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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李雨萌 洪盼 兰海楠 吴天成 郑鑫
【目的】制备生长激素受体的单克隆抗体，探讨其对生长激素受体的激活作用，为研究生长激素模拟物提供新思路。【方法】以生长激素受体胞外域（ＧＨＢＰ）免疫ＢＡＬＢ／ｃ鼠，通过杂交瘤技术制备抗生长激素受体的单克隆抗体，用流式技术筛选抗体，通过流式、激光共聚焦显微镜观察研究该单克隆抗体对生长激素受体的激活作用，然后通过Ｗｅｓｔｅｒｎ－ＢＬｏｔ等技术手段研究其胞内的信号通路。【结果】通过杂交瘤技术共获得了３０个分泌抗生长激素受体的单克隆抗体，经流式分析筛选到具有受体激动剂活性的单克隆抗体（命名为Ｌ８）。竞争性结合分析结果表明，Ｌ８在受体上的结合表位与生长激素重叠；激光共聚焦观察结果表明，Ｌ８不但能结合到细胞．．．
[期刊] 淡水渔业
[作者]
陈松林 杨春 邓文涛 陈细华 夏盛芹
本文用大鳞大马哈鱼生长激素（ｓＧＨ）免疫日本大耳白兔制备了特异抗血清。应用常规酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ）对抗血清效价和特异性进行了测定，结果表明ｓＧＨ抗血清只与ｓＧＨ特异反应，与草鱼ＧＨ、草鱼催乳素（ＰＲＬ）、牛ＧＨ及大群大马哈鱼促性腺激素（ｓＧｔＨ）等基本上没有交叉反应，该抗血清的效价约为１：７００００左右。应用ｓＧＨ抗血清，初步建立了ｓＧＨＥＬＩＳＡ检测方法。
关键词：
大鳞大马哈鱼,生长激素,抗体制备
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
简清 白俊杰 李英华 叶星 罗建仁 劳海华
采用高效表达鲤鱼生长激素的大肠杆菌基因工程菌株E .coli(pBVcGH8)进行发酵培养 ,经温度诱导可产生一分子量约为 3.6 3× 10 -2 0 g的特异表达产物 ,该表达产物主要以包涵体的形式存在 ,表达量占菌体总蛋白的 2 9.2 %。表达产物经包涵体收集、洗涤等初步纯化后 ,纯度可达 85 .0 %。再经变性与复性后 ,用阴离子交换层析进一步分离纯化 ,最终可获得纯度为 96 .0 %的重组鲤鱼生长激素。用该纯化过的重组鲤鱼生长激素注射罗非鱼 ,有明显的促生长作用
关键词：
鲤鱼生长激素 表达 纯化 促生长
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
兰海楠 李维 郑鑫
【目的】以鼠肝细胞为模型,在细胞水平上研究猪生长激素抗独特型抗体的作用机制。【方法】以猪生长激素单克隆抗体1A5-F(ab′)2部分免疫BALB/c鼠,采用杂交瘤细胞技术制备猪生长激素抗独特型单克隆抗体。分离Wistar大鼠肝脏细胞,以其为模型,采用流式分析、激光共聚焦显微镜观察、Western-blot等技术手段,研究猪生长激素抗独特型单克隆抗体的生物活性。【结果】成功制备了3株猪生长激素抗独特型单克隆抗体,分别命名为CG1、CG2、CG3。其中,CG1阳性信号最强,经鉴定,CG1为Ab2β类抗独特型抗体,属于IgG2a亚类。CG1能够以二聚体的形式激活鼠肝细胞表面的生长激素受体,并可激活信...
关键词：
猪生长激素 抗独特型抗体 信号转导
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
马晓 胡毅 熊钢 何湘蓉 王晓清
生长激素(growthhormone,GH)参与动物的生长、发育等代谢过程.GH发挥生理作用,首先是与靶细胞膜表面的生长激素受体(growth hormone receptor,GHR)结合,启动细胞内信号传导,促进胰岛素样生长因子(Insulin_like growth factor,IGF_I)的表达,再通过血液循环到达生物体局部组织,促进细胞的代谢过程.GHR是一种特异、高效的膜蛋白.GHR对GH的功能发挥有重要的影响,其在细胞内的表达量对生长激素发挥作用有重要影响,从而影响了生物器官组织的生理功能.就生长激素受体及生长激素受体基因的研究进展进行综述.
关键词：
生长激素受体 基因 结构 表达 调节
[期刊] 水产学报
[作者]
邓利 张为民 林浩然 郑汉其
采用黑鲷生长激素（ｓｅａｂｒｅａｍ ｇｒｏｗｔｈ ｈｏｒｍｏｎｅ，ｂｒＧＨ）放射免疫测定法（ｂｒＧＨ ＲＩＡ）及黑鲷生长激素放射受体测定法（ｂｒＧＨ ＲＲＡ），研究了不同季节（３月、６月、９月及 １２月）黑鲷血清ＧＨ水平及肝脏和性腺中生长激素受体（ｇｒｏｗｔｈ ｈｏｒｍｏｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＧＨＲ）水平的变化，同时测定了黑鲷白肌及肝脏ＲＮＡ－ＤＮＡ比率及黑鲷肥满度（ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ，Ｋ）和性腺指数（ｇｏｎａｄｏｓｏｍａｔｉｃ ｉｎｄｅｘ，ＧＳＩ）的季节变化。黑鲷血清ＧＨ水平于６月出现高峰，显著高于３月、９月至１２月的水平（Ｐ＜０．０１）。黑鲷肝脏中ＧＨＲ水平在９月及１２月显...
关键词：
黑鲷 生长激素 生长激素受体 季节变化
[期刊] 中国水产科学
[作者]
马骞 柳淑芳 庄志猛 唐启升
根据已克隆的半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)生长激素(GH)基因和生长激素受体Ⅰ(GHR-Ⅰ)基因的cDNA序列信息设计引物,用于扩增半滑舌鳎GH、GHR-Ⅰ基因序列。随后,分别利用表达载体pET-32a和pGEX-6P-1成功构建了包含半滑舌鳎GH、GHR-Ⅰ基因ORF全序列及不同ORF片段的6个重组质粒,并将获得的重组质粒在表达宿主菌大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳结果显示:重组GH的pET-32a-CSGH质粒在40 kD处有特异性的蛋白条带,重组GHR-Ⅰ胞内区的pGEX-6P-1-CSG...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
胡乔木 田海峰 孟彦 肖汉兵
利用中国大鲵（ＡｎｄｒｉＡｓ ｄＡｖｉｄｉＡｎｕｓ）性腺转录组测序获得的生长激素受体（ＧＨｒ）基因部分序列，克隆获得基因全长２９９２ ｂｐ，开放阅读框１８１２ ｂｐ，编码６０４个氨基酸，该蛋白具有高度保守的ＦＧＥＦｓ基序与ｂＯＸ框。系统进化分析结果显示，中国大鲵ＧＨｒ氨基酸序列与两栖类非洲爪蟾（ＸＥｎＯｐｕｓ ｌＡＥｖｉｓ）同源性最高，蜥形纲锦龟（ＣＨｒｙｓＥｍｙｓ ｐｉＣｔＡ ｂＥｌｌｉｉ）次之，哺乳类水牛（ｂｕｂＡｌｕｓ ｂｕｂＡｌｉｓ）和鱼类半滑舌鳎（ＣｙｎＯＧｌＯｓｓｕｓ ｓＥｍｉｌＡＥｖｉｓ））最低。实时定量ｐＣｒ结果表明，ＧＨｒ基因在肝中表达最高，肌肉、垂体、肾、性腺中的表达量次之．．．
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
丁炜东1 曹丽萍1 曹哲明1 邴旭文1 陈克春2 胡晋鸣3
对雌激素受体α基因的氨基酸序列进行抗原性分析，筛选合适的基因片段进行克隆，经RT-PCR扩增得到大小为945 bp的片段，经测序鉴定后，将该片段定向亚克隆于pMAL-c2x表达载体中，转化至TB1感受态细胞中进行诱导表达。经1 mmol/L IPTG诱导4 h观察到有新的重组蛋白获得了表达，采用SDS-PAGE和Western blot试验进行检测，结果表明表达的重组蛋白的分子质量约为78.1 ku，表达产物占菌体总蛋白的42.3%，且具有免疫学活性。进一步纯化和蛋白酶切后，得到单一的雌激素受体α蛋白。以该蛋白免疫小鼠制备抗体，在免疫第7周时达到最大滴度1.158±0.232。将制备的多克隆抗...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
丁炜东 曹丽萍 曹哲明 邴旭文 陈克春 胡晋鸣
对雌激素受体α基因的氨基酸序列进行抗原性分析,筛选合适的基因片段进行克隆,经RT-PCR扩增得到大小为945bp的片段,经测序鉴定后,将该片段定向亚克隆于pMAL-c2x表达载体中,转化至TB1感受态细胞中进行诱导表达。经1mmol/L IPTG诱导4h观察到有新的重组蛋白获得了表达,采用SDS-PAGE和Western blot试验进行检测,结果表明表达的重组蛋白的分子质量约为78.1ku,表达产物占菌体总蛋白的42.3%,且具有免疫学活性。进一步纯化和蛋白酶切后,得到单一的雌激素受体α蛋白。以该蛋白免疫小鼠制备抗体,在免疫第7周时达到最大滴度1.158±0.232。将制备的多克隆抗体进行黄...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陈刚 周光宏 刘清 丁俊龙
[期刊] 水产学报
[作者]
李文笙 王滨
生长抑素是一个多基因、多功能的家族。通过其受体的介导参与机体的生长、发育、代谢、生殖以及免疫等生理过程。本文简要概括鱼类生长抑素及其受体的研究进展,重点对生长抑素调控垂体生长激素分泌的信号转导机制进行讨论,旨在加深对鱼类生长抑素作用机制的认识和了解。迄今,在鱼类中已经鉴定出6种生长抑素基因和4种生长抑素受体。由于存在多种生长抑素基因以及不同的加工过程,一种鱼可能产生多种形式的生长抑素多肽。鱼类进化过程中存在基因组复制,导致一种受体又有多种亚型。鱼类生长抑素调控垂体生长激素分泌的作用机制主要源自金鱼中的研究,结果表明,cAMP通路、钙离子通道以及PKC通路可能参与了金鱼生长抑素抑制垂体生长激素分...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
俞菊华 李红霞 李建林 唐永凯 董在杰
GHS-R基因在哺乳类为候选的肥胖和生长数量性状位点。本实验使用RT-PCR及PCR的方法,从建鲤(Cyprinus carpio var.jian)分离到2个jlGHS-R1s,称为jlGHS-R1a和jlGHS-R1b(分别简称1a和1b)。jlGHS-R1s的阅读框编码360个氨基酸,两者间相似性高达96%;另外还存在2个jlGHS-R1s的转录变体(分别简称1a'和1b'),选择性切割了翻译起始碱基后第490-680 nt的191 bp片段,该片段两端碱基分别为gt-ag,这种选择性切割导致翻译提前终止,仅翻译184个氨基酸,包括前面3个半跨膜区,这与已报道的罗非鱼等的保留内含子的转录...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李发弟 夏东 陈杰 赵茹茜
随机选取0、3、20、30、90、120和180日龄二花脸公猪和大白公猪各4头,用相对定量RT-PCR法研究睾丸组织中生长激素受体(GHR)基因表达的发育性变化。结果表明,二花脸猪与大白猪睾丸GHR mRNA表达的发育模式不同,二花脸猪GHR mRNA相对表达量从0到30日龄逐渐上升,在90和120日龄呈阶段性降低(P
[期刊] 中国水产科学
[作者]
马细兰 张勇 刘晓春 林浩然
选取同一批30日龄的尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)鱼苗置于水泥池中自然饲养,分别于30、60、80、110、140日龄取样测定不同发育阶段雄鱼的特定生长率。用实时荧光定量PCR方法检测雄鱼肝脏中两种生长激素受体(GHR1和GHR2)的mRNA丰度。结果表明,30～110日龄,雄鱼特定生长率呈不断上升趋势,至80～110日龄达到最高,之后开始下降;雄鱼肝脏中2种GHR基因表达的发育性变化趋势不相同,30～110日龄,GHR1mRNA表达逐渐上升,110日龄达到最高,随后开始下降,其发育性变化与特定生长率显著正相关(R=0.96,P<0.01);GHR2mRNA表达在60...
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