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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 崔喜艳  王阔  张继晓  鹿丹  范贝  尹悦佳  刘相国  
【目的】利用双分子荧光互补(BiFC)技术,在烟草叶肉细胞中分析玉米ADP-葡萄糖焦磷酸化酶质体型小亚基(AGPase-bt2)与丙酮酸磷酸双激酶(PPDK1)之间的相互作用。【方法】构建326-CYCHA-AGPase-bt2和326-CYNEE-PPDK1双分子荧光表达载体,转化农杆菌EHA105,瞬时浸染烟草叶肉细胞,激光共聚焦显微镜下观察AGPase-bt2和PPDK1的相互作用。【结果】双酶切试验表明,326-CYCHA-AGPase-bt2、326-CYNEE-PPDK1载体构建正确;PCR结果证实,植物表达载体成功转化到农杆菌EHA105中;浸染烟草叶片后,AGPase-bt2和...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 崔喜艳  张继晓  窦瑶  孙小杰  尹悦佳  刘相国  
【目的】分析玉米胚乳可溶性淀粉合成酶(SSⅠ)与质体型糖酵解途径关键催化酶丙酮酸磷酸双激酶(PPDK1)的蛋白互作关系,揭示可能发生互作的亚细胞位置。【方法】采用酶切连接的方法构建326-CYCHA-ss1和326-CYNEE-ppdk1双分子荧光互补表达载体,转化农杆菌EHA105,瞬时浸染烟草叶片组织,激光共聚焦显微镜下观察SSⅠ和PPDK1相互作用产生的荧光信号。【结果】双酶切试验鉴定表明,326-CYCHA-ss1和326-CYNEE-ppdk1重组载体构建正确;PCR结果证实,植物表达载体成功转化到农杆菌EHA105中;双分子荧光互补试验中,可观测到SSⅠ和PP-DK1相互结合而产生...
[期刊] 水产学报  [作者] 王猛强  黄文文  周飘苹  金敏  邱红  周歧存  
本实验旨在研究不同蛋白质和小麦淀粉水平对大黄鱼生长性能、肝脏糖酵解和糖异生关键酶活性、血清指标、糖原含量及消化酶活性的影响。采用2×3双因素实验设计,共配制6组饲料,包含2个蛋白质水平(41%、46%)和3个小麦淀粉水平(10%、20%、30%),选取初重约为(14.84±0.16)g的大黄鱼900尾,随机分为6组(每组3个重复,每个重复50尾),进行8周的养殖实验。实验结果表明:饲料蛋白质和小麦淀粉水平的交互作用对大黄鱼增重率和特定生长率无显著影响(P>0.05),且在相同的饲料蛋白质水平下,饲料小麦淀粉水平对大黄鱼增重率和特定生长率无显著影响(P>0.05)。饲料蛋白质和小麦淀粉的交互作用...
[期刊] 中国水产科学  [作者] 刘含亮  孙敏敏  王红卫  付佩胜  周庆杰  万文菊  王纪亭  
研究注射葡萄糖对吉富罗非鱼(Oreochromis miloticus)生化指标、胰岛素和糖酵解酶的影响。选取体质量约80 g的吉富罗非鱼150尾,随机分为2个实验组,对照组腹腔注射0.7%的无菌生理盐水,处理组按照30 mg/100 g(体质量)的剂量腹腔注射葡萄糖。结果表明:(1)吉富罗非鱼在注射葡萄糖后1 h血糖达到最高水平,而后显著下降(P<0.05),并显著降低谷草转氨酶水平(P0.05)。(2)肝糖原在葡萄糖注射后的6 h达到最高水平,而后...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 明川  拓昊苑  陶怡  于好强  李晚忱  付凤玲  
【目的】筛选玉米蔗糖非酵解型蛋白激酶2(Sucrose non-fermenting protein kinase 2,SnRK2)的底物蛋白,鉴定其在玉米脱落酸(Abscisic acid,ABA)信号转导中的作用,为进一步解析玉米中ABA介导的非生物逆境抗性机制提供参考。【方法】根据前期研究结果,通过与拟南芥SnRK2已知底物蛋白的序列比对和保守基序分析,从磷酸化水平响应ABA诱导且上调的238个蛋白中预测ZmSnRK2作用的底物蛋白,用酵母双杂交试验验证ZmSnRK2家族成员与候选蛋白的相互作用,分析其在玉米ABA信号转导中的作用。【结果】从前期鉴定的玉米磷酸化水平响应ABA诱导且上调的238个蛋白中,预测出10个ZmSnRK2候选底物蛋白,实际扩增出其中8个蛋白的编码基因以及10个ZmSnRK2基因家族成员。酵母双杂交试验结果表明,GenBank序列号为XP_008666965.1、NP_001142137.1和XP_008656995.1的候选底物蛋白,因自体磷酸化不能用酵母双杂交检测,GenBank序列号为NP_001183680.1的候选底物蛋白可以与ZmSnRK2.1、2.2、2.4、2.5、2.7、2.8、2.10、2.11蛋白相互作用,GenBank序列号为NP_001145831.1和NP_001167942.1的候选底物蛋白分别可以与ZmSnRK2.1和ZmSnRK2.10蛋白相互作用。【结论】NP_001183680.1和NP_001167942.1蛋白是ZmSnRK2家族部分成员的磷酸化底物,是玉米ABA信号转导途径的下游组分;NP_001183680.1蛋白与拟南芥丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶同源,NP_001167942.1蛋白为包含SAM结构域的蛋白,这2个蛋白均涉及许多生理生化过程,说明ZmSnRK2下游的ABA信号转导呈发散状。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 崔喜艳  赵吉元  胡广宇  窦瑶  刘相国  韩四平  
【目的】解析玉米淀粉合成限速酶ADP-葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase-bt2)与糖酵解关键酶甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GPN1)在植物体内是否存在相互作用。【方法】首先克隆获得AGPase-bt2和GPN1基因,然后采用双分子荧光互补技术(BiFC),构建326-CYCHA-AGPase-bt2和326-CYNEE-GPN1双分子荧光表达载体,转化农杆菌EHA105,并用2种载体共同瞬时侵染烟草叶肉细胞,48h后在激光共聚焦显微镜下观察AGPase-bt2与GPN1的相互作用。【结果】AGPase-bt2基因长1 428bp,GPN1基因长1 497bp。双酶切鉴定结果表明,326-CYCHA-...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 崔喜艳  赵吉元  胡广宇  窦瑶  刘相国  韩四平  
【目的】解析玉米淀粉合成限速酶ADP-葡萄糖焦磷酸化酶(AGPAse-bt2)与糖酵解关键酶甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GPN1)在植物体内是否存在相互作用。【方法】首先克隆获得AGPAse-bt2和GPN1基因,然后采用双分子荧光互补技术(biFC),构建326-CYCHA-AGPAse-bt2和326-CYNee-GPN1双分子荧光表达载体,转化农杆菌eHA105,并用2种载体共同瞬时侵染烟草叶肉细胞,48H后在激光共聚焦显微镜下观察AGPAse-bt2与GPN1的相互作用。【结果】AGPAse-bt2基因长1 428bP,GPN1基因长1 497bP。双酶切鉴定结果表明,326-CYCHA-...
[期刊] 渔业科学进展  [作者] 董兰芳  张琴  程光平  许明珠  童潼  熊向英  
分别以葡萄糖、蔗糖、糊精、玉米淀粉和糊化玉米淀粉为糖源配制成5种等氮等脂饲料,对初始体重为(31.24±0.58)g的卵形鲳鲹(TrachinoTus ovaTus)进行为期56 d的饲养实验,比较不同糖源饲料对卵形鲳鲹生长、体组成、血液指标和糖酵解酶活力的影响,筛选出最有利于生长的糖种类。结果显示,不同糖源对卵形鲳鲹增重率(Wg)和特定生长率(sgr)均有显著影响(P
[期刊] 水产学报  [作者] 王菲  李向飞  李贵锋  刘文斌  
本实验研究了饲料中不同糖脂比对建鲤幼鱼生长、体组成、消化及糖酵解能力的影响。实验共配制6组等氮等能的半纯合饲料,对应糖脂比分别为2.3、3.0、4.0、5.6、7.7和12.1。将鱼饱食投喂8周,每日投喂3次。实验结果表明,当饲料糖脂比从2.3升高至7.7时,增重率、特定生长率、蛋白质效率比和氮保留率均显著升高(P0.05);饲料系数的变化趋势与其相反。建鲤幼鱼的脏体比以及全鱼、胴体和肝脏脂肪含量随着饲料糖脂比的降低均显著升高(P0.05)。肠道淀粉酶活性随着糖脂...
[期刊] 水产学报  [作者] 尚常花  朱顺妮  袁振宏  吕鹏梅  王忠铭  
1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)是光合作用中的一个关键酶,其小亚基rbcS具有调控羧化反应催化效率和影响该酶对二氧化碳/氧气底物特异性的功能。从巴夫杜氏藻中克隆rbcS基因及其5′-上游序列,并对基因及5′-上游序列进行了分析。根据已知rbcS基因保守核苷酸序列设计引物,分别克隆到1 841 bp的DNA和380 bp的cDNA序列。以此为基础,使用染色体步移(Genome walking)和cDNA末端快速扩增(RACE)技术,获得了799bp的5′端DNA序列和500 bp的3′端cDNA序列。序列分析发现,巴夫杜氏藻rbcS DNA全长为2 031 bp(不包括476...
[期刊] 中国农业科学  [作者] 张博文   赵丽雯   徐璐   李盼   曾凡力   孟亚南   董金皋  
【目的】Cks1(cyclin-dependent kinase subunit 1)是细胞周期蛋白依赖性激酶复合体CDK(cyclin-dependent kinase)的结构亚基,是细胞周期调控过程中的关键基因。论文旨在鉴定玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica)StCks1,分析玉米大斑病菌附着胞发育过程中StCks1表达量差异及其互作蛋白,为进一步研究StCks1在附着胞发育中的作用打下基础。【方法】通过对玉米大斑病菌野生型菌株01-23全基因组数据分析,获取StCks1蛋白序列;利用软件MEGA 5.0和在线数据库Pfam、SMART对酿酒酵母、裂殖酵母和拟南芥等物种Cks1蛋白进行系统发育树构建和保守结构域分析;收集玉米大斑病菌附着胞发育不同时期样品进行转录组测序以及表达量分析。利用原核诱导表达系统,构建原核表达载体pGEX-6p-3-StCks1,并转化大肠杆菌表达菌株BL21,对重组蛋白GST-StCks1诱导表达纯化;通过GST pull-down、Western blot技术和酵母双杂交试验,鉴定StCks1的互作蛋白。【结果】玉米大斑病菌全基因组中鉴定到唯一StCks1蛋白编码基因,该蛋白由130个氨基酸组成;其三级结构主要由4股β折叠和3个α螺旋构成,含有HxPEPH(His-anyPro-Glu-Pro-His)保守位点和Cks保守结构域;通过转录组测序和表达量分析发现,StCks1在附着胞发育不同时期表达量显著上调;重组蛋白GST-StCks1在1 mmol·L-1 IPTG,30℃诱导2 h可获得大量可溶性蛋白;通过GST pull-down技术获取大量互作蛋白并进行质谱鉴定,通过Western blot和酵母双杂交试验,验证StCks1与细胞周期蛋白依赖性激酶CDK1存在互作。【结论】玉米大斑病菌中含有唯一的StCks1,通过与细胞周期蛋白依赖性激酶CDK1互作调控附着胞的发育。
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 芮琪  张列峰  徐朗莱  
研究了小麦叶片内1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rub isco,EC 4.1.1.39)大亚基(LSU)由53 000裂解为50 000的反应。结果显示,成熟叶片的粗提液在pH 5.5的条件下反应后能检测到50 000的裂解产物,而暗诱导衰老叶片的粗提液在pH 7.5的条件下也能发现LSU的这一降解。分别从成熟叶片和衰老叶片中提取叶绿体,以其裂解液为反应体系研究LSU由53 000裂解为50 000这步反应的细胞器定位。结果显示,衰老叶片中的叶绿体裂解液在pH 7.5时反应1 h后能检测到50 000降解产物,而成熟叶片叶绿体裂解液在pH 5.5和pH 7.5的条件下反应后均未检测到LS...
[期刊] 中国农业科学  [作者] 侯昌亮  王靖博  李永强  吴华  马志卿  冯俊涛  张兴  
【目的】克隆辣根素可能的作用位点——细胞色素C氧化酶亚基Ⅲ(COXⅢ)的全长CDNA,并对其进行序列分析及原核表达。【方法】在NCBI数据库中查找玉米象(SItOphIluS zeAmAIS)COXⅢ已知的部分序列,利用Rt-pCR,结合RACe技术克隆获得玉米象COXⅢ全长序列;利用DNAmAN8.0、meGA5.1、GeNeDOC、pROt pARAm和tARGet p 1.1 SeRveR等软件对该基因全长CDNA序列、系统进化关系、基本理化性质及其三维结构进行分析;将玉米象COXⅢ基因分别与载体p eASY-BluNt e1、pet28A、pet30A、p et32A、pet42A连接...
[期刊] 沈阳农业大学学报  [作者] 杜金峰  张万忠  王云山  苏志国  
研究不同预处理方法对玉米秸秆酶解和乙醇发酵的影响。比较玉米秸秆经粉碎、汽爆和水热3种预处理后酶解液葡萄糖含量、酶解率、乙醇得率以及发酵液中抑制物乙酸、糠醛和羟甲基糠醛的含量,对不同预处理方法进行评价。结果表明:水热超细玉米秸秆能有效提高酶解率,在固液比2:10,酶解48h时,生成葡萄糖含量为60.6g.L-1,纤维素酶解率为63.13%,并且产生的乙酸、糠醛和羟甲基糠醛的含量很低;以此水解液发酵生产乙醇,乙醇含量为28.29g.L-1,乙醇得率为46.68%,为理论乙醇得率的91.5%。说明采用水热超细秸秆可有效提高纤维素酶解率和乙醇得率。
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 雷治海  C R Barb  R R Kraeling  
研究了急性能量阻断对血清促黄体素和葡萄糖的影响。选用美国佐治亚州雅森斯当地杂交青年母猪 2 0头 ,体重(5 9 7± 10 2 )kg ,12 0~ 130日龄。实验前两周摘除卵巢 ,随机分为 4组 ,每组 5头 :①生理盐水组 (对照 ) ;②糖酵解抑制剂组 (2 脱氧 D 葡萄糖 ,2DG ,40 0mg·kg-1) ;③脂肪酸氧化抑制剂组 (巯基乙酸盐 ,MA ,2 0 0mg·kg-1) ;④ 2DG +MA组。通过颈静脉给药。给药前 2h至给药后 6h经颈静脉导管每 15min采血样一次。次日分离血清后 ,用葡萄糖氧化酶试剂盒定量分析血清葡萄糖浓度 ,用放射免疫分析法 (RI...
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