- 年份
- 2024(7021)
- 2023(9831)
- 2022(7697)
- 2021(6863)
- 2020(5827)
- 2019(12555)
- 2018(12985)
- 2017(23825)
- 2016(13697)
- 2015(15575)
- 2014(15768)
- 2013(14750)
- 2012(13422)
- 2011(11984)
- 2010(12106)
- 2009(11565)
- 2008(11361)
- 2007(10606)
- 2006(9384)
- 2005(8932)
- 学科
- 济(46651)
- 经济(46559)
- 管理(42034)
- 业(37578)
- 企(30853)
- 企业(30853)
- 中国(16459)
- 制(16444)
- 财(16076)
- 农(16052)
- 方法(14564)
- 业经(13556)
- 体(12828)
- 学(12667)
- 数学(11599)
- 数学方法(11449)
- 农业(10542)
- 银(10307)
- 银行(10262)
- 行(9791)
- 务(9477)
- 体制(9468)
- 财务(9437)
- 财务管理(9414)
- 融(9353)
- 金融(9345)
- 地方(9145)
- 理论(9133)
- 企业财务(8940)
- 环境(7803)
- 机构
- 大学(191678)
- 学院(191098)
- 济(72657)
- 经济(70872)
- 研究(68710)
- 管理(65506)
- 理学(55220)
- 理学院(54560)
- 管理学(53424)
- 管理学院(53095)
- 中国(51999)
- 科学(43103)
- 京(41188)
- 财(38812)
- 农(38409)
- 所(35942)
- 研究所(32388)
- 江(31611)
- 中心(31055)
- 业大(30709)
- 农业(30318)
- 财经(29309)
- 经(26443)
- 北京(25388)
- 范(25004)
- 院(24856)
- 师范(24624)
- 州(24322)
- 省(23695)
- 技术(22948)
- 基金
- 项目(126202)
- 科学(98276)
- 研究(91459)
- 基金(90264)
- 家(80112)
- 国家(79440)
- 科学基金(66751)
- 社会(57520)
- 社会科(54305)
- 社会科学(54295)
- 省(50794)
- 基金项目(46977)
- 教育(42516)
- 自然(42469)
- 划(42463)
- 自然科(41462)
- 自然科学(41445)
- 自然科学基金(40668)
- 编号(37018)
- 资助(35614)
- 成果(32228)
- 重点(29115)
- 制(27514)
- 部(27345)
- 课题(27234)
- 发(26962)
- 创(26164)
- 创新(24679)
- 国家社会(24173)
- 性(23915)
共检索到301275条记录
发布时间倒序
- 发布时间倒序
- 相关度优先
文献计量分析
- 结果分析(前20)
- 结果分析(前50)
- 结果分析(前100)
- 结果分析(前200)
- 结果分析(前500)
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
何靖玄 黄丽华 黄妤 张学文
线粒体琥珀酰辅酶A转移酶(SCOT)含有4个酪氨酸残基,其4、76位点酪氨酸(Tyr4、Tyr76)的硝基化可导致其酶活性下降,制备特定的抗体可对其硝基化水平和位点进行检测。应用淋巴细胞杂交瘤技术,以化学合成的含琥珀酰辅酶A转移酶硝基化Tyr4和Tyr76肽段为半抗原,偶联钥孔血蓝蛋白(KLH)后,作为免疫原免疫Balb/c小鼠,分离免疫鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得了多株融合细胞。经对融合细胞多次筛选和检测,最终获得4株单克隆抗体,分别对应SCOT Tyr4和Tyr76硝基化后表位,其间接ELISA检测效价分别达到1∶128 000、1∶32 000、1∶512 000和1∶4 ...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
马延森 李晓 陈志 兰向丽 武小椿 靳亚平 刘伟
【目的】制备抗果蝇组蛋白乙酰转移酶Atac2的单克隆抗体,为进一步研究Atac2基因的功能提供重要的试验工具。【方法】PCR扩增果蝇Atac2蛋白N端前26个氨基酸的编码基因,构建GST-Atac2融合蛋白表达载体pGEX-Atac2。转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3),进行诱导表达,通过GST亲和层析法纯化GST-Atac2融合蛋白。以GST-Atac2为抗原免疫8周龄的Balb/c小鼠,取脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞融合,间接ELISA法检测阳性孔,经有限稀释法亚克隆,筛选单克隆杂交瘤细胞株,检测抗体的特异性、效价和亚型,并检测其亲和常数。【结果】PCR扩增获得了目的片段。成功...
关键词：
果蝇 Atac2 原核表达 单克隆抗体
[期刊] 林业科学研究
[作者]
胡艳红 杨璞 陈晓鸣 徐冬丽
白蜡虫脂酰辅酶A还原酶(FAR1)参与了体表蜡泌物的形成过程,为了进一步研究FAR1的功能,通过预测分析基因far1编码的蛋白结构,选取亲水性强、特异性好的一段合成多肽作为抗原肽,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并以BCA蛋白浓度试剂盒测定抗体浓度,通过SDS-PAGE考马斯亮蓝染色观察纯化抗体的纯度,以ELISA检测抗体效价。结果表明,纯化所得的多克隆抗体纯度高,抗体浓度0.7 mg·mL-1,抗体效价为1:512 000,为后续FAR基因功能的研究奠定基础。
[期刊] 华北农学报
[作者]
胡骁飞 魏凤仙 李青梅 职爱民 王方雨 孙亚宁 柴书军 付晓鹤
通过细胞融合建立分泌抗植酸酶单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株。采用体内诱生腹水法制备单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定。结果表明,筛选出2株杂交瘤细胞,其中,5C3细胞株产生单抗亚型为IgG1型,效价为1∶(1.02×106),IC50=100.07 ng/mL,亲和常数为6.70×109L/mol,与市售常规植酸酶、包被植酸酶及浓缩植酸酶的IC50分别达到130.43,126.16,125.33 ng/mL,交叉反应率分别为76.72%,79.32%和79.84%。与高温失活(100℃水煮5 min)的麸皮植酸酶、普通植酸酶、包被植酸酶及浓缩植酸酶IC50分别为4 205.45,4 01...
关键词：
植酸酶 杂交瘤 单克隆抗体 ELISA
[期刊] 华北农学报
[作者]
滕蔓 罗俊 王秋霞 王丽 张改平
以纯化的谷胱甘肽转移酶标签蛋白(GST)免疫Balb/C小鼠,取免疫鼠脾细胞与NS0骨髓瘤细胞按常规方法融合,用纯化的GST经间接ELISA筛选,阳性孔经3次有限稀释法亚克隆,最终获得2株抗GST的单克隆杂交瘤细胞株,分别命名为4B7-E4和4B7-F4。间接ELISA检测4B7-E4、4B7-F4细胞培养上清的效价分别为1∶4 000、1∶3 000,腹水效价分别为1∶3×106和1∶2×106。Western-blot结果表明,这两株单抗均可以特异性地识别GST蛋白和带有GST标签的融合蛋白。
关键词：
GST 单克隆抗体 间接ELISA
[期刊] 中国农业科学
[作者]
董飞 祭芳 吴季荣 殷宪超 徐剑宏 史建荣
【目的】克隆Tri101并通过原核表达获得纯化蛋白,通过免疫SPF大白兔获得高效价、高灵敏度的多克隆抗体,为Tri101蛋白及转Tri101作物的检测提供抗体基础【。方法】以禾谷镰刀菌(Fusarium graminearium)F3210为材料,PCR法获得Tri101并连接至表达载体pET29a(+),将重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)后利用IPTG进行诱导表达。利用纯化表达产物制备多克隆抗体。【结果】SDS-PAGE分析结果表明,Tri101在大肠杆菌BL21(DE3)中得到表达,重组蛋白大小为50 kD左右,以包涵体形式存在。利用HisTrap亲和柱纯化重组蛋白,最佳咪唑洗脱...
[期刊] 华北农学报
[作者]
宋艳华 胡波 范志宇 彭伟 魏后军 薛家宾 徐为中 王芳
为了筛选兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白(VP60)的特异性单抗,并进一步分析单抗识别表位的分布情况,将重组杆状病毒r Ac V-Bac-VP60接种Sf9昆虫细胞,收获细胞培养物,电镜观察显示重组VP60蛋白获得有效表达,并可组装成病毒样粒子(VLPs)。将RHDV VLPs作为免疫原与等量弗氏佐剂乳化,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经3次亚克隆后,获得11株能稳定分泌抗RHDV VLPs抗体的阳性杂交瘤细胞株。间接ELISA、IFA和Western Blot鉴定结果表明,这11株单克隆抗体均能够特异地识别RHDV VLPs和天然RHDV。11株单抗均为Ig G1...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张鸯 陶明亮 路保通 靳亚平
【目的】制备抗Zhangfei蛋白的单克隆抗体,并鉴定其特性。【方法】用Zhangfei融合蛋白免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0融合,筛选出阳性克隆,应用有限稀释法筛选抗Zhangfei蛋白的单克隆杂交瘤株;采用腹水诱生法制备单抗腹水,用饱和硫酸铵法纯化腹水抗体;采用间接ELISA、单克隆抗体亚型检测试剂盒、免疫印记技术、曲线拟合方案等分别鉴定单抗效价、亚型、特异性和亲和力等特性。【结果】免疫小鼠的血清抗体效价达1∶5 000以上,细胞融合克隆率为98.96%,阳性克隆率为30.18%,筛选出2株抗Zhangfei蛋白的单克隆杂交瘤细胞,其培养上清效价均达到1∶800,腹水单...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
蔡勤仁 曾振灵 杨桂香 陈杖榴 方炳虎
碳二亚胺法合成了2种恩诺沙星(enrofloxacin,ENFX)人工抗原ENFX-BSA和ENFX-OVA,用紫外扫描和分析载体蛋白的氨基酸组成等方法对人工抗原进行鉴定,ENFX与BSA的结合比约为48∶1。用ENFX-BSA免疫BALB/C小鼠,采用显微克隆技术最终筛选出2株特异性分泌细胞2C5和5D5并获取腹水,纯化后腹水效价分别为1∶3200和1∶6400。2C5和5D5均属IgG2a型抗体。单抗5D5间接竞争ELISA(Ci-ELISA)的工作浓度为1∶1000,ENFX的抑制曲线在0.13～10 000 ng·ml-1之间线性关系良好(r =-0.9782),检测限(LOD)为0....
关键词：
恩诺沙星 单克隆抗体 交叉反应
[期刊] 水产学报
[作者]
宋晓玲 黄倢 史成银
小鼠骨髓瘤细胞系SP2 / 0与经溶藻弧菌 (1.15 87)免疫的BALB/C雌鼠脾细胞在PEG条件下融合 ,有4 5 .8%的培养孔有杂交瘤细胞生长 ,其培养上清液抗体阳性率为 77.4 %。经反复有限稀释法克隆杂交瘤细胞 ,获得 7株抗溶藻弧菌的单克隆抗体杂交瘤细胞株 ,分别为 :AC1-C9,AC1-C11,BB4-D4,AD1-A3 ,AD1-F3 ,AD2 -E7,AD2 -F7。取AD1-F3 扩大培养 ,注射小鼠 ,制备了抗溶藻弧菌的单克隆抗体腹水 ,滴度为 1∶10 0 0。该腹水与其他 3株溶藻弧菌菌株有强交叉反应 ,与其他 13株标准菌株无交叉反应。利用制备的单抗腹水 ,...
关键词：
单克隆抗体 溶藻弧菌 酶联免疫吸附试验
[期刊] 水产学报
[作者]
沈锦玉 Thompson K D Adams A Galina Jeney 钱冬 沈智华
Aeromonas hydrophila septicemia was a serious infectious disease occurred in China.The majority harmed fish was crucian carp(Carassius auratus gibelio).It was reported that immune prevention was the effect measure to prevent this disease using A.hydrophila bacterin.So it is necessary to develop mono...
关键词：
银鲫 免疫球蛋白 单克隆抗体
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
沈涛 沈永林 何国声 徐梅倩 顾越星
用大片吸虫分泌排泄 (ES)抗原免疫BALB/c小鼠 ,取其脾细胞与SP2 / 0骨髓瘤细胞融合 ,经筛选和 3次克隆化培养后获得 2株分泌抗大片吸虫ES抗原单抗的杂交瘤细胞 (F5,F9)。经传代、冻存、复苏培养检测和染色体检查 ,证实其分泌单抗的性质稳定。通过间接ELISA试验证明 ,F5和F9单抗能与大片吸虫、肝片吸虫的ES抗原发生特异性反应 ,而不与它们的虫体抗原反应。SDS PAGE电泳和Western blot显示 ,F5McAb能与ES抗原的相对分子质量为 2 6 0 0 0～ 2 80 0 0的蛋白条带反应 ,而不与其可溶性虫体抗原反应。表明F5McAb有ES抗原特异性 ,是一...
关键词：
大片吸虫 分泌排泄抗原 单克隆抗体
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
杨笑笑 杨兴淼 刘亚林 曹瑞兵
[目的]制备日本脑炎病毒prM蛋白的特异性单克隆抗体，对进一步了解prM的结构和功能、开发特异性检测方法以及JEV prM蛋白的功能研究奠定基础。[方法]将prM基因克隆至原核表达载体pET-32a，诱导表达并纯化prM重组蛋白，随后将其免疫小鼠，通过细胞融合和亚克隆得到分泌抗prM单克隆抗体的杂交瘤细胞株，制备腹水并进行效价测定，通过Western blot和IFA验证其特异性，并进行空斑中和试验测定其中和活性，利用原核表达多段截短体蛋白确定单克隆抗体抗原表位并进行保守性分析，将其初步应用于感染检测及亚细胞定位分析。[结果]经细胞融合和三次亚克隆后成功获得1株能稳定分泌抗prM单克隆抗体的细胞株，命名为4H6，所制备的腹水效价可达到1∶1638400，经鉴定该抗体重链属于IgG2b，轻链为κ型。Western blot以及IFA试验均证明该抗体具有良好的特异性。空斑减少中和试验显示4H6不具备中和活性。通过表达截短蛋白鉴定出4H6所识别的抗原表位位于30GENRCWVRAIDVGYMC45，结合生物信息学分析发现该表位位于prM蛋白表面且在JEV不同毒株之间高度保守，有利于抗原抗体的直接接触。并成功将4H6初步应用于JEV感染检测及prM蛋白亚细胞定位分析。[结论] 成功制备1种高效且特异性的JEV prM蛋白单克隆抗体，抗原表位识别区位于pr，为分析prM蛋白在病毒复制过程中的生物学功能以及与其他病毒蛋白（如E蛋白或宿主分子）之间的相互作用提供有效工具。
[期刊] 水产学报
[作者]
朱春华 刘荭 刘晓东 杨金先 郑在予 林天龙
以纯化的中华鳖虹彩病毒为抗原免疫Balb/C小鼠,取免疫鼠脾细胞经杂交融合获得了8个能稳定分泌抗中华鳖虹彩病毒特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。单克隆抗体亚级份分析结果表明,M ab2A4属IgA,M ab8E1是IgG2a,其他的6株单抗M ab1D3、M ab2H1、M ab3A1、M ab4B5、M ab5E1和M ab6F2均为IgG1。酶联免疫吸附剂测定(ELISA)分析表明,8株单抗均能特异性地识别中华鳖虹彩病毒,与EPC、CO、FHM等宿主细胞不产生交叉反应,腹水抗体的ELISA效价在105~106。IFA分析表明,8株单抗中仅M ab5E1没有免疫荧光反应特性,其余7株单抗均能对...
关键词：
中华鳖 虹彩病毒 单克隆抗体 抗原
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
秦绍钊 何月秋 李旻 雷屈文 王光勇 丁元明
基于多种生物信息学软件综合预测烟草环斑病毒(TRSV)外壳蛋白抗原表位所在的结构域,明确了该外壳蛋白抗原表位可能位于C端319～328、384～388、420～430、480～487、495～511位氨基酸残基附近。通过RT-PCR扩增出了目的片段,构建了TRSV外壳蛋白原核表达载体,表达的TRSV外壳蛋白外源融合蛋白具免疫活性。采用杂交瘤细胞技术,利用外源融合蛋白制备了单克隆抗体,制备的抗血清可与TRSV外壳蛋白基因原核表达产物发生免疫反应。检验结果表明,制备的抗血清具较好的特异性,可应用于TRSV的检疫检验。
文献操作()
导出元数据
文献计量分析
导出文件格式：WXtxt
删除
