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[期刊] 中国农业科学
[作者]
潘腾飞 潘东明 姜翠翠 陈桂信 郭志雄
【目的】构建琯溪蜜柚BAC文库,利用该文库筛选与汁胞粒化相关的基因。【方法】用温和的物理方法获得高分子量DNA,部分酶切后进行回收、连接、转化,超低温保存阳性克隆。构建DNA样品混合样,PCR法筛选文库,生物信息学分析DNA序列。【结果】改进了适合琯溪蜜柚BAC文库构建的方法;构建的琯溪蜜柚BAC文库含有26112个单克隆,空载率小于1%,叶绿体DNA的污染率不超过1%,插入片段平均大小大约120kb,覆盖8倍的琯溪蜜柚基因组。利用与琯溪蜜柚汁胞粒化相关的EST序列设计PCR引物筛选文库,得到一段大小为1088 bp的DNA序列,该序列含有两段大小分别为122bp和172bp的内含子,经同源比...
关键词：
琯溪蜜柚 BAC文库 粒化 文库筛选
[期刊] 中国农业科学
[作者]
佘文琴 潘东明 林河通
【目的】探讨琯溪蜜柚[Citrus grandis(L.)Osbeck cv.Guanximiyou]果实成熟过程中汁胞粒化与活性氧代谢的关系。【方法】以易发生汁胞粒化的老龄树和不易发生汁胞粒化的适龄树的琯溪蜜柚果实为材料,研究成熟过程中果实汁胞MDA、H2O2、木质素含量,活性氧清除酶(POD、SOD、CAT)活性和内源抗氧化物质(AsA、GSH)含量的变化。【结果】与不易发生粒化的适龄树果实相比,易发生汁胞粒化的老龄树果实汁胞成熟过程中,汁胞粒化指数、H2O2、MDA和木质素含量增加,AsA和GSH含量减少,SOD活性前期减少后期增加,CAT活性增加,POD活性显著增加。【结论】琯溪蜜柚果...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
钟凤林 郭志雄 林琳 马传营 潘东明
以琯溪蜜柚汁胞为材料,采用cDNA克隆方法进行Beta-tubulin cDNA的克隆和表达.结果表明:琯溪蜜柚果肉Beta-tubulin cDNA全长1636 bp,有完整的阅读框,编码444个氨基酸;5′非翻译区60 bp,3′非翻译区243 bp(不包含终止密码子TAA),其中包括1个多聚腺苷酸化信号AATAAA以及1个含21个腺苷酸的poly(A)尾.由琯溪蜜柚果肉Beta-tubulin cDNA推导的氨基酸序列与陆地棉(Gossypium hirsutum)、大豆(Glycine max)、杨属植物(Populus)等的同源性较高,分别为86%、85%、84%等.通过构建重组质粒...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
王绍华 龙春瑞 李进学 高俊燕 彭抒昂 王自然 赵俊 寸待泽 李晶 周东果 张金智 岳建强
为探明琯溪蜜柚花粉授粉对水晶蜜柚的直感效应,以琯溪蜜柚花粉为父本对水晶蜜柚进行授粉,以自然授粉为对照,并从授粉后果实坐果率、果实生长速率及果实理化性状三方面研究授粉对水晶蜜柚的直感效应。结果显示:1)人工授粉显著提高了水晶蜜柚的坐果率,坐果率提高了37.80%;2)人工授粉在一定程度上加快了果实纵径和果实横径的增长速率,降低了果实果形指数、果基长度及果基长与果实纵径的比值;3)人工授粉显著改变了果实中心柱形态和中心柱宽度,人工授粉果实中心柱形态为实心,自然授粉果实中心柱形态为空心,人工授粉果实上部、中部和
关键词：
琯溪蜜柚 水晶蜜柚 授粉 直感效应
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
佘文琴 赵晓玲 潘东明
以琯溪蜜柚未授粉的自交果和授粉的杂交果果皮为材料,研究果实粒化过程中授粉处理对果皮细胞膜透性、膜脂过氧化作用等生理生化指标的影响.结果表明:随着果实成熟,自交果汁胞粒化指数和果皮相对电渗率逐渐上升,膜脂过氧化产物(MDA)逐渐积累,同时保持在较高水平;过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活性较高;而还原型谷胱甘肽(GSH)和抗坏血酸(AsA)含量则较低.相反,杂交果的汁胞粒化指数随着果实成熟变化不大,在果实成熟粒化过程中,其果皮相对电渗率较低,维持较低的POD、CAT酶活性和MDA含量,保持较高的AsA和GSH含量.因此,授粉处理能减轻琯溪蜜柚果实汁胞粒化;较大的果皮相对电渗率、较高的果...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
王平 吕柳新 薛勇彪 曾黎辉 黄代青 肖华山
用荧光显微技术对王官溪蜜柚 (Citrusgrandis cv.Guanximiyou)和度尾蜜柚 (Citrusgrandiscv.Duweimiyou)自交和互交亲和性进行了观察 .发现两品种自交和互交花粉在柱头上都萌发正常 .自交花粉管进入柱头组织后 ,大部分在伸长过程出现破裂 ,伴随有内容物渗出 ,在花柱道内缘有胼胝质出现 ,但仍有部分花粉管能正常生长进入子房 ,并从胚柄处进入胚珠 ,在珠心组织里 ,观察到胼胝质的积累 ,其中大多数王官溪蜜柚和少数度尾蜜柚胚珠的胚囊位置出现强烈的荧光亮点 .而互交的胚珠中没有观察到这些现象 .由此可见 ,两品种的自交组合在花粉管进入柱头组织 ,直至进入...
关键词：
王官溪蜜柚 度尾蜜柚 自交 互交 亲和性
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
陈兴煌 郑明锋 陈慧斌 王则金
在3 mg.kg-1臭氧中处理20 m in后贮藏于13℃的冷库中,并采用气调包装(MAP)(气体组成:5%O2+95%N2),可以使柚子果肉贮藏期延长到30 d;当包装容器中O2含量下降到5%以下时,O2含量对菌落总数的影响不显著(P>0.05).因此,采用5%O2+95%N2的气体组成进行MAP,可较好地贮藏鲜切柚子果肉.
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
蓝炎阳 高剑龙 曾润颖 王少峰
以琯溪蜜柚为材料,用不同质量浓度的海藻寡糖浸泡处理采收后的果实,并在6±1℃冷库贮藏,在不同贮藏时间后,测定琯溪蜜柚的好果率、总糖、有机酸、木质素、可溶性固形物和维生素C等指标.结果表明,琯溪蜜柚在6±1℃冷库中贮藏120 d,海藻寡糖涂膜处理组的好果率均高于对照组,160和120 mg·L-1海藻寡糖处理组的好果率分别为94%和90%,而对照组的好果率为67%.经海藻寡糖处理后,可减少果实总糖、有机酸、木质素、可溶性固形物和维生素C的损耗,提高果实贮藏后的硬度,延长蜜柚的保鲜期和货架期,具有良好的保鲜效果.
关键词：
海藻寡糖 蜜柚 保鲜
[期刊] 中国农业科学
[作者]
郑嫩珠 陈晓燕 卢立志 朱志明 缪中纬 辛清武 陈晖 肖天放
【目的】分离半番鸭羽色相关基因,探索半番鸭羽色基因表达调控的分子机制。【方法】以半番鸭白羽皮肤和黑羽皮肤分别作为试验组(tester)和驱动组(driver),利用双链特异性核酸酶(duplexspecificnuclease,DSN)介导的均一化消减杂交方法,构建半番鸭羽色相关基因消减cDNA文库,同时采用实时荧光定量PCR方法对文库质量进行验证。【结果】①从文库中随机选取144个阳性克隆进行测序分析,最终共获得64条有效序列,平均长度为1 031 bp;经BLAST比对发现,21条具有同源序列,且同源性平均为92.8%;43条未找到匹配序列,推测可能为羽色相关新基因;②Geneontolo...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
毛瑞鑫 鲁翠云 刘福军 赵莹莹 谷晶晶 常玉梅 梁利群 孙效文
利用磁珠富集和放射性杂交相结合构建了中华绒螯蟹基因组微卫星文库。并利用生物素标记的(GA)12探针进行微卫星片段的富集。将得到的片段与pGEM-T载体连接后转入DH5α大肠杆菌中,然后利用γ-32P同位素标记的(GA)12探针进行第二次筛选。结果共获得微卫星基因组文库1 500个菌,杂交前菌落PCR检测阳性克隆率为62.5(;杂交后得到的阳性克隆为447个,占29.8(。经测序,有248个克隆含有重复次数大于5次的微卫星序列。在得到的微卫星序列中,重复单元除GA/CT外,还观察到三碱基、四碱基重复单元。根据侧翼序列设计引物164对,选择合成50对,通过优化PCR反应条件,结果有21对引物可扩增...
关键词：
中华绒螯蟹 微卫星 磁珠富集
[期刊] 中国农业科学
[作者]
郭刚刚 董国清 周进 达瓦顿珠 袁兴淼 张京
【目的】从大麦BAC文库中快速筛选包含目的基因HvGW2的阳性BAC克隆。【方法】构建BAC文库三维混合池,设计2对HvGW2特异性引物,进行BAC文库筛选,对含有目的基因HvGW2的阳性BAC克隆进行测序,获得编码大麦GW2蛋白的基因组DNA序列,并与禾本科中的GW2进行同源进化分析。【结果】构建了大麦BAC文库的三维混合池160个,文库空载率为0.18%;筛选到含HvGW2的阳性BAC克隆3个,其中,BAC克隆196M02包含完整编码该基因的序列;HvGW2包含8个外显子和7个内含子,具有与其它植物GW2相似的结构特征和保守的功能结构域;同源进化分析结果显示,大麦与小麦的GW2蛋白同源性最...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
贾玉艳 陈宏 邓继先
BAC(bacterialartificialchromosome,细菌人工染色体)是一种新发展起来的构建高等生物基因组文库的重要方法。由于关中奶山羊产奶性能好,成为制备乳腺生物反应器的理想动物之一,故对关中奶山羊BAC文库的构建条件进行了研究。用BamH 部分酶切关中奶山羊的基因组,用CHEF(箝位匀强电场)凝胶电泳分离大片段DNA,以电透析法回收DNA后,与酶切脱磷的pBeloBAC11载体连接,然后电激转化感受态细胞DH10β,得到了数千个阳性克隆,插入片段平均为30～40kb。在此过程中摸索了BAC载体制备、高分子量DNA制备、酶切、连接和电激转化等一系列环节对高效转化产生大片段DN...
[期刊] 华北农学报
[作者]
王文生 王省芬 马峙英 张桂寅
以黄萎病菌诱导下差异表达的棉花抗病相关基因片段PR8为探针,利用杂交方法,对优质、抗病海岛棉品种Pima90-53 BAC文库进行筛选。从30 336个BAC克隆中筛选到含有PR8基因片段的4个阳性克隆,分别为127K13,128D14,169J3和178C5。用Sau3AI对其中的169J3克隆进行酶切,回收2~4 kb的DNA片段并连接到载体pUC118BamHI-BAP上,构建了含有该基因片段的亚克隆文库,共含有4 224个克隆。经电泳检测,插入片段在1~3 kb,平均为2 kb。该亚克隆文库的构建为克隆PR8基因奠定了基础。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
唐超西 龚明波 李顺鹏 朱昌雄
【目的】构建草酸青霉菌I1的cDNA文库,筛选溶磷相关基因。【方法】利用SMART技术构建草酸青霉菌I1的初级cDNA文库,通过难溶磷培养基筛选具有溶磷能力的转化子,测序并进行生物信息学分析。在难溶磷液体培养基中,进行转化子对溶液pH值、可溶磷含量的影响和产有机酸试验。【结果】成功构建了草酸青霉菌I1的初级cDNA文库,其库容量约为5.29×106cfu.mL-1,重组率为99%;利用难溶磷固体培养基筛选,得到具有溶磷圈的转化子48个,其中转化子I-4的cDNA序列全长536 bp,为一个新的序列,基因编码氨基酸残基序列长129 n.t。转化子E.coli HST08 I-4在液体难溶磷培养基...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
赵圣国 王加启 卜登攀 刘开朗 朱雅新 周凌云
【目的】从奶牛瘤胃微生物BAC文库中筛选含乙酰CoA羧化酶(ACCase)基因的克隆子,并对其全长测序和生物信息学分析。【方法】利用PCR序列驱动筛选法,从瘤胃微生物BAC文库中筛选ACCase基因,鸟枪法测定基因序列后,进行基因注释、比对和系统发育分析。【结果】筛选得到了含ACCase基因的克隆(U12),其插入片段序列(URE12)全长43 358 bp,GC含量为43.75%,经GeneMark程序预测含有38个基因,经Signature程序预测属于变形菌门。ACCase基因(Acc-32)编码159个氨基酸,与Elusimicrobium minutum的ACCase基因具有41%的相...
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