两种培养方式所观察到的细胞病变过程及表征基本相同，病毒的ＴＣＩＤ５０／ｍｌ值稳定在６．０左右。采用这两种培养方式，可实现草鱼细胞和病毒的大规模培养。
关键词：
草鱼,细胞,病毒,大规模培养
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
童娜 尹晓燕 李大鹏 汤蓉
将草鱼肾细胞(CIK)在28℃条件下培养24h后,分别置于28(对照)、32、36和40℃的条件下暴露2h,测定不同温度处理组的细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、细胞周期的改变、细胞内多泛素化蛋白水平以及caspase-3和bcl-2的表达变化;置于28(对照)、32、36和40℃的条件下暴露12h,测定不同温度处理组的细胞活力。试验结果表明,热应激引起细胞活力显著下降,导致CIK细胞的LDH漏出率显著上升,多泛素化蛋白表达量显著增加,bcl-2的表达量显著下调和caspase-3的表达量显著上调,G0/G1期细胞显著减少。急性热应激可能会引起CIK的细胞膜通透性和蛋白质表达量的变化,从而诱导细...
关键词：
急性热应激 草鱼肾细胞 细胞凋亡
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