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[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
王水琦 陈坚 甘勇辉
用不同浓度的2,4-D与IAA对桉树叶盘进行了愈伤组织的诱导及植株再生的试验,建立了新的桉树再生体系.进一步用含甜椒抗菌基因(hrap)的农杆菌侵染桉树叶盘,发现侵染后对愈伤组织诱导率无明显影响,却抑制了桉树的植株再生.对再生苗的PCR和Sou thern杂交检测证实已将hrap基因已转入桉树植株的基因组中.
[期刊] 林业科学
[作者]
邵志芳 陈伟元 罗焕亮 叶新丰 张景宁
通过二次正交旋转组合设计对尾叶桉叶盘愈伤组织分化培养基优化 ,获得尾叶桉 (Eucalyptusuro phylia)叶盘外植体的再生植株。将携带外源目的基因的根癌农杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens)与尾叶桉U6无性系叶盘共培养 ,经愈伤组织诱导、卡那霉素筛选和植株再生 ,获得 2 0个小芽 ,再将小芽转入附加卡那霉素(Kam) 4 0 μg·mL- 1 的E3-B培养基中诱根 ,获得 8株存活且可再生的转化子。取转化苗叶片作胭脂碱合成酶活性检测电泳后呈阳性 ;分别以γ 32 p dCTP及地高辛标记柞蚕抗菌肽D基因作探针 ,与转化苗DNA作点杂交及Southern印迹...
关键词：
尾叶桉 抗菌肽D 青枯病 柞蚕
[期刊] 林业科学研究
[作者]
陈颖 李铃 韩一凡
抗菌肽ＬｃＩ基因转化杨树的阶段研究＊李陈颖李铃韩一凡关键词抗菌肽ＬｃＩ基因、转化、杨树杨树（Ｐｏｐｕｌｕｓｓｐｐ．）是“三北”防护林和四旁绿化的主要树种，在防风固沙、农田林网、四旁绿化及水土保持方面起着重大作用［１］。目前，我国林木抗虫抗病主要以化...
关键词：
抗菌肽LcI基因,转化,杨树
[期刊] 中国农业科学
[作者]
皇甫海燕 官春云
【目的】建立适合于提取油菜叶片全蛋白的三氯乙酸/丙酮沉淀法,为今后油菜蛋白质组学的研究提供参考,明确菌核菌诱导抗、感菌核病油菜后的蛋白差异表达情况,为寻找抗菌核病基因提供线索。【方法】以油菜抗菌核病近等基因系98C40(抗原来自湘油15)和感菌核病亲本98C40为材料,在其生长的苗期阶段,接种菌核菌72h之后,分别提取其叶片全蛋白。运用双向电泳技术、PD-quest软件、质谱技术对其进行差异蛋白质组分析。【结果】检测到抗病98C40(抗原来自湘油15)与感病亲本98C40之间有4个差异蛋白点,蛋白点a,线粒体ATP合酶F1β亚基(mitochondrial F1ATP synthase bet...
[期刊] 华北农学报
[作者]
孙瑶 马平 朱宝成 李社增 鹿秀云
拮抗细菌BDT_25是从根际土壤中分离到的一株对棉花黄萎病菌具有强烈抑制作用的芽孢杆菌。经生理生化特征的鉴定,证明BDT_25菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。此外,该菌株还对棉花枯萎病菌、棉花立枯病菌等10种其他病原真菌的生长具有显著的抑制作用,为一株广谱拮抗细菌菌株。通过对BDT_25菌株培养条件的研究发现,采用NB液体培养基,28℃,170 r/min培养48 h所得发酵液对棉花黄萎病菌的抑制作用最强。其发酵液经硫酸铵沉淀粗提到对棉花黄萎病菌具有抑制作用的提取物,进一步实验表明,该拮抗物质对热和多种蛋白酶敏感,证实其为抗菌蛋白。
关键词：
棉花黄萎菌 拮抗菌 鉴定 抗菌蛋白
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王喆 刘茜倩 庞博 张晓辉 鲍恩东
[目的]本研究旨在提供蛋白酶治疗奶牛乳房炎的参考数据,了解胰蛋白酶和糜蛋白酶的体外微生物敏感性。[方法]通过测定细菌的A600绘制不同细菌的生长曲线,探讨了0.5C浓度胰糜蛋白复合酶(胰、糜蛋白酶各0.08 mg·m L-1)、1C浓度胰糜蛋白复合酶(胰、糜蛋白酶各0.16 mg·m L-1)、2C浓度胰糜蛋白复合酶(胰、糜蛋白酶各0.32 mg·m L-1)及其与头孢噻呋钠、磷酸替米考星和硫氰酸红霉素联用对5种常见奶牛乳房炎致病菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、巴氏杆菌、无乳链球菌、停乳链球菌)生长的影响。同时,采用电子显微镜扫描技术,观察胰糜蛋白复合酶与头孢噻呋钠协同对大肠杆菌超微结构的影响。...
[期刊] 华北农学报
[作者]
张双凤 张爱民 赵钢勇 张克宏
从棉花植株根部筛选的108株芽孢杆菌中,通过对棉花黄枯萎主要病原菌大丽轮枝菌拮抗效果的复筛,分离到一株LC-105菌株,其抑菌圈达到20 mm以上;本研究从该菌株的发酵代谢产物中,分离出活性拮抗物质,进一步通过DEAE-Sephadex A-50离子交换层析和Sephacryl-S100凝胶层析对其代谢产物进行了分离纯化,证明该拮抗物质为一种蛋白质,最后通过聚丙烯酰胺凝胶电泳证实了所分离物质的纯度达到电泳纯。
[期刊] 华北农学报
[作者]
郑晓鹰 黄为平
用聚丙烯酰胺均匀胶和等电聚焦电泳技术，分析了甜椒种子及种苗的过氧化物同功酶谱和种子水溶蛋白图谱。在过氧化物酶谱带的两个位点ＰＲＸ－１和ＰＲＸ－２上，自交系亲本与Ｆ１杂交种有明显的差异。水溶蛋白的一个位点ＰＲＯＴ亲本与Ｆ１有明显差异。供试甜椒组合的过氧化物酶和蛋白的图谱，分别具有这些位点。利用这些鉴别图谱，对甜椒商品种子样品进行的杂交种纯度检验，纯度范围在８％～９９％，与田间检测结果一致。这一电泳检测技术可以有效地用于甜椒杂交种纯度的检验
关键词：
甜椒,同功酶,水溶蛋白,纯度鉴定
[期刊] 林业科学研究
[作者]
刘宏毅 陈全助 叶小真 陈慧洁 李慧敏 冯丽贞
[目的]利用生物信息学方法探讨ABC转运蛋白在焦枯病菌对桉树侵染过程中的解毒作用,为揭示桉树焦枯病致病机制奠定基础。[方法]本文利用BLAST、HMMER、Pfam数据库、TCDB数据库在全基因组内对桉树焦枯病菌的ABC转运蛋白进行鉴定和分类,并通过Prot Camp和IBS分别进行亚细胞定位和结构域图绘制,依据同源性对其功能进行推测分析。[结果]表明:桉树焦枯病菌共有70个ABC转运蛋白,它们分属于8个亚族。71%的转运蛋白位于细胞膜,10%位于液泡,其余部分位于线粒体、过氧化物酶体、内质网等内膜系统上
[期刊] 中国农业科学
[作者]
马玲莉 霍蓉 高学文 何丹 邵敏 王琦
【目的】尝试利用转基因方法提高油菜抗病性。【方法】将来自水稻细菌性条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola)编码harpinXooc蛋白的hrf2基因插入植物表达载体pCAMBIA1301中,构建了植物重组表达质粒pCAMBIA1301-hrf2。由根癌农杆菌LBA4404介导,将重组表达质粒pCAMBIA1301-hrf2转化甘蓝型油菜杨油4号子叶节。【结果】获得了抗潮霉素的再生转基因油菜植株,经PCR,RT-PCR和GUS染色检测证明hrf2基因已整合到油菜基因组中。抗病性鉴定结果表明,转基因油菜对油菜菌核病有较好的抗性,在转基因植株叶片上油菜菌核病菌菌丝的...
[期刊] 华北农学报
[作者]
谢昆 王靖 王丽仙 朱灵明 尹建华 叶青霞 孙艳
抗菌肽是生物体内具有抗菌活性的一种小分子物质,在昆虫细胞抵御外源微生物的感染过程中发挥着重要作用。为研究家蚕抗菌肽基因克隆、重组抗菌肽的表达和纯化方法,以家蚕中肠组织总RNA为模板,设计4对特异性引物,应用RT-PCR技术扩增BmCecropin、BmCecropin B6、BmCecropin D和Bmmoricin这4种抗菌肽基因,通过自诱导方式原核表达4种抗菌肽重组蛋白,并对4种抗菌肽重组蛋白进行Ni-NTA亲和层析和超滤纯化。结果表明,克隆的BmCecropin、BmCecropin B6、BmC
关键词：
家蚕 抗菌肽 重组蛋白 自诱导表达 纯化
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
杨婷婷 张炜
克隆了红树植物‘白骨壤’中甜菜碱/脯氨酸转运蛋白基因(Bet/ProT2),采用根瘤农杆菌介导的方法,将携带有GFP报告基因的35S-Bet/ProT2-GFP融合质粒转化洋葱表皮细胞,亚细胞定位分析表明,Bet/ProT2是定位在细胞质膜上的跨膜蛋白。进一步利用农杆菌介导法将Bet/ProT2转入粳稻‘日本晴’,鉴定结果表明,Bet/ProT2基因已经整合到‘日本晴’的基因组中并有效表达。转Bet/ProT2基因水稻的耐盐性明显提高,在甜菜碱和脯氨酸同时或分别存在的条件下,转基因水稻可以在含有150 mmol·L-1NaCl的液体培养基中正常生长,同时叶片中H2O2含量较低;而野生型水稻在相...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
牛焕杰 李辉 王娜娜 张红 王惠 黄丽丽
【目的】从枯草芽孢杆菌Ｅ１Ｒ－ｊ菌株的发酵液中分离纯化抗菌蛋白，分析确其对苹果树腐烂病菌菌丝的抑制作用，为更好地利用该菌株防治植物病害和研制生物农药奠定基础。【方法】采用盐酸沉淀法从Ｅ１Ｒ－ｊ发酵液中提取粗蛋白，并筛选酸沉淀的最佳ｐＨ值，然后通过反相柱ＲＥＳＯＵＲＣＥＴＭＲｐＣ、凝胶柱ＳＵｐＥＲｄＥｘ－７５、阴离子交换柱ｄＥＡＥ－ＳＥｐＨＡＲＯＳＥ和脱盐柱层析技术，提取并分离纯化粗蛋白；在粗蛋白分离纯化过程中，以皿内对峙试验测定蛋白的抗菌活性；通过扫描电镜技术，观察抗菌蛋白对病原菌菌丝的抑制作用。【结果】以ｐＨ ４．０盐酸沉淀获得的粗蛋白活性最强，抑菌效果最佳。反相柱ＲＥＳＯＵＲＣＥＴＭＲｐＣ．．．
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
易有金 罗坤 罗宽 刘二明
分离得到1株抑制烟草青枯病菌的内生拮抗菌B-001菌株.为确定其抗菌蛋白产生的最佳培养基和培养条件,用硫酸铵沉淀法从发酵液中提取抗菌蛋白质,测定其对烟草青枯病菌抗菌活性,确定产生抗菌蛋白的最佳培养基为BPY液体培养基,最佳发酵条件为pH7.0,30℃,装液量100 mL,200 r/min振荡培养96 h;抗菌蛋白在pH5.0,pH8.0时抑菌活性仍分别保持90%,96%;pH6.0,pH7.0时抑菌活性仍保持不变;对酸、碱稳定;经40～100℃处理20 min后抑菌活性保持不变,具有良好的热稳定性;对蛋白酶有一定的耐受性.在温室内,抗菌蛋白粗提液对烟草青枯病可取得83.8%的防效.
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