采用平板淀粉凝胶分析技术，对５种不同遗传背景、７种不同取样处理的玉米材料进行酯酶（ＥＳＴ）、谷草转氨酶（ＧＯＴ）、过氧化氢酶（ＣＡＴ）９个位点的等位基因表达特异性的研究。结果表明，在不同遗传材料之间ＥＳＴ差异明显；同一单株不同组织样品之间ＥＳＴ差异不大；３个ＧＯＴ，２个ＣＡＴ位点的基因在不同的组织样品之间存在明显的表达时序性，基因表达受到发育阶段的控制；ＣＡＴ２基因的表达受光照诱导，ＧＯＴ１基因的表达受低温刺激诱导，以上５个位点的等位基因在各种遗传材料之间差异不大；正常胞质与不育胞质对等位酶基因的表达在苗期没有影响。

【目的】研究鸭Rab6基因序列并进行序列分析,揭示该基因的组织特异性表达规律。【方法】运用RT-PCR技术获得鸭Rab6基因序列,并用半定量RT-PCR方法研究该基因的组织特异性表达规律。【结果】从35周龄母鸭脂肪组织中克隆了Rab6基因的cDNA序列,大小为761bp,包含1个627bp完整开放阅读框,编码208个氨基酸。该序列与小鼠、狗、人等物种的Rab6有86.1%～93.1%的同源性,而相应蛋白的同源性达97.6%以上。蛋白预测的分子量为23534D,等电点预测为5.42,该蛋白在78～102氨基酸处有1个跨膜结构,这些特征与人、小鼠、狗等物种高度相似。半定量RT-PCR研究结果显示,...

对包括白细胞介素-2（interleukin-2）在内的细胞因子具有调控作用。本研究克隆得到长度为1685 bp的鲤（Cyprinus carpio）CISH基因（cytokine inducible SH-2 containing protein，CISH）的cDNA全长序列，开放阅读框（ORF）长666 bp，编码221个氨基酸，预测蛋白质分子量为24.91 kD。鲤CISH具有典型的SOCS家族结构特征，含有N区、中央SH2结构域和C端SOCS box结构域。系统进化分析表明，鲤CISH与同属鲤科的草鱼和斑马鱼的亲缘关系最近。鲤CISH基因的mRNA表达水平在血液中最高，肝脏中最低。嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）刺激后，鲤CISH在血液中表达量在12-24 h出现显著上升，在第48 h恢复正常水平，暗示鲤CISH在抵抗细菌感染过程中起作用。

水稻LIR1是LIR(light-induced rice)蛋白家族的一员,受光与生物钟的调节,在植物光反应及生物节律性调控方面有重要作用。为了研究水稻LIR1的生理功能,利用半定量RT-PCR技术对水稻‘珍汕97B’LIR1基因做了根、叶鞘、叶片及穗的组织特异性表达分析,同时构建了启动子的GUS基因融合表达载体LIR1∷GUS转化烟草,利用GUS组织化学染色检测GUS基因在烟草组织器官中的表达情况。研究结果表明:LIR1基因在水稻叶片中的表达量较高,而在叶鞘、穗与根中表达量较低;GUS染色主要集中在叶片组织及茎中,而在植株的根部不显色。

【目的】构建具有大豆蛋白酶抑制剂BBi基因反向重复结构的ihpRNA种子特异性表达载体,并将其转入根癌农杆菌中,为大豆品质改良奠定基础。【方法】采用PCR技术克隆大豆蛋白酶抑制剂BBi基因的正义和反义片段、大豆种子特异性启动子7αP和作为内含子的GFP基因片段,分别连入克隆载体pMD18-T Vector中。然后根据植物中ihpRNA原理,以植物表达载体pCAMBIA1301为基础,将组成RNAi载体的4个目的片段分别连入其中,然后利用冻融法转化根癌农杆菌,并进行PCR鉴定。【结果】PCR扩增得到组成RNAi载体的4个目的片段,分别构建成重组克隆载体和ihpRNA种子特异性表达载体p7αP-G...

[目的]对重要农业害虫中华稻蝗(Oxya chinensis)羧酸酯酶(carboxylesterases,Ces)家族基因进行生物信息学分析,并对部分基因的组织表达特性进行研究,为揭示中华稻蝗Ces基因功能及研发新的分子靶标提供依据。[方法]基于中华稻蝗转录组数据库,通过关键词搜索获得Ces基因序列,采用生物信息学方法进行比对拼接、氨基酸序列推导和开放阅读框分析,选择全长序列构建系统发育树,采用在线软件分析中华稻蝗Ces氨基酸序列结构、理化性质、信号肽和N糖基化位点等特征。采用实时定量PCR技术,通过ge Norm与Normfinder软件分析4个候选内参基因β-肌动蛋白(β-actin)、...

As a critical enzyme in secondary metabolism of plant,Phenylanlanine ammonialyase(PAL) has significant meaning to its development and strong tolerance ability against hard.A full-length cDNA of PAL gene was isolated from Phyllostachys edulis through RT-PCR and RACE methods,and named as PePAL1(GenBan...

使用水平淀粉凝胶电泳方法,分析了20尾青海湖裸鲤的背部肌肉、肝脏、心脏和肾脏4种不同组织的13种同工酶(LDH,MDH,ME,CAT,IDH,EST,ACP,POD,HK,PGM,GDH,SOD,GPI)差异表达,并对部分同工酶基因位点及表达酶谱表型进行了初步分析,以期为其种质资源保护和开发以及遗传育种等方面的研究提供基础资料。结果显示,13种酶类中12种在4种组织中表现出明显的组织差异性,仅有ME在4种组织间差异性较小。其中HK以及GDH的组织差异性尤为明显,仅在肝脏组织中表达。同时使用了适用于这13种酶类表达的3种缓冲系统(TC8.0、TC7.0、EBT),共检测到26个基因位点。其中,C...

为了研究冷胁迫处理下的玉米抗坏血酸过氧化物酶的作用,根据GenBank发表的APX基因的ORF序列设计引物,利用RT-PCR从冷胁迫后的玉米自交系(E28)叶片总RNA中经cDNA转化,pMD19-T载体的亚克隆,获得APX基因开放阅读框,长度为753 bp,编码250个氨基酸残基。生物信息学分析显示,APX相对分子质量和理论等电点依次为27.3 kDa和5.56。将携带完整的ORF序列连入表达载体pET-28a(+)中,APX基因经IPTG诱导后高效表达,SDS-PAGE电泳检测到目标蛋白的大小约为27.3 kDa,与预测结果一致。抗盐分析显示,重组大肠杆菌BL21(pET28-APX)的抗...

以玉米自交系B37Ht1与玉米大斑病菌0号小种和1号小种构成非亲和性互作和亲和性互作体系,利用mRNA差异显示(DDRT-PCR)技术研究了互作过程中玉米叶片基因表达的情况。结果表明,非亲和性互作中特有的表达片段7条,较亲和性互作及对照表达明显增强的片段21条,表达明显减弱的18条。对非亲和性互作中特有的表达片段进行克隆、测序及同源性分析,发现它们与已知抗病基因没有同源性。

构建了携带人乳铁蛋白(LTF)基因、绿色荧光蛋白(GFP)基因的乳腺特异性表达载体(pEBL),用脂质体法转染泌乳期莎能奶山羊乳腺上皮细胞,转染后于荧光显微镜下观察GFP表达情况。用G 418对转染细胞进行筛选,获得抗性细胞克隆,并对转染细胞进行PCR检测。结果显示,pEBL构建成功,转染6 h后可观察到细胞有GFP表达,PCR检测阳性克隆细胞转有LTF基因。表明pEBL载体已转染山羊乳腺上皮细胞,为进一步建立转基因动物乳腺生物反应器奠定了基础。

将克隆并测序的鸡卵清蛋白基因5′端调控序列和鸡IL-2基因cDNA,以串联方式置于真核表达载体pcDNA3的CM V启动子下游,构建了鸡输卵管定位表达载体pcDNA3-OVP-IL 2。将真核表达载体pcDNA3-IL 2和构建的输卵管定位表达载体pcDNA3-OVP-IL 2分别转染鸡输卵管上皮细胞,激素诱导72 h后,用淋巴细胞转化试验检测细胞培养液中IL-2的表达水平及生物学活性。结果显示,转染细胞均可表达IL-2,且所表达的IL-2有促进T淋巴细胞转化和淋巴母细胞成熟的活性;转染pcDNA3-OVP-IL 2的输卵管上皮细胞表达产物在1∶256稀释水平下仍具有促进T淋巴细胞转化和淋巴母...

益生菌，因其既无毒副作用和残留问题，又能促进生长、防病治病，还可改 善养殖水体的环境，越来越受到现代水产养殖业的重视。为探究益生菌对氨氮胁迫下半滑舌鳎的非特异性免疫酶活、血液生化指标及相关基因表达是否具有调节作用，实验首先选用枯草芽孢杆菌Y2为益生菌对半滑舌鳎进行饲喂，然后对半滑舌鳎进行氨氮胁迫，胁迫过程中持续饲喂Y2并对相关指标进行监测。其中宏观生长指标结果显示氨氮胁迫组半滑舌鳎体重体长低于非氨氮胁迫组，且在氨氮胁迫及非氨氮胁迫条件下Y2组舌鳎体重体长高于空白组。免疫酶活测定结果显示，氨氮胁迫后半滑舌鳎血清过氧化氢酶（CAT）、酸性磷酸酶（ACP）、过氧化物酶（POD）、碱性磷酸酶（AKP）活性均有所升高；且在氨氮胁迫及非氨氮胁迫条件下饲喂Y2菌株的2组ACP、CAT、和POD活性均高于其相应对照组。血液相关生化指标结果显示，非氨氮胁迫Y2组半滑舌鳎血清中白蛋白（ALB）和球蛋白（GLB）含量略高于对照组，白球比较高，甘油三酯（TG）、胆固醇（CHO）含量差异较小；氨氮胁迫对照组舌鳎血清中ALB、CHO含量下降，GLB含量略有升高，血清中总蛋白（TP）及总脂肪呈下降趋势，且白球比降低，而氨氮胁迫Y2组比空白组舌鳎血清中ALB、TG及CHO含量升高，导致白球比升高。同时氨氮胁迫使血清中丙二醛（MDA）、谷草转氨酶（AST）及谷丙转氨酶（ALT）的含量显著升高，Y2在氨氮胁迫及非氨氮胁迫条件下均可以降低MDA、AST及ALT的含量。相关基因表达结果显示，氨氮胁迫使半滑舌鳎肠、肝脏、肌肉及鳃组织热休克蛋白基因（HSP70）及血红蛋白α1基因（Hb-α1）表达量升高，且HSP70的表达量Y2组高于空白组，其中在肝脏组织中上调最明显，相反氨氮胁迫下Y2组的Hb-α1表达量下降，在肝脏及肌肉组织中下降最明显。此外氨氮胁迫使半滑舌鳎相应组织中生长因子（IGF）的表达量均降低，但在氨氮及非氨氮胁迫条件下Y2组的IGF表达量均高于其空白对照组。综上，Y2可以改善氨氮胁迫对半滑舌鳎的免疫能力、血液生化指标、氧气运输、应激能力及生长等造成的多方面影响，降低氨氮胁迫对半滑舌鳎造成的负面作用。在水产养殖行业中具有良好的应用前景。

【目的】基于橘小实蝇(Bactrocera dorsalis)转录组数据,系统分析橘小实蝇幼虫解毒代谢酶系基因在受到高效氯氰菊酯持续胁迫时的表达模式,鉴定其中起主要作用的基因,并探讨这些基因组织差异表达的生物学意义。【方法】利用q PCR技术检测橘小实蝇幼虫受到高效氯氰菊酯持续胁迫后,30个解毒代谢酶系(GSTs、P450s、CCEs)基因在整虫、中肠以及脂肪体的表达水平变化情况。【结果】在高效氯氰菊酯持续胁迫作用下,橘小实蝇8个GSTs基因中,其m RNA表达量出现明显上调的主要是Delta家族的4个基因,它们在中肠和脂肪体均出现了5.6—32.5倍的过量表达,而其他家族的GSTs基因经高效...

【目的】U-box基因家族广泛存在于植物基因组中，能够编码泛素蛋白酶体系中特异性识别底物的泛素E3连接酶，调控蛋白的修饰和降解，对玉米的生长发育及逆境胁迫应答调控中起着重要作用，因此鉴定玉米U-box基因家族成员及进行基因功能研究具有重要意义。【方法】通过玉米全基因组数据库，利用一系列生物信息学工具对玉米U-box基因家族成员进行鉴定和功能分析。【结果】玉米U-box基因家族共鉴定筛选出76个成员，在玉米全基因组1～10号染色体上均有分布，氨基酸数目大小为94～1353 aa，蛋白等电点数值差距较大，从4.86到8.29不等。基因结构分析结果显示各成员间含有内含子数目不等，其中玉米U-box家族76个成员中共有28个基因无内含子，仅含有1个外显子，占玉米U-box基因总数的36.8%，表明这些基因进化可能源于转座子机制。系统进化分析结果显示水稻、拟南芥、玉米U-box基因分布在亚家族Ⅰ～Ⅸ中，其中亚家族Ⅳ中不含水稻、拟南芥U-box成员，仅含有2个玉米基因ZmPUB41和ZmPUB53，暗示了玉米在历史进化过程中在发生了多次家族基因扩增的同时也经过片段快速变异过程。启动子功能预测分析发现玉米U-box基因在玉米光合作用、植物激素应答以及逆境胁迫等方面发挥相应作用。基因组织表达分析显示玉米U-box基因表达特异性明显，主要在种子的组成型器官中表达，暗示了目标基因可能参与了种子的形成或萌发过程。部分基因如ZmPUB12、ZmPUB18、ZmPUB30、ZmPUB40、ZmPUB75仅在花粉中检测出有表达量，说明其可能参与了玉米花粉粒的形成或受精过程。【结论】玉米U-box基因在玉米的光合作用、生长发育以及逆境胁迫应答等生理活动中发挥了重要作用，为后续对玉米U-box基因功能、蛋白代谢和信号转导等重要调控网络研究提供了理论基础。